荊　晶，胡恩亮，樊愛琳，鄭善鑾，郝曉柯

(空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安　710032)

隨著醫(yī)學(xué)科技水平的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀已是醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用最廣泛的儀器之一。其快速、易操作、重復(fù)性好等功能強(qiáng)大的特點(diǎn)，為臨床提供不同層次有效的血細(xì)胞參數(shù)，已作為血細(xì)胞計(jì)數(shù)最常用的篩選方法[1，2]。血小板(PLT)計(jì)數(shù)作為血細(xì)胞檢測中的一項(xiàng)重要指標(biāo)，對臨床疾病的診斷和治療有極其重要的價(jià)值，與疾病的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。而在日常的臨床檢驗(yàn)工作中，血小板假性減低和假性增高卻給臨床診治帶來了極大的困擾。

Sysmex-NX9000血細(xì)胞分析儀采用電阻抗法進(jìn)行PLT計(jì)數(shù)，其原理是儀器計(jì)數(shù)小孔內(nèi)不定時(shí)的通過各類血細(xì)胞，各種血細(xì)胞體積大小不同，穿過小孔時(shí)其內(nèi)、外電流和電壓發(fā)生改變，而形成相應(yīng)的脈沖變化與血細(xì)胞數(shù)量相當(dāng)。由于血小板和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域常有交叉，當(dāng)紅細(xì)胞體積過小或有較多紅細(xì)胞碎片時(shí)，其脈沖信號會被視為血小板信號，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性增高[3～5]。這樣的PLT計(jì)數(shù)結(jié)果如果不予以糾正，會給臨床提供不準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，從而導(dǎo)致誤診、漏診，甚至造成不可挽回的生命財(cái)產(chǎn)損失。為了解小紅細(xì)胞及紅細(xì)胞碎片對PLT計(jì)數(shù)造成的影響，筆者對不同范圍MCV值的標(biāo)本分別進(jìn)行電阻抗法(PLT-I)和熒光核酸染色法(PLT-F)的檢測，比較兩種方法PLT計(jì)數(shù)的差異。

1　材料和方法

1.1研究對象選擇2017年3～10月西京醫(yī)院門診、住院患者及體檢者466例，要求檢驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞平均體積均小于正常范圍(≤80fl)。按MCV分為3組，A組150例，MCV≤65fl，B組166例，65fl

1.2儀器與試劑Sysmex-NX9000五分類血細(xì)胞分析儀，XE2100五分類血細(xì)胞分析儀，SP90，SP89，SP10推片機(jī)，Cellavison自動閱片機(jī)及其配套溶血劑、稀釋液、清洗液均為日本Sysmex公司生產(chǎn)，所有儀器都定期進(jìn)行校準(zhǔn)，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，室內(nèi)質(zhì)控均在控。雙目光學(xué)顯微鏡CX-21(日本Olympus公司)；采血針及EDTA-K2血液抗凝真空管(廣州陽普公司)；瑞氏-吉姆薩染液Ⅰ，Ⅱ(臺灣貝索公司)。

1.3檢測方法患者空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血2 ml，加入含EDTA-K2的真空抗凝管中，輕輕混勻，分別采用PLT-I和PLT-F法，在2 h內(nèi)上機(jī)完成檢測。每日檢測標(biāo)本前，用儀器原裝質(zhì)控品做質(zhì)控，保證儀器相關(guān)監(jiān)測指標(biāo)在控的前提下完成標(biāo)本檢測。

2結(jié)果見表1。A組PLT-I與PLT-F兩種檢測方法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.799，P<0.05)，B組和C組兩檢測方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.693，0.583，均P>0.05)。

表1

不同檢測方法血小板計(jì)數(shù)比較

3討論現(xiàn)如今，血小板檢測作為繼白細(xì)胞之后最有力的診斷依據(jù)之一，臨床上意義重大。在血液病、腫瘤、感染、創(chuàng)傷、骨折和心腦血管等疾病，都給臨床提供著重要診療作用，同樣也是臨床研究凝血與止血功能的重要指標(biāo)之一，是外科病人術(shù)前和內(nèi)科病人輸血前必查的檢驗(yàn)項(xiàng)目。

臨床很多疾病都可以引起血小板的增高[6～8]，如慢性粒細(xì)胞性白血病、原發(fā)性血小板增多癥、真性紅細(xì)胞增多癥；急性化膿性感染、大出血、急性溶血、腫瘤等也會引起PLT反應(yīng)性增高；同樣，還會有一些情況會引起血小板計(jì)數(shù)假性增高，如某些溶血性疾病，發(fā)生血管內(nèi)溶血時(shí)，患者血液中出現(xiàn)較多的紅細(xì)胞碎片時(shí)；部分慢性粒細(xì)胞白血病患者經(jīng)過治療后，血液內(nèi)也會出現(xiàn)大量紅細(xì)胞碎片；此外，臨床某些患者靜脈滴輸脂肪乳后短時(shí)間采集靜脈血做血細(xì)胞檢測，乳糜顆粒會被血細(xì)胞分析儀誤認(rèn)為是血小板；以上這三種情況都可能造成PLT計(jì)數(shù)結(jié)果的不準(zhǔn)確/偏高。因此，PLT計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性就變得尤為重要。Sysmex-XN9000全自動血細(xì)胞分析儀采用電阻抗原理。根據(jù)顆粒的大小來區(qū)分細(xì)胞，與顆粒內(nèi)容物性質(zhì)無關(guān)。紅細(xì)胞和血小板同在一個(gè)檢測通道，血小板體積多分布在2～30 fl之間，而紅細(xì)胞體積則分布在30～250 fl之間，機(jī)器把范圍在2～30 fl的細(xì)胞判定為血小板，把范圍在25～250 fl的細(xì)胞判定為紅細(xì)胞，健康人群血小板體積和紅細(xì)胞體積之間有一個(gè)明顯界限[9，10]。但當(dāng)患者血液中存在相當(dāng)數(shù)量的小紅細(xì)胞或細(xì)胞碎片時(shí)，儀器將其誤認(rèn)為血小板而使PLT計(jì)數(shù)結(jié)果假性增高。MCV越小，小紅細(xì)胞數(shù)量越多，對PLT計(jì)數(shù)的影響就越大。Sysmex-XN全自動血細(xì)胞分析儀PLT-F利用熒光素對血小板進(jìn)行染色，采用流式細(xì)胞數(shù)檢測前向散射光(檢測細(xì)胞大小)和側(cè)向散射光(檢測細(xì)胞內(nèi)容物和顆粒)，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)繪制出二維散點(diǎn)圖進(jìn)行計(jì)數(shù)，這一方法有效避免了上述小紅細(xì)胞或細(xì)胞碎片等因素導(dǎo)致的血小板假性增高或減低[11～13]，因此，本研究以PLT-F計(jì)數(shù)之PLT為基數(shù)，對由于低MCV結(jié)果而引起的假性PLT計(jì)數(shù)增高結(jié)果樣本，進(jìn)行PLT復(fù)檢就顯得尤為重要。

本研究是對可能影響血小板計(jì)數(shù)的小紅細(xì)胞按其平均體積大小進(jìn)行分組，分別采用電阻抗法(PLT-I)和熒光核酸染色法(PLT-F)進(jìn)行五分類計(jì)數(shù)。正如實(shí)驗(yàn)結(jié)果所得A組：PLT-I值=(322.8±109.1)×109/L，PLT-F值=(282.60±100.5)×109/L，相比二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；B組：PLT-I值=(305.7±111.7)×109/L，PLT-值=(304.8±112.3)×109/L，二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組：PLT-I值=(292.2±84)×109/L，PLT-F值=(291.6±84.4)×109/L，二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)著重比較了傳統(tǒng)的血小板檢測方法(PLT-I)和熒光核酸染色法(PLT-F)抗小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片的干擾。實(shí)驗(yàn)表明，MCV在正常范圍的標(biāo)本即C組在PLT-I和PLT-F的檢測結(jié)果十分接近，重復(fù)性良好，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。當(dāng)65 fl0.05)。當(dāng)MCV<65 fl時(shí)，PLT-I和PLT-F的測量結(jié)果間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義(P<0.05)，PLT-I血小板結(jié)果假性增高。本實(shí)驗(yàn)室制定的血細(xì)胞檢測復(fù)檢規(guī)則中，就有PLT抗小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片的干擾：當(dāng)MCV<70 fl時(shí)，需對標(biāo)本進(jìn)行Reflex(PLT-F)復(fù)檢。本次研究結(jié)果也證實(shí)，當(dāng)MCV<65 fl時(shí)，PLT進(jìn)行PLT-I和PLT-F后，其PLT計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且血小板直方圖均表現(xiàn)為尾部抬高。因此，在MCV<65 fl時(shí)進(jìn)行PLT-F復(fù)檢，可有效避免小紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片的增多引起的PLT計(jì)數(shù)假性增高。當(dāng)機(jī)體PLT過低時(shí)，臨床上會引起皮膚黏膜出血、鼻衄、臟器出血甚至腦出血等嚴(yán)重出血而危及生命[14]，若病人處于低血小板的狀態(tài)，但由于體內(nèi)小紅細(xì)胞的干擾致使血小板計(jì)數(shù)在正常范圍，這就會造成臨床醫(yī)生的誤診漏診而影響病人生命財(cái)產(chǎn)安全，造成嚴(yán)重醫(yī)療糾紛。所以，當(dāng)MCV<65 fl時(shí)，標(biāo)本進(jìn)行PLT-F復(fù)檢是必要的。

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