王飛，朱國斌，呂慧，周學(xué)敏

（1.山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030001；2.山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院心內(nèi)科，山西 太原 030001）

同型半胱氨酸是存在于人體內(nèi)的由蛋氨酸代謝過程中產(chǎn)生的一種氨基酸，它是一種多功能分子，主要是對血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生多種形式的損傷，包括氧化動脈內(nèi)皮細(xì)胞、損傷血管基質(zhì)、誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖、改變內(nèi)皮細(xì)胞血栓特性、促進(jìn)血管炎癥及抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長[1]。而同型半胱氨酸作為一種細(xì)胞損傷因子，最主要的機(jī)制是誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生，氧化應(yīng)激的發(fā)生是由于體內(nèi)氧化機(jī)制與抗氧化機(jī)制作用失衡，從而產(chǎn)生過多的活性氧自由基，破壞脂質(zhì)、核酸和蛋白質(zhì)等構(gòu)成細(xì)胞的基本物質(zhì)[2]，對生物細(xì)胞和組織的功能和結(jié)構(gòu)的完整性產(chǎn)生直接的生物學(xué)損傷，氧化應(yīng)激在多數(shù)疾病的發(fā)病機(jī)制中都發(fā)揮著最有害的作用[3]。同型半胱氨酸作為心腦血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，明確其氧化損傷機(jī)制，提高臨床醫(yī)師對其的關(guān)注，對疾病的診治是有一定裨益的。

1 同型半胱氨酸的分子結(jié)構(gòu)及形成

同型半胱氨酸，是1932年發(fā)現(xiàn)的一種氨基酸，因?yàn)槠浠瘜W(xué)性質(zhì)類似半胱氨酸，因此命名為同型半胱氨酸。它是一種含巰基的氨基酸，是蛋氨酸和半胱氨酸正常生物合成時(shí)產(chǎn)生的一種中間產(chǎn)物，在酶的催化下，通過腺苷轉(zhuǎn)移、去甲基化、水解生成，在葉酸、維生素B2、維生素B6、維生素B12等作用下，通過再甲基化或轉(zhuǎn)硫途徑代謝[4]。同型半胱氨酸以4種不同的形式存在于血漿中：大約1%在血漿中以游離型二硫同型半胱氨酸存在，70%～80%是保持二硫化物與血漿蛋白結(jié)合（主要是白蛋白）,20%～30%則是以二硫鍵結(jié)合自身形成二聚體的形式存在，還有少部分以其他含巰基的形式存在于血漿中。我們通常所測的血漿同型半胱氨酸的濃度是指總的濃度[5]。

2 氧化應(yīng)激的發(fā)生機(jī)制

氧化應(yīng)激（oxidative Stress，OS）是指體內(nèi)氧化機(jī)制與抗氧化機(jī)制作用失衡，傾向于氧化，產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤、蛋白酶分泌增加，從而產(chǎn)生損傷作用。氧化應(yīng)激是由自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負(fù)面作用，并被認(rèn)為是導(dǎo)致衰老和疾病的一個(gè)重要因素。活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）包括超氧陰離子、羥自由基和過氧化氫等；活性氮自由基（reactive nitrogen species，RNS）包括一氧化氮、二氧化氮和過氧化亞硝酸鹽等。機(jī)體存在兩類抗氧化防御機(jī)制，一類是酶抗氧化系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶和谷胱甘肽還原酶等；另一類是非酶抗氧化系統(tǒng)，包括谷胱甘肽、循環(huán)中含巰基的硫醇、麥角硫因、維生素C、A、E、褪黑素、α-硫辛酸、類胡蘿卜素、微量元素銅、鋅、硒等[3]。當(dāng)活性氧自由基的產(chǎn)生超過抗氧化防御能力時(shí)，就可能對生物組織和細(xì)胞的功能和結(jié)構(gòu)完整性產(chǎn)生有害影響。

3 同型半胱氨酸誘發(fā)氧化損傷的機(jī)制

3.1 自動氧化 血漿中的同型半胱氨酸除去極小的一部分是以它的還原形式存在之外，98%是以氧化形式存在，包括游離型同型半胱氨酸、混合二硫化物和同型半胱氨酸硫內(nèi)酯。同型半胱氨酸的自動氧化是一個(gè)比較公認(rèn)的ROS的形成機(jī)制[6]。同型半胱氨酸包含一個(gè)反應(yīng)性巰基，像大多數(shù)含巰基的氨基酸一樣，在氧和生理pH的條件下，一般由過渡性金屬離子（鐵和銅）催化，發(fā)生有效的自動氧化，可以產(chǎn)生多種形式的活性氧，如超氧陰離子自由基和過氧化氫。同型半胱氨酸的巰基還可以發(fā)生單電子氧化反應(yīng)生成硫自由基或是與另一個(gè)含巰基的化合物生成二硫陰離子自由基，而這兩種自由基更易使蛋白質(zhì)發(fā)生氧化。任何帶有巰基的有機(jī)化合物都可與同型半胱氨酸反應(yīng)產(chǎn)生活性氧自由基，如蛋白質(zhì)、半胱氨酸、谷胱甘肽、γ-谷氨酰半胱氨酸[7]。其中同型半胱氨酸硫內(nèi)酯是巰基和羧酸之間發(fā)生分子內(nèi)縮合反應(yīng)形成的，也可能發(fā)生在計(jì)量單位為微摩爾濃度的血漿中。Necat Yilmaz[3]的研究中提出，同型半胱氨酸代謝轉(zhuǎn)化為同型半胱氨酸硫內(nèi)酯，更易與其他蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，產(chǎn)生氧化毒性。

3.2 線粒體改變 Tyagi等[8]在2003年就提出，同型半胱氨酸可以通過引發(fā)線粒體膜去極化、細(xì)胞色素C的釋放及caspase-9的激活來增加ROS的產(chǎn)生，繼而誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。同型半胱氨酸誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與線粒體膜通透性增加和線粒體膜電位的減少密切相關(guān)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中也有報(bào)道，經(jīng)同型半胱氨酸處理的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中線粒體的形態(tài)沒有發(fā)現(xiàn)異常變化，但線粒體的活性整體是增加的，與正常對照細(xì)胞相比，線粒體膜電位確實(shí)是改變的，但是具體改變沒有報(bào)道。為了評價(jià)線粒體功能，Timkova等[9]比較了同型半胱氨酸治療組和正常對照組大鼠線粒體中的呼吸鏈復(fù)合物的活性，結(jié)果表明，同型半胱氨酸治療后，復(fù)合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性下降，而線粒體呼吸鏈在復(fù)合物中生成活性氧主要在于復(fù)合體Ⅰ和Ⅲ[10]。經(jīng)同型半胱氨酸處理后的細(xì)胞線粒體復(fù)合物I代償性活性增高，無法正常合成有效成分的活性氧，參與細(xì)胞的代謝過程，而是擾亂活性氧的生成與代謝平衡，造成氧化損傷。

3.3 抑制抗氧化酶 同型半胱氨酸增加活性氧自由基的產(chǎn)生一部分也歸因于抗氧化防御系統(tǒng)能力的降低。一方面，抗氧化酶的表達(dá)和活性降低，包括谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶和過氧化氫酶，Melvin R Hayden的研究顯示[11]，這些酶在2型糖尿病和動脈粥樣硬化病變中是減少的，可能與同型半胱氨酸有關(guān)。另外一些非酶抗氧化物，如谷胱甘肽和循環(huán)中含巰基的硫醇均含有巰基，可與同型半胱氨酸反應(yīng)生成活性氧，同型半胱氨酸亦可干擾谷胱甘肽的形成。其中研究較多的是損害了谷胱甘肽相關(guān)抗氧化防御系統(tǒng)，使其清除有害自由基的能力下降，促進(jìn)了氧化應(yīng)激的發(fā)生[6]。如果同型半胱氨酸的排出跟不上產(chǎn)生，細(xì)胞內(nèi)積累后可能會成為一種細(xì)胞毒性，造成細(xì)胞損傷或死亡。

3.4 激活NADPH氧化酶 NADPH氧化酶（NOX）的家族有7個(gè)成員，包括 NOX1、NOX3、NOX2、NOX4、NOX5、Duox1 和 Duox2。NADPH氧化酶是由2個(gè)存在質(zhì)膜的亞基（gp91phox、p22phox）、三個(gè)胞漿亞基（p47phox、p67phox、p40phox）和小亞基（GTPase、Rac2）組成的酶復(fù)合體。酶復(fù)合物的激活，可以誘導(dǎo)電子從NADPH轉(zhuǎn)移到分子氧，導(dǎo)致超氧化物的形成。生理情況下，NADPH氧化酶可通過絲裂原激活蛋白酶（MAPK）和酪氨酸蛋白激酶信號通路，產(chǎn)生一定量的ROS，作為對抗病原體感染的第一道防線，或是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫功能、激素生物合成功能的活性產(chǎn)物。當(dāng)血漿中同型半胱氨酸升高時(shí)，對NADPH氧化酶產(chǎn)生病理性刺激，發(fā)生氧化爆發(fā)，生成大量的ROS，有統(tǒng)計(jì)顯示[12]，當(dāng)同型半胱氨酸濃度達(dá)到10 mmol/L的水平時(shí)，可以最大程度的增加了p38 MAPK磷酸化，從而發(fā)生依賴p38 MAPK活化的氧化應(yīng)激。由Sipkens等[13]也發(fā)現(xiàn)作用NOX4易位到線粒體可能與隨后產(chǎn)生的ROS和細(xì)胞凋亡有關(guān)。同型半胱氨酸可促進(jìn)氧化低密度脂蛋白的產(chǎn)生，氧化的低密度脂蛋白能夠激活人血管內(nèi)皮細(xì)胞中的NOX4而促進(jìn)ROS的生成[2]。

3.5 激活基質(zhì)金屬蛋白酶 四種基質(zhì)金屬蛋白酶又被稱為彈性纖維蛋白酶：明膠酶（MMP-2）、明膠酶B、彈性蛋白酶和基質(zhì)溶素，只有MMP-2和明膠酶B的表達(dá)作為主動脈平滑肌細(xì)胞的潛在酶原，兩者都涉及在動脈疾病，如動脈粥樣硬化和腹主動脈瘤。動脈粥樣硬化斑塊的形成與血管平滑肌細(xì)胞的遷移、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的重塑密切相關(guān)。Guo等[14]研究中有過報(bào)道，細(xì)胞外基質(zhì)的重塑主要是由基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）引起的。Brown等人也在人類冠狀動脈粥樣硬化病變中發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶的存在，提示MMPs與動脈粥樣硬化的進(jìn)展密切相關(guān)。Marcucci等[15]的體外實(shí)驗(yàn)表明，同型半胱氨酸可以激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），可以通過ERK-MMP-9的信號軸，引起各種細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)重塑，目前猜測最關(guān)鍵的機(jī)制還是氧化應(yīng)激的發(fā)生。再比如房顫的發(fā)生會引起心臟的重構(gòu)，與同型半胱氨酸水平是明顯相關(guān)的，與基質(zhì)金屬蛋白酶調(diào)節(jié)細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)的相互作用也是有關(guān)的，但是兩者相互作用的具體機(jī)制尚未明確，有待我們進(jìn)一步研究證實(shí)。

4 展望

綜上所述，高同型半胱氨酸引起的氧化損傷是其參與各種疾病的重要機(jī)制，有效的控制體內(nèi)的同型半胱氨酸水平對疾病的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后是有很大裨益的。目前已有明確的流行病學(xué)研究表明，血清中同型半胱氨酸的水平升高會增加心血管疾病如冠狀動脈疾病、心力衰竭、缺血性腦卒中等疾病的發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)[16]。也有大型病例對照回顧性和前瞻性研究表明，空腹?fàn)顟B(tài)及蛋氨酸負(fù)荷狀態(tài)下同型半胱氨酸水平升高，可導(dǎo)致發(fā)生血管的急性或慢性事件，這就證明同型半胱氨酸是這些心腦血管事件的發(fā)生是密切相關(guān)的[1]。因此，嚴(yán)格把握同型半胱氨酸的氧化損傷機(jī)制，從根本上嚴(yán)格控制體內(nèi)的同型半胱氨酸水平，將有效的降低一些急性或慢性血管事件的發(fā)生率，改善患者的預(yù)后。血清同型半胱氨酸的水平也逐漸引起醫(yī)務(wù)人員及患者的重視，它將可能成為將來身體健康素質(zhì)評估的基本指標(biāo)。

[1] H Ay,EM Arsava,SL Tokgozoglu,et al.Hyperhomocysteinemia is associated with the presence of left atrial thrombus in stroke patients with nonvalvular atrial fibrillation[J].Stroke,2003,34(4)：909-912.

[2] 冷麗麗,唐圣松.NADPH氧化酶NOX家族的組織分布及生理功能[J].臨床與病理雜志,2008,28(1)：19-23.

[3] N Yilmaz.Relationship between paraoxonase and homocysteine：crossroads of oxidative diseases[J].Arch Med Sci,2012,8(1)：138-153.

[4]TB Domagala,M Lacinski,WH Trzeciak,et al.The correlationofhomocysteine-thiolactonaseactivityof the paraoxonase(PON1)protein with coronary heart disease status[J].Cell Mol Biol(Noisy-le-grand),2006,52(5)：4-10.

[5] P Ganguly,SF Alam.Role of homocysteine in the development of cardiovascular disease[J]. Nutrition Journal,2015,14(1)：6.

[6] MM Steed,SC Tyagi.Mechanisms of cardiovascular remodeling in hyperhomocysteinemia[J].Antioxidants&Redox Signaling,2011,15(7)：1927.

[7] MR Hayden,SC Tyagi.Homocysteine and reactive oxygen species in metabolic syndrome,type 2 diabetes mellitus,and atheroscleropathy：The pleiotropic effects of folate supplementation[J].Nutrition Journal,2004,10(3)：4.

[8] N Tyagi,AV Ovechkin,D Lominadze,et al.Mitochondrial Mechanism of Microvascular Endothelial Cells Apoptosis in Hyperhomocysteinemia[J]. Journal of Cellular Biochemistry,2006,98(5)：1150-1162.

[9] V Timkova,Z Tatarkova,J Lehotsky,et al.Effects of mild hyperhomocysteinemia on electron transport chain complexes,oxidative stress,and protein expression in rat cardiac mitochondria[J].Molecular&Cellular Biochemistry,2015,411(1-2)：261-270.

[10]J Gomez,I Sanchez-Roman,A Gomez,et al.Methionine and homocysteine modulate the rate of ROS generation of isolated mitochondria in vitro[J].Journal of Bioenergetics&Biomembranes,2011,43(4)：377-386.

[11]R Marcucci,I Betti,E Cecchi,et al.Hyperhomocysteinemia and vitamin B6 deficiency：new risk markers for nonvalvular atrial fibrillation?[J]. Am Heart J,2004,148(3)：456-461.

[12]X Bao,C Wu,G Lu.Atorvastatin attenuates homocysteine-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells via inhibiting NADPH oxidase-related oxidative stress-triggered p38MAPK signaling[J].中國藥理學(xué)報(bào),2009,30(10)：1392-1398.

[13]JA Sipkens,N Hahn,VDB Cs,et al.Homocysteine-induced apoptosis in endothelial cells coincides with nuclear NOX2 and peri-nuclear NOX4 activity[J].Cell Biochemistry&Biophysics,2013,67(2)：341-352.

[14]H Guo,JD Lee,H Uzui,et al.Effects of heparin on theproductionofhomocysteine-inducedextracellular matrix metalloproteinase-2 in cultured rat vascularsmoothmusclecells[J].CanadianJournalof Cardiology,2007,23(4)：275-280.

[15]R Marcucci,I Betti,E Cecchi,et al.Hyperhomocysteinemia and vitamin B6 deficiency：new risk markers for nonvalvular atrial fibrillation?[J].American Heart Journal,2004,148(3)：456-461.

[16]M Shimano,Y Inden,Y Tsuji,et al.Circulating homocysteine levels in patients withradiofrequency catheter ablation for atrial fibrillation[J].Europace： European pacing, arrhythmias, and cardiac electrophysiology：journal of the working groups on cardiac pacing,arrhythmias,and cardiaccellular electrophysiology of the European Society of Cardiology,2008,10(8)：961.