王彩步，段寶忠

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.為百合科黃精屬多年生草本植物，藥用其根莖，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎等功能〔1〕。滇黃精為中國(guó)藥典黃精基原植物之一，主產(chǎn)于云南，習(xí)稱“大黃精”，其質(zhì)量較佳〔2〕，是云南重要的道地藥材〔3-4〕。現(xiàn)代藥理研究表明其在降血糖〔5〕、抗 HIV〔6〕、抗氧化〔7〕等方面具有顯著活性，其中黃精多糖是其主要活性成分，為藥典質(zhì)量控制指標(biāo)。云南作為滇黃精的道地產(chǎn)區(qū)〔8〕，滇黃精產(chǎn)量大，具有顯著資源優(yōu)勢(shì)和巨大開(kāi)發(fā)潛能〔9〕。近年來(lái)，隨著滇黃精野生資源日漸枯竭，人工種植已成為其主要來(lái)源〔10〕，云南省滇黃精種植基地規(guī)模日益擴(kuò)增。目前，對(duì)滇黃精研究已有多方面的文獻(xiàn)報(bào)道〔11-12〕，但針對(duì)云南不同種植基地的滇黃精質(zhì)量評(píng)價(jià)鮮見(jiàn)報(bào)道。鑒于此，本文對(duì)云南省11個(gè)不同種植基地的滇黃精多糖含量進(jìn)行了測(cè)定評(píng)價(jià)，以期為云南人工種植滇黃精藥材質(zhì)量提供一定參考。

1 儀器和材料

1.1 儀器UV-5500紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；HH-S2S數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海暉創(chuàng)化學(xué)儀器有限公司）；GH-252電子天平（日本AND）；AL204電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；FY135型中草藥粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司）；Millipore純水處理系統(tǒng)等。

1.2 材料滇黃精樣品于2017年采收期采自云南省不同種植基地。樣品經(jīng)大理大學(xué)段寶忠副教授鑒定為百合科植物滇黃精P.kingianum Coll.et Hemsl.的根莖，樣品洗凈切片后先自然干燥，再經(jīng)60℃恒溫干燥至恒重。D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院（批號(hào)110833-201506，純度＞98%）；苯酚、硫酸、乙醇等試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法

2.1 對(duì)照品溶液的制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每l mL中含無(wú)水葡萄糖0.33 mg）。

2.2 供試品溶液制備取60℃干燥至恒重的滇黃精細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.3 苯酚溶液的制備精密稱取苯酚2 g，加少量蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100 mL，搖勻備用。

3 結(jié)果與討論

3.1 參比波長(zhǎng)的選擇本研究在400～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)以空白溶劑為參比進(jìn)行掃描，掃描結(jié)果顯示對(duì)照品溶液和供試品溶液均在487 nm處有最大吸收波長(zhǎng)，故本實(shí)驗(yàn)選定487 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品溶液（A）和滇黃精多糖溶液（B）掃描圖

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至1.0 mL，搖勻，在冰水浴中準(zhǔn)確緩緩滴加1 mL 2%苯酚溶液，再迅速滴加5 mL濃硫酸溶液，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見(jiàn)分光光度法（中國(guó)藥典附錄，通則0401），在487 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：A=28.94C+0.07（r=0.999 3）。樣品檢測(cè)量在0.004 7～0.026 8 mg∕mL范圍內(nèi)與吸光度線性良好。

3.3 精密度試驗(yàn)精密稱取S7樣品0.25 g，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，同法連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算含量，RSD分別為0.24%和0.28%，表明儀器精密度良好。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取S7樣品0.25 g，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，然后分別于0、10、30、50、70、90、120 min，同法測(cè)定，計(jì)算含量，RSD為1.26%，表明供試品溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn)取S7號(hào)樣品，精密稱定6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，同法測(cè)定。計(jì)算含量，RSD為0.85%，表明方法重復(fù)性良好。

3.6 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取S7樣品0.25 g，共6份，精密加入葡萄糖對(duì)照品適量，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算含量，結(jié)果表明加樣回收率值分別為98.6%、100.3%、98.2%、99.7%、101.3%、99.4%，平均回收率為99.7%，RSD為1.26%，符合分析要求。

3.7 樣品含量測(cè)定精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至1.0 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無(wú)水葡萄糖的重量（mg），計(jì)算，即得結(jié)果。見(jiàn)表1。

表1 不同種植基地滇黃精中黃精多糖含量測(cè)定

4 結(jié)論

目前植物多糖含量測(cè)定的方法主要有HPLC法〔12〕、苯酚-硫酸法〔13〕、蒽酮-硫酸法〔14〕和 3，5-二硝基水楊酸（簡(jiǎn)稱DNS）法〔15〕氣相色譜法〔16〕等。由于多糖在強(qiáng)酸作用下水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛，糠醛與酚性物質(zhì)如苯酚縮合形成有色化合物，反應(yīng)迅速、安全，有色物質(zhì)穩(wěn)定〔17〕。本研究使用D-無(wú)水葡萄糖作為對(duì)照品，采用苯酚-硫酸顯色法，建立了滇黃精總多糖含量測(cè)定的方法，結(jié)果顯示有色物生成量與黃精多糖濃度存在良好的線性關(guān)系。波長(zhǎng)掃描篩選結(jié)果顯示487 nm為滇黃精多糖含量測(cè)定最佳波長(zhǎng)。本研究結(jié)果顯示本法操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，靈敏度高，可用于滇黃精中多糖含量的測(cè)定。

對(duì)云南省不同種植基地的滇黃精中黃精多糖含量的測(cè)定結(jié)果顯示，11批樣品中，除S4號(hào)樣本中多糖含量未達(dá)到《中國(guó)藥典》（2015年版）的含量要求（7%），可能與該藥材部位較為幼嫩有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本采集尋找相關(guān)因素。其余10批滇黃精藥材，黃精多糖含量均符合要求，其中S7、S8、S9、S11等4批樣本含量較高，在12.48%～14.28之間。本研究表明人工種植的滇黃精藥材質(zhì)量整體較優(yōu)。當(dāng)前滇黃精的資源需求量較大，隨著野生資源的不斷枯竭，人工種植是解決滇黃精資源緊缺的可行措施。滇黃精為典型的喜蔭植物，云南有大量的林地資源可供利用，可在適生區(qū)大力發(fā)展滇黃精種植，建立滇黃精GAP基地，這不僅能夠解決滇黃精藥材緊缺的情況，對(duì)保護(hù)和利用滇黃精野生資源都具有重要意義。

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