李　志　王偉群　張明亮　姚秀佳　齊淑芳　趙文杰

(佳木斯市中心醫(yī)院心內(nèi)科，黑龍江　佳木斯　154002)

1佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病簡(jiǎn)稱(chēng)冠心病(CHD)，是由于脂質(zhì)代謝異常導(dǎo)致脂質(zhì)沉積于動(dòng)脈內(nèi)膜形成硬化斑塊，隨著斑塊的積累會(huì)逐漸發(fā)展為血管腔狹窄、血流阻塞、心肌缺血，最終導(dǎo)致心絞痛。CHD是發(fā)達(dá)國(guó)家死亡和致殘疾的主要原因之一，盡管在過(guò)去的幾十年里，該病在西方國(guó)家的死亡率呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，但在35歲以上人群中，仍有近1/3的人死于該病〔1〕。當(dāng)前認(rèn)為，CHD患病率增加與快速的城市化、社會(huì)老齡化、慢性疾病、缺乏運(yùn)動(dòng)、吸煙等因素具有相關(guān)性〔2〕。CHD的發(fā)生和發(fā)展受多種因素的影響，其中血管壁的慢性炎癥在促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成、發(fā)展和破裂過(guò)程中起至關(guān)重要的作用〔3〕。本研究旨在探討炎性反應(yīng)與CHD的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1一般資料2013年6月至2016年3月佳木斯市中心醫(yī)院59例CHD患者為CHD組，男31例，女28例，年齡42～84歲；另23例體檢健康者為正常組男10例，女13例，年齡44～83歲。CHD組均經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影等檢查手段確診CHD，排除先天性心臟病、懷孕或哺乳、自身免疫性疾、惡性腫瘤及肝腎功能不全等病變。將CHD患者分為穩(wěn)定型心絞痛(SAP)組20例(男9例，女11例，平均65.7歲)、不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)組21例(男12例，女9例，平均66.3歲)和急性心肌梗死(AMI)組18例(男10例，女8例，平均63.7歲)。

1.2試劑、材料及儀器細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-8和IL-10酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè)試劑盒(博士德，武漢)；移液器(吉爾森，美國(guó))；低溫冷凍離心機(jī)(Beckman；美國(guó))；離心管(Corning，美國(guó))；全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀(BioTek，美國(guó))；恒溫水槽(杰瑞爾電器有限公司，江蘇)。

1.3指標(biāo)檢測(cè)受試者均于清晨空腹采集肘靜脈血3 ml，于2 h 內(nèi)離心(2 500 r/min，15 min)收集血清并保存于-80℃冰箱中。當(dāng)行ELISA檢測(cè)時(shí)，按下述操作流程檢測(cè)IL-8和IL-10含量：將待測(cè)血清及ELISA試劑在冰上解凍；分別將100 μl不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血清樣本吸入96孔酶標(biāo)板中，酶標(biāo)板于37℃恒溫水槽中孵育90 min，甩除板中液體并在濾紙上用力拍擊以盡量去除液體；向各孔中分別吸入100 μl生物素化IL-8或IL-10抗體工作，并于37℃恒溫水槽中孵育60 min；300 μl洗滌緩沖洗滌各孔(1 min×3次)；向各孔中分別吸入100 μl鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(ABC)液，并于37℃恒溫水槽中孵育30 min；300 μl洗滌緩沖洗滌各孔(2 min×5次)；向每孔吸入90 μl顯色液，并于37℃恒溫水槽避光孵育20 min；向每孔吸入100 μl反應(yīng)終止液，酶標(biāo)儀讀取450 nm處光密度(OD)值；用標(biāo)準(zhǔn)品OD繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算血清IL-8和 IL-10含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行q檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

2.1炎性因子水平與正常組和SAP組比較，UAP和AMI組血清IL-8水平顯著增加；與正常組比較，UAP和AMI組血清IL-10水平顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　各組血清IL-8、IL-10水平比較

與正常組和SAP組比較：1)P<0.05；與正常組比較：2)P<0.05

2.2炎性因子與Gensini積分相關(guān)性與<7.5 pg/ml組比較，>9.0 pg/ml組Gensini評(píng)分顯著增高(P<0.05)。但CHD 患者血清IL-10含量與Gensini評(píng)分無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　炎性因子水平與Gensini積分的關(guān)系分)

與IL-8<7.5 pg/ml組比較：1)P<0.05

3　討　論

目前認(rèn)為，CHD屬于一種代謝因素和免疫機(jī)制共同參與的慢性炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)可貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生、演進(jìn)及惡化的始末，大量炎癥細(xì)胞(如單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等)的趨化、浸潤(rùn)及聚集及炎性因子的釋放在CHD免疫應(yīng)答及炎性反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用〔4〕。

IL-8又稱(chēng)CXC類(lèi)趨化因子(CXCL)8，作為一種典型促炎因子，IL-8可激活單核細(xì)胞并使其向血管平滑肌趨化，黏附，促使后者增殖和遷移，另外，IL-8誘使巨噬細(xì)胞向斑塊處遷移，并參與斑塊的形成及破裂〔5〕。Simonini 等〔6〕報(bào)道，冠狀動(dòng)脈斑塊組織中IL-8可誘導(dǎo)該部位的血管新生，當(dāng)應(yīng)用IL-8中和抗體后，則可完全抑制生血管效應(yīng)，提示IL-8在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有研究表明，與正常對(duì)照組比較，心肌梗死患者IL-8顯著升高，提示檢測(cè)血清 IL-8水平是診斷UAP的一個(gè)有效方法，并且可作為AMI的早期標(biāo)志〔7〕。本實(shí)驗(yàn)提示血清IL-8水平可一定程度反映CHD患者臨床病情的危重程度。

作為一種多效能抗炎因子，IL-10主要由Th2淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所分泌，它可抑制趨化因子、炎性因子介導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞增殖效應(yīng)，還具有抑制黏附分子表達(dá)、防止心肌缺血、降低再灌注損傷等心肌保護(hù)作用，因此，IL-10在CHD斑塊損傷恢復(fù)和斑塊的穩(wěn)定中起保護(hù)作用〔8〕。Seghaye等〔9〕研究揭示，IL-10可經(jīng)下調(diào)單核、巨噬細(xì)胞的活性而抑制腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、IL-1等炎性細(xì)胞因子表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控促炎與抗炎之間的平衡。當(dāng)將缺乏IL-10的小鼠缺血后再灌注，TNF-α和細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1表達(dá)量顯著增高，同時(shí)心肌梗死面積也明顯擴(kuò)大〔10〕。本實(shí)驗(yàn)提示促炎/抗炎之間平衡失調(diào)所致的系統(tǒng)及局部性炎癥反應(yīng)是CHD免疫機(jī)制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

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5李艷麗，賀赟，劉娟.YKL-40、MCP-1、IL-8 在冠心病患者血漿中的表達(dá)水平及其與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系〔J〕.系統(tǒng)醫(yī)學(xué)，2017；7(2)：10-3.

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10Rennick DM，F(xiàn)ort MM，Davidson NJ.Studies with IL-10-/-mice：an overview〔J〕.J Leukoc Biol，1997；61(4)：389-96.