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新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所/新疆維吾爾藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆　烏魯木齊　830004

石榴花為石榴科植物石榴PunicagranatumL.的干燥花瓣，是維吾爾族習(xí)用藥材，維語(yǔ)名為阿娜爾、古麗娜。維醫(yī)認(rèn)為其性質(zhì)二級(jí)干寒，具有收斂止瀉，止汗止血的作用，常用于腹瀉日久；外用于治療出血不止，口舌生瘡，脫肛痔瘡，口臭牙疼，皮膚瘙癢[1]。被收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊(cè)》(1999年版)，《中華本草·維吾爾藥卷》(2005年版)。研究發(fā)現(xiàn)，石榴花中含有酚酸類(lèi)，黃酮類(lèi)、揮發(fā)油、萜類(lèi)、葡萄糖、果糖等化學(xué)成分，其中沒(méi)食子酸含量相對(duì)較高[2-3]，具有抗菌、抗病毒、降壓降脂、抗氧化、抗糖尿病、保肝護(hù)肝等藥理活性[4-5]。在石榴花鑒別項(xiàng)中，僅有《維吾爾藥分冊(cè)》中有關(guān)于性狀及顯微鑒別，而無(wú)其他水分、灰分、薄層等鑒別相關(guān)項(xiàng)。隨著市場(chǎng)對(duì)石榴花藥材需求量逐年增加，藥材的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)已成為當(dāng)務(wù)之急。研究通過(guò)對(duì)不同批次石榴花藥材進(jìn)行薄層，顯微定性鑒別，并對(duì)藥材中水分、總灰分、水溶性及醇溶性浸出物進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)測(cè)定數(shù)據(jù)，制定相應(yīng)的限量指標(biāo)，旨在為維吾爾藥材石榴花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器MS105DU型電子天平(METTLER TOLEDO)；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；SXZ-4-10型馬弗爐(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)；KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CX-31型生物顯微鏡(日本OLYMPUS)；YOKO-ZS型紫外分析攝影儀(武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)公司)；CA-1115型冷卻水循環(huán)裝置(上海愛(ài)朗儀器有限公司)；UPC-I-10T型優(yōu)普超純水器(四川優(yōu)普超純科技有限公司)。

1.2材料乙醇(分析純，批號(hào)：20170310，天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠)；甲醇(分析純，批號(hào)：20160721，天津永晟精細(xì)化工有限公司)；乙酸乙酯(分析純，批號(hào)：20160228，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)；石油醚(分析純，批號(hào)：20160608，天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠)；環(huán)己烷(分析純，批號(hào)：20100418，天津市福晨化學(xué)試劑廠)；甲酸(分析純，批號(hào)：20160926，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)；三氯化鐵(分析純，批號(hào)：20130609，天津市化學(xué)試劑三廠)；甲苯(分析純，批號(hào)：20150628，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)；鹽酸(分析純，批號(hào)：20170926，北京化工廠)；沒(méi)食子酸對(duì)照品(分析純，批號(hào)：110831-200803，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；薄層層析硅膠G板(批號(hào)20141225，青島海洋化工有限公司)。石榴花藥材實(shí)地采集或由藥材公司購(gòu)買(mǎi)，均經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所何江副研究員鑒定為石榴的干燥花瓣，憑證樣本存放于新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所標(biāo)本室。

2　方法

性狀通過(guò)對(duì)該藥材外觀、質(zhì)地、斷面、臭、味、測(cè)量等記錄相關(guān)數(shù)據(jù)；水分測(cè)定依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版第四部通則0832水分測(cè)定法烘干法進(jìn)行；灰分測(cè)定依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版第四部通則2302灰分測(cè)定法進(jìn)行；浸出物測(cè)定依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版第四部通則2201浸出物測(cè)定法進(jìn)行；薄層色譜鑒別依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版第四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行；顯微鑒別依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版第四部通則2001顯微鑒別法進(jìn)行。

3　結(jié)果

3.1性狀本品多皺縮，有的破碎，完整者展平后呈卵形或卵圓形或，長(zhǎng)20～30 mm，寬20～25 mm。花瓣紅色或暗紅色，羽狀網(wǎng)脈。主脈基部寬至先端漸細(xì)，頂端圓形，邊緣微波狀，具疏而淺的鈍鋸齒，基部寬碶形或近圓形。薄而質(zhì)脆，易碎。氣微，味苦澀。

3.2顯微鑒別本品粉末紅棕色?；ü诒砥ぜ?xì)胞表面呈類(lèi)多角形或不規(guī)則形。壁波狀彎曲，表面有細(xì)密彎曲的角質(zhì)紋理。側(cè)面觀外壁向外隆起，呈乳突狀，邊緣微波狀。螺紋導(dǎo)管常見(jiàn)，直徑10～20 μm；網(wǎng)紋導(dǎo)管、梯紋導(dǎo)管偶見(jiàn)?；ǚ哿３暑?lèi)圓形或橢圓形，淡黃色或近無(wú)色，直徑14～22 μm ，具3孔溝。薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形或長(zhǎng)圓形。花絲細(xì)胞類(lèi)長(zhǎng)方形，壁薄，表面有紋理。

3.3水分、灰分、浸出物測(cè)定通過(guò)對(duì)10批次維吾爾藥材石榴花進(jìn)行測(cè)定，水分測(cè)定結(jié)果最高為9.36%，最低為6.64%，平均為7.46%，暫定水分不得超過(guò)10%?？偦曳譁y(cè)定結(jié)果最高為14.14%，最低為6.34%，平均為8.54%，暫定總灰分不得超過(guò)15%。浸出物測(cè)定結(jié)果浸出物量最高為65.07%，最低為61%，平均為62.91%，暫定浸出物不得低于55%。

表1　維吾爾藥材石榴花水分、灰分、浸出物測(cè)定(%)

3.4薄層鑒別取本品粉末2 g，加無(wú)水乙醇30 mL，超聲處理60 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使之溶解，即為供試品溶液。取沒(méi)食子酸[3，6-7]作為對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶6∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

4　討論

在浸出物條件篩選過(guò)程中，選取1批次維吾爾藥材石榴花，采用水和醇分別進(jìn)行冷浸法和熱浸法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果顯示水溶性浸出物浸提過(guò)程中熱浸大于冷浸，醇溶性浸出物量遠(yuǎn)大于水溶性浸出物量。設(shè)置乙醇濃度30%、50%、70%、90%、100%五個(gè)濃度梯度，在醇溶性浸出物浸提過(guò)程中隨著乙醇濃度的增加其浸出物量反而減少，當(dāng)乙醇濃度為30%時(shí)，其浸出物量最大。冷醇浸提過(guò)程中浸出物量在26.1%～55.19%之間，熱醇浸提過(guò)程中浸出物量在41.77%～63.04%之間，所以采用30%乙醇對(duì)10批次維吾爾藥材石榴花進(jìn)行熱醇浸提。

薄層鑒別條件篩選過(guò)程中，根據(jù)文獻(xiàn)選取了綠原酸[8-11]和沒(méi)食子酸作為鑒別的對(duì)照品溶液，以綠原酸為對(duì)照品溶液，以不同的展開(kāi)劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果不是很理想，目的斑塊區(qū)分較為困難或是模糊不清，分離度較差。以沒(méi)食子酸作為對(duì)照品溶液，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸與環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸為展開(kāi)劑時(shí)，對(duì)展開(kāi)劑的比例進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，供試品能基本上都能鑒別出來(lái)，與對(duì)照品在相應(yīng)的位置能顯示出相同顏色的斑塊。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，后者作為展開(kāi)劑時(shí)，效果最為理想，所以試驗(yàn)決定采用沒(méi)食子酸作為對(duì)照品溶液，環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶6∶1)為展開(kāi)劑，以1%三氯化鐵乙醇溶液作為顯色劑，結(jié)果可以滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)的要求。最終，以此薄層條件對(duì)10批次維吾爾藥材石榴花進(jìn)行薄層鑒別研究。

研究對(duì)維吾爾藥材石榴花進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，其水分、灰分、浸出物限量測(cè)定，薄層色譜及顯微結(jié)構(gòu)相關(guān)定性鑒別研究，其試驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)為維吾爾藥材石榴花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及評(píng)價(jià)提供科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì). 藥品標(biāo)準(zhǔn)(維藥分冊(cè))[M].烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：19.

[2]蔡霞, 劉悅, 張芳芳,等. 石榴的化學(xué)成分與質(zhì)量控制研究進(jìn)展[J]. 世界科學(xué)技術(shù):中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2014(1):123-129.

[3]李麗蓉, 金晨, 廖輝,等. HPLC法同時(shí)測(cè)定維藥古麗娜中3個(gè)主要活性成分的含量[J]. 藥物分析雜志, 2016(4):611-616.

[4]李海霞, 王釗, 劉延澤. 石榴科植物化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2002, 33(8):765-766.

[5]張立華, 孫曉飛, 張艷俠,等. 石榴花化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009(3):33-35.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典(一部) [M]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：93-94.

[7]熱依木古麗·阿布都拉, 劉力, 阿吉艾克拜爾·艾薩. 新疆石榴花多酚的提取工藝[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(2):1-4.

[8]王曉玲, 梁思琦, 李文君,等. 藏藥雙花千里光中綠原酸的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2016, 42(1):52-55.

[9]王永慧, 孫榮進(jìn), 葉方. 金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜鑒別方法研究[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2012, 09(11):136-137.

[10]蘇麗娜, 張國(guó)英, 鄧穎慧. 板栗殼中沒(méi)食子酸及綠原酸含量的高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2016(7):1607-1609.

[11]張敏捷, 朱萍, 李玎,等. 蘋(píng)果花粉中異鼠李素和綠原酸鑒別及總黃酮測(cè)定[J]. 藥物分析雜志, 2016(4):617-623.