羅蘭萍，馬飛英

(廣東石油化工學(xué)院，廣東 茂名 525000)

蘋果醋是以蘋果汁為原料，先后經(jīng)過(guò)酵母菌與醋酸菌種發(fā)酵，得到的具有的酯香和蘋果汁特有的果香融合在一起的醋酸溶液，兼具水果和食醋的營(yíng)養(yǎng)、保健功能，具有預(yù)防心腦血管疾病、消除疲勞、美容等功效，用其調(diào)配的果醋飲料受歡迎程度頗高；蘋果醋飲料則是以蘋果醋溶液、果汁、水為原料，并加入其他食品添加劑而調(diào)配成的飲料[1-3]。食品添加劑是在食品加工過(guò)程中，為了改善食品色、香和味或?yàn)榉栏?、保鮮和加工工藝的需要而加入的人工合成或者天然物質(zhì)，糖精鈉是一種國(guó)際通用、性價(jià)比較高的食品添加劑，其甜度約為普通甜味劑的500倍，在各類食品加工中得到廣泛的應(yīng)用[4-5]。糖精鈉價(jià)格低廉, 添加方便, 故使用面很廣。但如不嚴(yán)格控制添加量，過(guò)量食用會(huì)對(duì)人體造成危害，因此必須對(duì)市售食品的添加劑情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)[6]。目前檢測(cè)糖精鈉的方法有高效液相色譜法[4-8]、紫外分光光度計(jì)法[9-11]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[12]、比值導(dǎo)數(shù)法[13]。本研究采用高效液相色譜法建立了蘋果醋飲料中糖精鈉含量的測(cè)定方法，該方法不需要對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理，且定量準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，檢測(cè)時(shí)間短，檢測(cè)成本低，為蘋果醋飲料中甜味劑的檢測(cè)提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇(色譜純)：瑞典Oceanpak公司；氨水(優(yōu)級(jí)純)：廣州化學(xué)試劑廠；乙酸銨(色譜純)：上海譜振生物科技有限公司；糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；蘋果醋酸飲料：購(gòu)于茂名市沃爾瑪超市。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20A型高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器)：日本島津公司；101C-2B型電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司；YP402N型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；0.45μm微孔濾膜(有機(jī)系及水系)：天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；GM-0.33A型隔膜真空泵：天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；ULUP-Ⅰ-10T臺(tái)上式超純水機(jī)：優(yōu)普公司；KQ5200E型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 流動(dòng)相的配制

準(zhǔn)確稱取1.56 g固體乙酸銨，用超純水溶解后定容至1000 mL的容量瓶，并通過(guò)0.45μm微孔濾膜(水系)抽濾，得到0.02 mol/L的乙酸銨溶液。

甲醇溶液與0.02 mol/L的乙酸銨溶液均經(jīng)過(guò)抽濾、超聲脫氣處理備用。

1.3.2 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.0851g(120℃烘干4 h)糖精鈉，加0.02 mol/L乙酸銨溶液溶解，定容至100 mL，得到糖精鈉濃度為1. 0 mg/ mL的標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備溶液，待用。

分別吸取100、200、500、1000、2000μL的儲(chǔ)備溶液于10 mL容量瓶中，用0.02mol/L乙酸銨溶液定容至刻度，搖勻，得到濃度為10、20、50、100、200μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液，供高效液相色譜儀測(cè)定。

取與上述糖精鈉不同批次的標(biāo)準(zhǔn)品，用同樣的方法配置糖精鈉濃度為50μg/mL的糖精鈉溶液，待用。

1.3.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取市售的6種蘋果醋飲料10 g(精確至0.001 g)于燒杯中，常溫下超聲脫氣30 s。用氨水(1+1)調(diào)節(jié)pH值至中性，用0.02 mol/L乙酸銨溶液定容至25 mL，取適量樣品，經(jīng)0.45μm針筒式濾膜過(guò)濾器過(guò)濾，濾液等待上機(jī)分析。取濾液10μL注入高效液相色譜儀，按標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間定性，用外標(biāo)法求出濾液中糖精鈉的濃度。

1.3.4 液相色譜條件

色譜柱：C18反相色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.02 mol/L乙酸銨溶液；流動(dòng)相流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；進(jìn)樣量：10μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相對(duì)待測(cè)物的洗脫能力隨著流動(dòng)相中所含極性溶液比例的變化而變化。本實(shí)驗(yàn)所選用的流動(dòng)相體系為甲醇-0.02 mol/L乙酸銨溶液，適當(dāng)調(diào)整甲醇與0.02 mol/L乙酸銨的配比能改善糖精鈉的峰形，縮短分離時(shí)間。

采用等度洗脫的方式，保持其他實(shí)驗(yàn)條件不變，考察甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液的配比(分別為5∶95、6∶94、7∶93)對(duì)糖精鈉分離效果影響，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果所得，增大流動(dòng)相中甲醇的比例能有效縮短糖精鈉的出峰時(shí)間。甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液的配比為5∶95時(shí)，出峰時(shí)間較慢，達(dá)32min 左右；甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液的配比為7∶93時(shí)，出峰時(shí)間明顯縮短至16.5min 左右，且峰形好。為能較快得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果并節(jié)省甲醇用量，實(shí)驗(yàn)選擇甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液配比為7∶93的流動(dòng)相。吸取10μL濃度為100μg/mL的糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定性檢測(cè)。從圖1中可知，糖精鈉的出峰時(shí)間16.5min。

圖1 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
Fig.1 Chromatogram for sodium saccharin

2.2 方法的線性范圍與檢測(cè)限

選擇10、20、50、100、200μg/mL五個(gè)濃度為標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度點(diǎn)，每個(gè)濃度點(diǎn)重復(fù)測(cè)量3次，記錄色譜峰的面積，取3次峰面積的平均值。以糖精鈉的濃度x為橫坐標(biāo)、峰面積的平均值y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到糖精鈉的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)；為驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性，采用另一批次的糖精鈉配制的溶液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，將濃度為50μg/mL的糖精鈉溶液在相同的實(shí)驗(yàn)條件下重復(fù)測(cè)定3次，得平均值為47.13μg/mL，偏差為1.8%。同時(shí)，逐漸降低樣品中糖精鈉溶液的添加量，按1.3.3中方法處理加標(biāo)后的樣品，以所得峰面積相當(dāng)于基線噪音的3倍(S/N=3)計(jì)算糖精鈉的檢出限[14]。表1所示的結(jié)果表明，糖精鈉濃度在10～200μg /mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為y=21651x+14756，相關(guān)系數(shù)R2= 0.9992，檢出限為0.008 g/kg。

表1 線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限

2.3 加標(biāo)回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)空白樣品進(jìn)行加標(biāo)，在未檢出含有糖精鈉的蘋果醋飲料中加入不同體積的糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其所含糖精鈉濃度分別為10、50、200μg/mL，按1.3.3的方法進(jìn)行前處理后注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，低中高三個(gè)加標(biāo)濃度均平行測(cè)定7次，結(jié)果見(jiàn)表2。本方法在低中高不同濃度水平的回收率在90.56%與100.60%之間，RSD不超過(guò)5%，回收率高，結(jié)果重現(xiàn)性好。

表2 空白樣品中加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2(續(xù))

2.4 樣品測(cè)定

按照1.3中的方法，對(duì)6種市售蘋果醋飲料樣品(編號(hào)1～6)中的糖精鈉含量進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品測(cè)定3次，得到各樣品的色譜圖，記錄色譜圖峰面積，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中糖精鈉含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，6種樣品中只有一種檢出含有糖精鈉，其余5種均為未檢出。

表3 蘋果醋飲料中糖精鈉含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

通過(guò)利用高效液相色譜法對(duì)蘋果醋飲料中糖精鈉進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)單、目標(biāo)峰出峰快、耗時(shí)少且回收率與精密度都良好，是一種理想的測(cè)定方法。

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(本文文獻(xiàn)格式：羅蘭萍，馬飛英.高效液相色譜法測(cè)定蘋果醋飲料中糖精鈉含量[J].山東化工,2018,47(7):70-72.)