魯　軍，程歆琦，禹松林，侯立安，金　成，由婷婷

(中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科，北京　100730)

異嗜性抗體是由已知或未知的抗原物質(zhì)刺激人體產(chǎn)生的一類具有足夠滴度、能與多個物種的免疫球蛋白發(fā)生相對弱的結(jié)合的多重特異性免疫球蛋白[1，2]。它通過非特異性結(jié)合捕獲抗體和標記抗體，從而干擾測定，出現(xiàn)與臨床表現(xiàn)不相符的檢測結(jié)果。有研究表明，飼養(yǎng)寵物兔是體內(nèi)形成異嗜性抗體的危險因素，在這些人群中有30%～40%可檢測到異嗜性抗體，但僅有0.05%～0.5%在免疫檢測中會受到異嗜性抗體的干擾[3]，可見異嗜性抗體對樣本的干擾幾率并不高，但是仍無法保證所有患者標本都能完全免受這種干擾的影響。當出現(xiàn)檢測結(jié)果和臨床特點及病史不相符時，應(yīng)當慎重判讀結(jié)果，同時，檢驗科人員也應(yīng)該了解懷疑異嗜性抗體干擾時的處理辦法?，F(xiàn)就我科室出現(xiàn)的一例異嗜性抗體干擾cTnI檢測的案例進行分析和處理，報道如下。

1　材料和方法

1.1病例描述患者，男性，65歲。2015年5月無誘因出現(xiàn)持續(xù)性中上腹絞痛，就診當?shù)蒯t(yī)院。胃鏡示十二指腸炎，補液抑酸、靜脈營養(yǎng)等對癥治療，腹痛略好轉(zhuǎn)，每日仍間斷發(fā)作。2015年11月就診我院門診，胃腸鏡見十二指腸球腔散在小結(jié)節(jié)，球后及降段連續(xù)彌漫性潰瘍性病變，小腸黏膜呈急慢性炎癥。病理活檢：炎性滲出物、壞死物、肉芽組織。期間給予耐信、吉法酯治療，癥狀無明顯好轉(zhuǎn)。2016年8月無誘因出現(xiàn)腹瀉，每日10余次，外院胃鏡見十二指腸球部多發(fā)扁平半球狀隆起；病理：管狀腺瘤。患者近一年來體重持續(xù)下降約25kg，于2016年11月3日入住我院消化內(nèi)科。

入院后查心臟標志物明顯升高(cTnI 6.05 ng/ml)，多次復(fù)查cTnI波動于4～5 ng/ml，無下降趨勢，NT-proBNP波動于170～450 pg/ml，CK，CK-MB，BNP均(-)，結(jié)果見表1。多次心電圖均見肢導(dǎo)低電壓，未見ST段改變及病理性Q波。超聲心動圖：左室射血分數(shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)74%，節(jié)段性室壁運動異常。冠狀動脈CTA：右冠優(yōu)勢型，冠狀動脈輕度鈣化，各分支未見明確狹窄。心臟常規(guī)MRI：左室心肌細胞外容積(ECV)彌漫性增高，考慮彌漫性心臟病變，系統(tǒng)性疾病累及心臟可能；左室流出道變窄；房間隔及右房壁略增厚伴高信號，結(jié)合CT考慮脂肪沉積。心內(nèi)科會診不除外TTR型心臟淀粉樣變，cTnI升高原因待查。

表1

患者生化檢測結(jié)果

1.2處理方法

1.2.1稀釋法處理患者樣本：使用Beckman系統(tǒng)廠家提供的樣本稀釋液：Access Sample Diluent A對患者血漿樣本和對照血漿樣本分別進行2倍、4倍、8倍稀釋處理，處理后的血漿樣本使用Beckman系統(tǒng)檢測。

1.2.2更換檢測系統(tǒng)測定：本實驗室檢測系統(tǒng)為Beckman Access 2免疫分析儀及配套試劑，檢測原理為雙位點酶免法(“夾心法”)?，F(xiàn)更換為Siemens Dimension Exl化學免疫分析儀和Abbotti2000全自動化學發(fā)光免疫分析儀及相應(yīng)配套試劑，檢測原理分別為純態(tài)氧介導(dǎo)化學發(fā)光法和化學發(fā)光微粒子免疫法。

1.2.3采用異嗜性抗體阻斷劑處理患者樣本：使用異嗜性抗體阻斷劑(美國Scantibodies Laboratory)對樣本進行處理。異嗜性抗體阻斷劑的種類很多，由于本實驗室檢測cTnI所用試劑中，捕獲抗體和標記抗體均為鼠源性抗人心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體，故而選擇了異嗜性抗體阻斷劑I型，該型含有特異性鼠免疫球蛋白。具體操作流程：將145 μl異嗜性抗體阻斷劑分別添加到355 μl患者血漿及兩例對照血漿中，混勻后放置于37℃水浴箱中孵育30 min，然后使用Beckman系統(tǒng)檢測，結(jié)果乘以1.41即為原樣本中的cTnI值。

2結(jié)果該患者最近一次血漿樣本以及對照血漿樣本使用稀釋法處理前后的檢測結(jié)果見表2。從表2可以看出，患者血漿樣本按一定倍數(shù)稀釋后的結(jié)果沒有線性變化規(guī)律，而對照血漿樣本按一定倍數(shù)稀釋后的結(jié)果出現(xiàn)成倍的降低。

表2

患者及對照血漿樣本cTnI檢測

該患者的最近一次標本在不同檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果見表3。Siemens和Abbott的檢測結(jié)果均在正常范圍內(nèi)。

表3患者最近一次樣本在不同檢測系統(tǒng)的結(jié)果

醫(yī)院名稱檢測系統(tǒng)結(jié)果(ng/ml)參考區(qū)間北京協(xié)和醫(yī)院西院北京協(xié)和醫(yī)院東院北京市第六醫(yī)院BeckmanSiemensAbbott4.600.0230.022<0.04<0.056<0.034

患者最近一次血漿樣本以及兩例對照血漿樣本使用異嗜性抗體阻斷劑阻斷前后的cTnI檢測結(jié)果見圖1。從圖1可以看出，患者最近一次血漿樣本阻斷后cTnI檢測值明顯降低，而對照樣本阻斷前后檢測結(jié)果無明顯變化。

圖1　患者、對照1及對照2血漿樣本阻斷前后cTnI水平

3討論cTnI的檢測基于抗原抗體反應(yīng)，正常情況下，在夾心法免疫測定中，待測抗原同時結(jié)合捕獲抗體和標記抗體，形成固相捕獲抗體-待測抗原-標記抗體的復(fù)合物(見圖2中A所示)；異嗜性抗體若替代待測抗原，同時結(jié)合捕獲抗體和標記抗體時，會使結(jié)果出現(xiàn)假性增高(見圖2中B所示)；異嗜性抗體分別與捕獲抗體或者標記抗體結(jié)合，阻礙待測抗原被試劑抗體識別，使結(jié)果出現(xiàn)假性降低(見圖2中C所示)[4～6]。本文中患者入院后多次檢查cTnI結(jié)果均升高，但該患者并無胸痛、胸悶等臨床表現(xiàn)，且入院后cTnI雖然升高但是缺乏心肌損傷相應(yīng)的動態(tài)變化(見圖3所示)。因此應(yīng)該懷疑出現(xiàn)如圖2中B所示的干擾，造成檢測結(jié)果出現(xiàn)假性升高。后經(jīng)稀釋法處理以及更換檢測系統(tǒng)和異嗜性抗體阻斷等處理方法亦證實了筆者的推斷，即該患者cTnI在Beckman系統(tǒng)上結(jié)果升高為假陽性結(jié)果，是由異嗜性抗體干擾引起的。該患者經(jīng)過我院心內(nèi)科、血液科、放射科、病理科和檢驗科的多科會診后，也排除了心肌損傷的可能性。因此，雖然心臟常規(guī)MRI提示有彌漫性心臟病變或系統(tǒng)性疾病累及心臟可能，但是該方法診斷心肌損傷的準確性還有待商榷和驗證。

A為夾心法免疫測定正常反應(yīng)機制；B，C為干擾因素可能產(chǎn)生的反應(yīng)機制。

圖2夾心免疫分析法

圖3　2016年11月間患者cTnI檢測結(jié)果

異嗜性抗體包括天然抗體和一些自身抗體，可能來自于污染的食物、與動物的接觸或動物血清類疫苗接種等。目前免疫方法檢測中使用的抗體多數(shù)源于實驗動物，因此患者體內(nèi)若含有異嗜性抗體，其可干擾待測物質(zhì)與試劑中的抗體結(jié)合，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽性或假陰性。另外，自然產(chǎn)生或自身免疫源性的類風濕因子(RF)也是免疫檢測過程中干擾的主要因素。RF是由于細菌、病毒等引起體內(nèi)產(chǎn)生的以變性IgG為抗原的一種抗體，可模擬異嗜性抗體的作用而結(jié)合免疫檢測法中的捕獲抗體和標記抗體引起假陽性結(jié)果，在日常檢測中比較多見[7，8]。

免疫檢測過程中重要的干擾因素就是異嗜性抗體，所以需要我們使用一些方法來消除干擾。當懷疑免疫檢測中存在干擾時，可用一些方法進行鑒別[6，9，10]：①按一定倍數(shù)將標本進行稀釋，結(jié)果出現(xiàn)成倍的降低，則為線性結(jié)果，表明標本未受到異嗜性抗體等的干擾，如果稀釋后結(jié)果不成線性，則很可能說明檢測結(jié)果受到了干擾；②更換另一種檢測方法，得出的結(jié)果與原檢測方法對比；③添加阻斷劑以及物理化學技術(shù)對標本進行預(yù)處理后檢測；④直接檢測標本中異嗜性抗體或自身抗體的濃度。

本文采用了上述前三種方法進行分析研究。按一定倍數(shù)稀釋患者血漿樣本，稀釋后的結(jié)果不成線性；直接使用不同檢測系統(tǒng)(Siemens檢測系統(tǒng)和Abbott檢測系統(tǒng))檢測，cTnI結(jié)果均在正常參考區(qū)間內(nèi)；添加異嗜性抗體阻斷劑處理患者血漿，阻斷后cTnI結(jié)果明顯下降。三種處理方法均表明該患者原檢測系統(tǒng)(Beckman系統(tǒng))的cTnI結(jié)果受到了干擾。根據(jù)第一種方法倍比稀釋的患者血漿樣本結(jié)果不成線性且第三種方法采用異嗜性抗體阻斷劑處理后的患者血漿樣本結(jié)果明顯降低，故而考慮異嗜性抗體干擾的可能性大。結(jié)合病人的臨床表現(xiàn)，考慮更換檢測系統(tǒng)后和阻斷處理后的檢測結(jié)果與其更加符合。但是同一種異嗜性抗體對不同檢測試劑的干擾程度是不同的，所以沒有哪一個方法可以徹底去除異嗜性抗體的干擾[9，11]。在我院東院區(qū)使用的Siemens檢測平臺上也出現(xiàn)過異嗜性抗體干擾cTnI檢測的情況。

目前大多數(shù)試劑盒的說明書中都有類似檢驗方法局限性的提示，即患者樣本中可能存在異嗜性抗體，造成結(jié)果假性升高或假性降低，此測試法的設(shè)計將異嗜性抗體的干擾降至最低[12]，然而不能保證把來自所有患者標本中的此類干擾全部清除掉。因此，檢驗結(jié)果應(yīng)根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)和其他輔助檢查結(jié)果綜合判斷。

4結(jié)論本文中該患者的cTnI檢測結(jié)果受到了異嗜性抗體的干擾，通過更換檢測方法和異嗜性抗體阻斷可以有效解決相應(yīng)的干擾。檢驗人員不僅要對免疫檢測法中的干擾因素和干擾機制有一定的認識，還要了解相關(guān)的處理方法。臨床醫(yī)生也應(yīng)該對檢驗方法的局限性有所了解，一旦出現(xiàn)臨床表現(xiàn)和檢驗結(jié)果不符時，應(yīng)當及時聯(lián)系檢驗醫(yī)師，進而確定是否存在干擾并設(shè)法解除干擾。

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