郝 杰，姜 潔,*，毛 婷，孫曉冬，楊麗梅，張朝暉，崔鳳云

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（plant growth regulators，PGRs）是一類人工合成的，具有和植物內(nèi)源激素具有相似生理功效和相似化學(xué)結(jié)構(gòu)的化學(xué)合成物[1]。根據(jù)發(fā)揮的生理功效的作用不同，可以分為生長(zhǎng)促進(jìn)劑、生長(zhǎng)抑制劑、生長(zhǎng)延緩劑[2]。已有科學(xué)研究表明，PGRs的使用可使蔬果產(chǎn)量增加5%～30%，國(guó)際上已把PGRs作為21世紀(jì)農(nóng)業(yè)實(shí)現(xiàn)超產(chǎn)的主要措施之一[3]。但PGRs本身也屬于農(nóng)藥的一類，某些化合物也具有明顯的慢性毒性[4]，需要規(guī)范其使用。隨著PGRs的使用日益廣泛，盲目或過(guò)量使用的情況時(shí)有發(fā)生，影響到了農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)安全，例如2011年爆發(fā)的“西瓜爆炸”事件和“激素黃瓜”事件，特別是各種反季節(jié)蔬菜水果的出現(xiàn)尤為突出，個(gè)頭增大、顏色改變、味道平淡、果體畸形等現(xiàn)象加重了人們對(duì)食品安全問(wèn)題的擔(dān)憂[5]。各國(guó)在PGRs的使用上均制定了相關(guān)法規(guī)，我國(guó)在即將實(shí)施的GB 2763—2016《食品中農(nóng)藥最大殘留量》[6]中將作為PGRs使用的農(nóng)藥范圍擴(kuò)大到了14種，使用范圍涉及10余種產(chǎn)品。各國(guó)部分植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的限量值對(duì)比見(jiàn)表1。

表1 各國(guó)植物生長(zhǎng)激素限量值對(duì)比Table 1 Comparison of maximum residue limits for plant growth regulators among different countries mg/kg

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè)定目前主要方法有酶聯(lián)免疫法[10]、氣相色譜法[11]、氣相色譜-質(zhì)譜法[12-13]、液相色譜法[14]、液相色譜-質(zhì)譜法[15-19]。其中液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為分析領(lǐng)域最有力的技術(shù)手段，具有前處理靈活簡(jiǎn)便、無(wú)需衍生化反應(yīng)、能夠達(dá)到較低檢出限和強(qiáng)大的定性能力等優(yōu)點(diǎn)，成為PGRs殘留分析中常見(jiàn)的方法，國(guó)內(nèi)外已有采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定PGRs殘留量的報(bào)道[15-18]，但這些報(bào)道涉及化合物種類不多，極少能夠涵蓋3大類PGRs。前處理技術(shù)上，已有包括液液微萃取[20]、低溫液液分配[21]、微波輔助萃取[22]、固相萃取法[23]等。QuEChERS法最初用于果蔬中農(nóng)藥殘留檢測(cè)，后被推廣至更大的檢測(cè)范圍和基質(zhì)中，成為農(nóng)藥殘留快速前處理技術(shù)的首選[24-29]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化QuEChERS（quick, easy, cheap, effective, rugged, safe）各類填料的不同配比，優(yōu)化超高效液相色譜-質(zhì)譜（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）條件，考察精密度、靈敏度、回收率等指標(biāo)，建立了QuEChERS-UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定蔬果中34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的方法。本方法快速、靈敏，可滿足高通量測(cè)定水果中多種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的殘留，可為建立其他基質(zhì)中相關(guān)化合物殘留檢測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇、乙腈、甲酸、甲苯（均為色譜純）美國(guó)Fisher公司；三鍵鍵合硅膠C18粉末、石墨化炭黑（graphitized carbon black，GCB）粉末 美國(guó)Waters公司；N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）、增強(qiáng)型基質(zhì)去除EMR（enhanced matrix remove）粉末 美國(guó)Agilent公司；氧化鋯包覆硅膠（Z-sep）粉末 美國(guó)Sulpeco公司；無(wú)水硫酸鎂、醋酸鈉、氯化鈉、二水合檸檬酸鈉、三水合二檸檬酸二鈉、硫酸鈉（均為分析純） 北京化學(xué)試劑廠。

34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品：吲哚乙酸（CAS：87-51-4）、吲哚丁酸（CAS：133-32-4）、α-萘乙酸（CAS：86-87-3）、2,4-二氯苯氧乙酸（CAS：94-75-7）、2,4-二氯苯氧乙酸乙酯（CAS：533-23-3）、4-氯苯氧乙酸（CAS：122-88-3）、2-萘氧乙酸（CAS：120-23-0）、6-芐基腺嘌呤（CAS：1214-39-7）、吲熟酯（CAS：27512-72-7）、氯吡脲（CAS：68157-60-8）、環(huán)丙酸酰胺（CAS：113136-77-9）、玉米赤霉烯酮（CAS：17924-92-4）、赤霉素（CAS：77-06-5）、玉米素（CAS：1637-39-4）、馬來(lái)酰肼（CAS：123-33-1）、脫落酸（CAS：14375-45-2）、噻苯隆（CAS：51707-55-2）、2,3,5-三碘苯甲酸（CAS：88-82-4）、莠去津（CAS：1912-24-9）、西瑪津（CAS：122-34-9）、滅草松（CAS：25057-89-0）、水楊酸（CAS：69-72-7）、三唑酮（CAS：43121-43-3）、胺鮮酯（CAS：10369-83-2）、矮壯素（CAS：999-81-5）、縮節(jié)胺（CAS：24307-26-4）、多效唑（CAS：76738-62-0）、丁酰肼（CAS：1596-84-5）、烯效唑（CAS：83657-22-1）、抗倒胺（CAS：82211-24-3）、抗倒酯（CAS：95266-40-3）、抑芽唑（CAS：76608-88-3）、增甘磷（CAS：2439-99-8）、戊唑醇（CAS：107534-96-3）（純度均大于95%） 德國(guó)Dr. Erenstofer公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Xevo TQ-S三重四極桿質(zhì)譜儀（配有Acquity UPLC儀及電噴霧離子源） 美國(guó)Waters公司；Thermo X1R高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Thermo Fisher公司；Milli Q超純水系統(tǒng) 美國(guó)Millipore公司；GM200刀式研磨儀 德國(guó)Retsch公司；ENVI-氮吹儀 美國(guó)OA公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，分別用乙腈配制成1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，存放在－20 ℃環(huán)境中，可保存6 個(gè)月。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用乙腈稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液或混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.2 樣品前處理

稱取5 g均質(zhì)后的樣品于聚四氟乙烯離心管中，根據(jù)樣品含水量情況，加入適量水，充分渦旋混勻后，加入10 mL乙腈，渦旋提取1 min，加入除水劑（4 g無(wú)水硫酸鎂＋1 g氯化鈉＋1 g二水合檸檬酸鈉＋0.5 g三水合二檸檬酸二鈉），劇烈振搖1 min，如樣品板結(jié)，則視情況加入陶瓷均質(zhì)子。在4 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清液7.5 mL，根據(jù)樣品狀態(tài)，加入不同凈化管中，具體如下：常規(guī)樣品：凈化管含150 mg C18、900 mg MgSO4；高葉綠素樣品：凈化管含150 mg C18、900 mg MgSO4、50 mg GCB，渦旋混勻后加入700 μL甲苯；高花色苷樣品：凈化管含300 mg Z-sep、900 mg MgSO4；高油脂樣品：凈化管含400 mg EMR；凈化管渦旋振搖2 min后，于4 ℃、10 000 r/min離心10 min，取4 mL上清液，在40 ℃條件下用微弱氮?dú)饬鞔抵两桑? mL初始流動(dòng)相溶液復(fù)溶后，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后，上機(jī)測(cè)定。

1.3.3 UPLC-MS/MS條件

色譜條件：色譜柱：Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫：45 ℃；流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為水；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL。梯度洗脫程序如表2所示。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源；正負(fù)離子切換模式；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)分段掃描模式（其中第1段正離子模式0.0～3.0 min，第2段正離子模式3.0～5.5 min，第3段正離子模式7.8～10.0 min，第4段正離子模式5.5～7.8 min，第5段負(fù)離子模式0.0～3.5 min，第6段負(fù)離子模式3.5～6.5 min，第7段負(fù)離子模式6.5～10.0 min）；毛細(xì)管電壓3.00 kV（＋）及2.00 kV（－），錐孔氣流量150 L/h；脫溶劑氣溫度450 ℃；脫溶劑氣流量800 L/h；霧化氣壓力0.7 MPa；34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的定量、定性離子對(duì)、錐孔電壓和碰撞電壓見(jiàn)表3。

表2 梯度洗脫程序Table 2 Gradient elution program

表3 34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的質(zhì)譜參數(shù)Table 3 Mass spectrometric parameters for 34 plant growth regulators

續(xù)表3

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

用甲醇分別配制30 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)蠕動(dòng)泵以10 μL/min注入持續(xù)進(jìn)樣，與0.05 mL/min的流動(dòng)相共同進(jìn)入質(zhì)譜儀中。化合物進(jìn)入電噴霧離子源后，均能夠形成穩(wěn)定的母離子，在一級(jí)質(zhì)譜模式下，調(diào)節(jié)錐孔電壓使得母離子的豐度最大。開(kāi)啟二級(jí)質(zhì)譜后，逐漸增大碰撞能量，觀察記錄離子碎片，選擇相對(duì)豐度較高，出峰穩(wěn)定的碎片，微調(diào)碰撞能量，使得碎片離子的豐度最大。各化合物質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表3，34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在各自優(yōu)化的錐孔電壓下，能夠得到最強(qiáng)的母離子響應(yīng)，同時(shí)在優(yōu)化的碰撞電壓下，可以得到穩(wěn)定、響應(yīng)較強(qiáng)的子離子，對(duì)比得到的兩個(gè)碎片離子，選擇干擾較小、豐度較高的碎片作為定量離子，另一個(gè)作為定性離子。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇

實(shí)驗(yàn)對(duì)比Waters Acquity BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）、Waters Acquity CORTECS C18（50 mm×2.1 mm，1.6 μm）、Waters Acquity CSH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、Thermo Hypersil Gold（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）色譜柱對(duì)待測(cè)組分分離的效果。由于多組分分析方法的建立中需要兼顧極性差異較大的各種化合物，其中，HSS T3可以耐受更高比例的水相，在98%比例的水相條件下可以使得強(qiáng)極性化合物（丁酰肼、矮壯素等）保留更好（表4），同時(shí)在全時(shí)間段上可以均勻出峰，因此，選取Waters Acquity HSS T3色譜柱作為分析柱。

表4 強(qiáng)極性化合物在不同色譜柱上保留時(shí)間對(duì)比Table 4 Comparison of retention time of compounds with high hydrophobicity on different columns min

2.2.2 流動(dòng)相的選擇

由于采取正負(fù)切換離子模式采集，在選擇流動(dòng)相的條件時(shí)，不僅要關(guān)注正離子電離化合物的響應(yīng)，更重要的是負(fù)離子電離化合物在流動(dòng)相影響下的峰形及響應(yīng)情況。實(shí)驗(yàn)選擇了乙腈、甲醇及二者的比例溶液作為強(qiáng)洗脫相；水、含0.1%甲酸溶液、含5 mmol/L乙酸銨溶液、含5 mmol/L甲酸銨溶液作為弱洗脫相，對(duì)其不同搭配進(jìn)行了對(duì)比。

對(duì)比甲醇和乙腈作為流動(dòng)相對(duì)分離的影響，明顯在使用乙腈作為有機(jī)相時(shí)，分離度更好。同時(shí)乙腈作為前處理QuEChERS法的提取溶劑，更有兼容性。對(duì)比不同酸度調(diào)節(jié)劑下的水溶液作為弱洗脫相時(shí)的分離情況，在使用含0.1%甲酸溶液（pH值約為3.6）時(shí)，包括水楊酸、4-氯苯氧乙酸等負(fù)離子電離化合物的定性離子出峰情況均不理想，雖然正離子的電離被增強(qiáng)，但是已經(jīng)超出了檢測(cè)所需的必要度。對(duì)比含有5 mmol/L乙酸銨及甲酸銨溶液及純水作為流動(dòng)相時(shí)的情況，可以看到含有緩沖鹽的情況下，各峰之間的分離度較好，但某些負(fù)離子電離化合物定性離子的出峰情況仍不理想（如水楊酸）。采用乙腈-水作為流動(dòng)相各峰分離度好，負(fù)離子電離化合物也能夠保證定性離子有足夠響應(yīng)，能夠滿足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)所需。圖1為34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的總離子流色譜圖。

圖1 34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑總離子流圖Fig. 1 Total ion current chromatograms of 34 plant growth regulators

2.3 提取溶劑的選擇

乙腈作為QuEChERS法最常用的提取溶劑，具有對(duì)農(nóng)藥優(yōu)良的溶解性，實(shí)驗(yàn)考察不同提取溶劑對(duì)目標(biāo)化合物提取效率的影響，包括乙腈、0.1%甲酸-乙腈、2%甲酸-乙腈、0.1%氨水-乙腈。如圖2所示，乙腈具有較好的提取效率。這是由于目標(biāo)化合物中具有酸性及堿性化合物，采用中性提取溶液可以更好地兼顧二者的提取。根據(jù)樣品狀態(tài)不同，加入適量水可以形成飽和鹽溶液，促進(jìn)化合物的分配平衡向有機(jī)相移動(dòng)，從而提高提取效率。

圖2 提取溶劑對(duì)34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑平均回收率的影響Fig. 2 Effect of extraction solvents on average recoveries of 34 PGRs

2.4 脫水劑及配比的選擇

QuEChERS法經(jīng)過(guò)諸多應(yīng)用，已經(jīng)被證明為農(nóng)藥殘留檢測(cè)的首選前處理方法之一[18-19]。在QuEChERS方法發(fā)展的過(guò)程中，提取步驟所用到的除水劑種類不斷變化，配比也不斷調(diào)整，以達(dá)到最優(yōu)的除水效果和鹽析后的最佳提取效率。本實(shí)驗(yàn)考察了5 種不同的脫水劑及配比對(duì)34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的提取效率，分別為：A. 4 g無(wú)水硫酸鎂＋1 g氯化鈉（原始QuEChERS法）[30]；B. 6 g無(wú)水硫酸鎂＋1.5 g乙酸鈉（AOAC 2007.01法）[31]；C. 4 g無(wú)水硫酸鎂＋1 g氯化鈉＋1 g檸檬酸鈉＋0.5 g三水合二檸檬酸二鈉（CEN 15662法）[31]；D. 4 g無(wú)水硫酸鈉＋1 g氯化鈉（獸藥QuEChERS法）[32]；E. 1.6 g無(wú)水硫酸鎂＋0.4 g氯化鈉（QuEChERS EMR）。在提取管中分別加入0.5 mL 1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入10 mL乙腈和1 mL水（QuEChERS EMR管由于容量限制，加入0.25 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，5 mL乙腈和0.5 mL水），劇烈振搖2 min，渦旋5 min后，離心取上清液0.5 mL與0.5 mL水混勻進(jìn)樣。

圖3 脫水劑對(duì)34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑平均回收率的影響Fig. 3 Effect of different dehydration agents on average recoveries of 34 PGRs

對(duì)比各化合物在不同脫水劑作用下的提取效率（圖3），結(jié)果表明，CEN 15662法的提取效率最優(yōu)，這可能是因?yàn)闄幟仕猁}的存在形成了穩(wěn)定的緩沖體系，使得某些對(duì)pH值敏感的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑能夠被有效提取出來(lái)。故選擇4 g無(wú)水硫酸鎂＋1 g氯化鈉＋1 g檸檬酸鈉＋0.5 g三水合二檸檬酸二鈉作為脫水劑。

2.5 凈化填料及配比的選擇

PSA、C18和GCB是QuEChERS法中最常用的凈化填料，隨著研究的進(jìn)步，不斷有更有針對(duì)性的新型填料被開(kāi)發(fā)應(yīng)用于QuEChERS方法中。例如Supelco公司的Z-sep（氧化鋯包覆硅膠）、Z-sep＋（C18鍵和氧化鋯硅膠）填料[33]，Agilent公司的EMR（增強(qiáng)型基質(zhì)去除）填料[34]等。實(shí)驗(yàn)對(duì)比了凈化填料不同組成和配比對(duì)實(shí)驗(yàn)回收率的影響。具體選擇及配比見(jiàn)表5。

表5 凈化方法優(yōu)化過(guò)程中嘗試的不同組成和配比Table 5 QuEChERS absorbents tested in this study

表5表明，由于目標(biāo)化合物中α-萘乙酸、水楊酸等酸性PGR的存在，因此PSA不適合用于凈化策略當(dāng)中，對(duì)比方案4、7、8、9、10等，雖然都能達(dá)到較好的回收率，但對(duì)于不同狀態(tài)的果蔬基質(zhì)，去除雜質(zhì)干擾的能力依然有不同，且可為互補(bǔ)。方案9僅有除水用MgSO4，對(duì)各類雜質(zhì)均沒(méi)有理想的清除效果；對(duì)于菠菜等葉綠素含量較高的基質(zhì)，方案10中的GCB可以有效清除雜質(zhì)，但對(duì)萘乙酸、吲熟酯、6-BA等平層結(jié)構(gòu)化合物的回收率會(huì)有較大影響，在凈化過(guò)程中加入適量甲苯可以改善回收率；對(duì)于提子、草莓等花色苷含量較高的基質(zhì)，方案8中，氧化鋯包覆硅膠Z-sep基質(zhì)可有效去除花色苷，清除效果非常明顯，且對(duì)回收率無(wú)較大影響；對(duì)于特殊含油脂較高的鱷梨基質(zhì)，EMR粉末可以用于清除其中的脂質(zhì)雜質(zhì)，也可達(dá)到較為滿意的凈化效果；其余常規(guī)的水果蔬菜，如黃瓜、蘋(píng)果、豆芽、梨等不含有較多色素、蠟質(zhì)、脂肪等雜質(zhì)的基質(zhì)，使用MgSO4清除水分、C18填料清除低極性雜質(zhì)后即可測(cè)定。在菠菜、梨、提子、牛油果等典型基質(zhì)中34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑使用不同凈化方案的平均回收率見(jiàn)圖4。

圖4 不同凈化方案的平均回收率Fig. 4 Average recoveries of plant growth regulators by different purification methods

2.6 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)

圖5 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在不同基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)范圍Fig. 5 Matric effect ranges of plant growth regulators in different matrixes

根據(jù)GB 2763—2016[6]中對(duì)水果類別的分類，本方法選取了常規(guī)樣品、高葉綠素樣品、高花色苷樣品、高油脂樣品的代表性基質(zhì)進(jìn)行了方法驗(yàn)證?；|(zhì)效應(yīng)根據(jù)空白加標(biāo)基質(zhì)響應(yīng)值與溶劑標(biāo)樣響應(yīng)值的比值進(jìn)行評(píng)價(jià)?；|(zhì)效應(yīng)大于0時(shí)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，小于0為基質(zhì)抑制。對(duì)于基質(zhì)效應(yīng)過(guò)強(qiáng)的樣品，應(yīng)采取相應(yīng)的處理手段以減小其對(duì)測(cè)定的干擾。圖5為菠菜（高葉綠素樣品）、梨（常規(guī)樣品）、提子（高花色苷樣品）、牛油果（高油脂樣品）等典型基質(zhì)中，測(cè)定得到的34 種化合物基質(zhì)效應(yīng)的范圍?？梢钥闯觯骰|(zhì)對(duì)于植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的基質(zhì)效應(yīng)均較明顯，并且多表現(xiàn)出基質(zhì)抑制效應(yīng)，為消除基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的影響，采取基質(zhì)加標(biāo)曲線進(jìn)行校正。

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在空白梨樣品中添加5、10、20、50、80、100 μg/kg系列水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按前處理步驟處理后上機(jī)測(cè)定，按信噪比3∶1得到目標(biāo)化合物的檢出限，10∶1得到目標(biāo)化合物的定量限。以質(zhì)譜響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，添加量為橫坐標(biāo)，繪制基質(zhì)加標(biāo)工作曲線，得到本方法的線性范圍，回歸曲線方程及相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、檢出限及定量限Table 6 Standard curves, linear ranges, correlation coefficients, LODs and LOQs for 34 plant growth regulators

2.8 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

分別取典型基質(zhì)的空白樣品，包括菠菜（高葉綠素樣品）、梨（常規(guī)樣品）、提子（高花色苷樣品）、牛油果（高油脂樣品），添加低、中、高3 個(gè)水平的34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行前處理，測(cè)定目標(biāo)化合物。每個(gè)水平進(jìn)行6 次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表7，34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的平均回收率為70.6%～118.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%～14.9%。

續(xù)表7

表7 典型基質(zhì)中34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）Table 7 Average recoveries and RSDs of 34 plant growth regulators in typical matrix (n= 6)

續(xù)表7

2.9 方法穩(wěn)定性的考察結(jié)果

變異系數(shù)/%吲哚乙酸 81.47 0.79 84.50 12.28 91.53 1.18 6.02吲哚丁酸 84.97 4.73 91.73 10.58 91.90 1.99 4.42 α-萘乙酸 79.33 2.46 94.47 9.00 83.37 5.94 9.14 2,4-D 84.83 5.29 92.43 9.94 88.93 4.49 4.29 2,4-D乙酯 93.03 2.13 93.43 8.51 92.03 5.33 0.78 4-氯苯氧乙酸 86.87 0.47 92.83 9.77 83.33 3.07 5.48 2-萘氧乙酸 84.37 3.57 91.27 2.69 91.60 5.87 4.58 6-芐基腺嘌呤 92.30 7.35 96.63 10.22 90.10 4.90 3.57吲熟酯 88.00 3.25 75.47 11.78 86.00 10.09 8.10氯吡脲 101.67 5.57 75.87 6.93 89.72 6.39 14.49環(huán)丙酸酰胺 96.57 1.65 88.70 8.98 85.43 4.64 6.34玉米赤霉烯酮 96.10 6.65 95.57 12.70 94.53 3.88 0.83赤霉素 93.67 6.69 99.93 6.43 90.57 2.14 5.04玉米素 89.60 3.03 97.87 8.98 93.10 4.19 4.44馬來(lái)酰肼 89.30 3.05 91.97 7.55 79.60 8.88 7.48脫落酸 87.37 3.21 86.23 0.87 93.50 5.55 4.39噻苯隆 92.93 6.27 94.47 1.86 91.70 7.52 1.49 2,3,5-三碘苯甲酸 88.63 2.01 83.60 3.19 85.80 3.88 2.93莠去津 96.73 7.10 95.03 7.40 90.87 1.23 3.20西瑪津 93.40 1.02 93.13 7.23 90.13 3.43 1.97滅草松 87.40 5.97 85.10 9.11 94.70 6.85 5.63水楊酸 82.37 0.67 100.07 7.72 75.90 3.69 14.53三唑酮 100.83 7.45 100.00 11.54 84.03 2.94 9.97胺鮮酯 89.63 5.92 94.73 9.69 89.27 1.79 3.35矮壯素 92.13 6.96 87.17 13.45 85.57 1.28 3.88縮節(jié)胺 95.40 4.41 86.57 7.18 78.83 3.19 9.54多效唑 88.47 6.70 96.17 12.20 87.67 4.38 5.17丁酰阱 90.17 2.44 77.73 10.92 89.40 2.47 8.12烯效唑 92.33 7.98 96.23 10.80 85.97 3.37 5.66抗倒胺 88.97 3.56 87.27 14.17 77.33 4.25 7.43抗倒酯 101.37 6.23 95.13 6.93 91.60 4.32 5.15抑芽唑 80.20 2.94 94.73 14.00 89.37 5.14 8.34增甘膦 99.93 1.71 92.63 6.13 81.10 2.83 10.41戊唑醇 86.27 4.77 75.63 7.50 93.03 4.09 10.32化合物 平均回收率/%實(shí)驗(yàn)室1 實(shí)驗(yàn)室2 實(shí)驗(yàn)室3 批間變異系數(shù)/%變異系數(shù)/%平均回收率/%變異系數(shù)/%平均回收率/%

通過(guò)將該方法在3 家技術(shù)機(jī)構(gòu)進(jìn)行應(yīng)用，得到在不同條件下實(shí)驗(yàn)結(jié)果的批內(nèi)及批間變異系數(shù)（表8），評(píng)價(jià)方法的穩(wěn)定性。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室均采用3 個(gè)水平的加標(biāo)樣品進(jìn)行6 個(gè)水平的測(cè)定。從得到的結(jié)果可以看出，批內(nèi)及批間變異系數(shù)均小于15%，符合GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》中關(guān)于方法變異系數(shù)的要求。

2.1 0 實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果

隨機(jī)選取市售水果蔬菜150 個(gè)，包括菠菜、芹菜、桃、蘋(píng)果、青椒、桑葚、葡萄、牛油果、柑橘等樣品。 應(yīng)用建立的方法對(duì)樣品進(jìn)行34 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑快速篩查，結(jié)果如圖6所示，小油菜在樣品中檢出多效唑（27.8 μg/kg），在油桃樣品中檢出脫落酸（18.16 μg/kg）等藥物。

圖6 樣品中檢出多效唑、脫落酸的提取離子流圖Fig. 6 Extracted ion chromatograms of paclobutrazol and abscisic acid in positive samples

3 結(jié) 論

利用基質(zhì)分散固相萃取技術(shù)結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)建立了常見(jiàn)水果、蔬菜中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑多指標(biāo)同步定量檢測(cè)技術(shù)，該方法使用QuEChERS技術(shù)，針對(duì)不同的樣品基質(zhì)，選取不同的凈化填料進(jìn)行樣品凈化，使用超高效液相色譜分離，電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜測(cè)定，基質(zhì)匹配外標(biāo)峰面積法定量。得到了良好的方法靈敏度及回收率。相比于已有方法，擴(kuò)大了化合物監(jiān)測(cè)范圍，有針對(duì)性進(jìn)行凈化策略的選擇，也能夠有效降低測(cè)定中的干擾。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法滿足殘留檢測(cè)的技術(shù)要求，可應(yīng)用于食品安全日常監(jiān)測(cè)及突發(fā)事件應(yīng)急處置工作當(dāng)中。

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