周航宇，王文麒，曹碧晏，鄒 利，邱炳勛，陳玉寶，祝慧鳳，俸 珊

(西南大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400715)

馬蘭為菊科植物馬蘭Kalimerisindica(L)Sch.的全草，在我國分布廣泛。研究表明，其具有抗炎和促進(jìn)胃腸排空作用[1-2]，我國西南地區(qū)也常有食用馬蘭來緩解小兒疳積。目前，尚未見其能改善幼鼠胃腸功能的報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)，研究馬蘭對(duì)幼鼠胃腸功能的影響，以期為其改善幼鼠胃腸功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為將馬蘭進(jìn)一步開發(fā)成小兒健胃/脾口服液提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1試劑原兒茶酸、丁香酸(成都克洛瑪生物科技有限公司，純度>98%)。馬蘭購自成都荷花池中藥材市場(chǎng)，馬蘭提取液的制備方法如下：干燥馬蘭100 g，加入1 L水，浸泡0.5 h，煎煮1 h，紗布過濾，收集濾液；再加入500 mL水，煎煮1 h，過濾，合并濾液，濃縮至馬蘭濃度為1 g·L-1，待用。TRIzol試劑盒購自美國Invitrogen公司；PrimeScript?RT reagent Kit、SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ購于大連寶生物工程有限公司；Real-time PCR引物由上海生工生物工程公司合成。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3～4周齡SD大鼠，♂，體質(zhì)量(100±20)g；家兔，♂，體質(zhì)量(2.0±0.5)kg,均購自重慶中藥研究院，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXD (渝) 2013-0006。

1.3儀器BI-420生物機(jī)能儀(成都泰盟科技有限公司)；安捷倫1200 HPLC(安捷倫科技有限公司)。

2 方法

2.1馬蘭水提取液指紋圖譜的建立色譜柱Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm ) ；流動(dòng)相：0.5%甲酸-水；B：乙睛；檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm； 柱溫：30.0℃； 流速：0.7 mL·min-1； 進(jìn)樣量10 μL；梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?B 0 min→105 min,13%→70%)。

2.2馬蘭水提取液等對(duì)家兔離體回腸自主收縮的影響[3]制備家兔離體腸管，生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄正常小腸張力值，然后分別加入馬蘭水煎液(0.05、0.1、0.2 kg·L-1)、丁香酸(2.5、5.0、10.0 μmol·L-1)、原兒茶酸(2.5、5.0、10.0 μmol·L-1)，并記錄張力值。

2.3阿托品對(duì)馬蘭增強(qiáng)回腸收縮力的影響除了硫酸阿托品(M受體阻斷劑，5 mg·L-1)先加入浴管5 min外，其余方法同“2.2”。

2.4馬蘭水提取液對(duì)幼年大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)以及胃腸功能的影響32只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和馬蘭給藥組(0.5、1.0、2.0 g·kg-1)。連續(xù)給藥14 d，期間每日記錄大鼠的體質(zhì)量、飲水量、攝食量。末次給藥后，采用灌胃碳末阿拉伯膠法測(cè)得胃排空率和小腸推進(jìn)率。

2.5小腸鈉葡萄糖共同轉(zhuǎn)運(yùn)體1(sodium/glucosecotransporter1,SGLT1)的表達(dá)稱取適量回腸組織，TRIzol提取總RNA，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書制成cDNA。所得cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，檢測(cè)SGLT1的表達(dá)水平。

3 結(jié)果

3.1馬蘭提取物指紋圖譜馬蘭水提取液所含成分較多，其中原兒茶酸含量為67 mg·g-1，丁香酸含量為223 mg·g-1。

3.2家兔離體回腸平滑肌張力大小的變化馬蘭水提取液呈劑量依賴性地促進(jìn)家兔離體回腸平滑肌張力(P<0.01)，而原兒茶酸和丁香酸在10 μmol·L-1濃度范圍內(nèi)對(duì)平滑肌張力無明顯影響(Tab 1)。阿托品對(duì)馬蘭增強(qiáng)回腸收縮力無影響(Tab 2)。

3.3大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)及胃腸功能變化馬蘭水提取液有促進(jìn)大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)的趨勢(shì)，但對(duì)其日攝食量和飲水量無影響。但可明顯加強(qiáng)大鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率(P<0.05)。

3.4大鼠小腸SGLT1mRNA表達(dá)的變化馬蘭水提取液能增強(qiáng)大鼠回腸和空腸SGLT1 mRNA的表達(dá)(P<0.05)。

4 討論

本研究證實(shí)，馬蘭提取液給藥14 d可加強(qiáng)胃腸排空速率，有促進(jìn)體質(zhì)量增長(zhǎng)的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，馬蘭水提取液還能上調(diào)大鼠回腸和空腸葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體SGLT1 mRNA的表達(dá)，表明馬蘭可通過促進(jìn)葡萄糖吸收發(fā)揮健脾作用，而相關(guān)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

Tab 1 Effects of Kalimeris indica(L) Sch.extract, protocatechuic acid and syringate on contraction of isolated ileal smooth muscle of rabbits

**P<0.01vscontrol

Tab 2 Influence of M receptor blocker on up-regulation of tension induced by Kalimeris indica(L) Sch.extract

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

參考文獻(xiàn)：

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