劉玉霞，胡國瑜，袁朝暉，譚　奎，李清照，沈嬋娟

(株洲市中心醫(yī)院血液科，湖南株洲　412007)

多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種以骨髓中異常漿細(xì)胞增生、骨損傷及免疫缺陷為特征的B細(xì)胞惡性腫瘤[1，2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，MM的治療進(jìn)展依賴于免疫應(yīng)答反應(yīng)，免疫反轉(zhuǎn)抑制可潛在地增強(qiáng)內(nèi)源性抗骨髓瘤活性。因此，尋找敏感、特異、更有效的免疫檢測指標(biāo)對MM進(jìn)行準(zhǔn)確地預(yù)后判斷并進(jìn)行個(gè)體化治療是MM診治成功的關(guān)鍵。

CD269即B細(xì)胞成熟抗原(B-cell maturation antigen，BCMA)，為B細(xì)胞表面分子，與B細(xì)胞活化因子(blymphocytestimulatingfactor，BAFF)結(jié)合后可刺激MM細(xì)胞的增殖[3]。有研究發(fā)現(xiàn)MM細(xì)胞BCMA的持續(xù)表達(dá)表明BCMA可作為調(diào)控惡性漿細(xì)胞促存活途徑的主要受體。國外有學(xué)者研制出BCMA抗體，能減弱MM骨病效應(yīng)，提高患者生活質(zhì)量，延長生存期，因此可應(yīng)用于MM的治療[4]。

CD317即分化抗原簇317(cluster of differentiation 317)，又叫骨髓基質(zhì)細(xì)胞抗原2(bone marrow stromal cell antigen 2，BST-2)，是終末分化B細(xì)胞的特異性表面標(biāo)志。有研究發(fā)現(xiàn)其在多MM細(xì)胞中高表達(dá)[5]，曾作為骨髓瘤免疫療法的靶向抗原。

國內(nèi)有關(guān)CD269在MM病中的研究報(bào)道較多，但對于CD269和CD317在MM中的表達(dá)及預(yù)后意義，國內(nèi)文獻(xiàn)目前未見相關(guān)報(bào)道，鑒于BCMA和BST-2同屬于B細(xì)胞表面分子以及在免疫治療中成為越來越重要的免疫靶標(biāo)，本研究通過分析本院63例初診MM患者CD269和CD317表達(dá)率，分析CD269和CD317表達(dá)水平與反映MM臨床特征疾病進(jìn)展指標(biāo)的相關(guān)性及預(yù)后意義。

1　材料和方法

1.1研究對象選取2015年8月～2017年6月期間血液科就診的住院MM患者63例(研究組)，其中男性40例，女性23例，平均年齡62.39±19.21歲，病例隨訪至2017年8月，并選擇同期缺鐵性貧血(IDA)患者35例對照組，其中男性5例，女性30例，平均年齡35.25±8.43歲，其中MM患者診斷符合2013年中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南，分期依據(jù)ISS分期標(biāo)準(zhǔn)；參與實(shí)驗(yàn)的患者，在參與實(shí)驗(yàn)之前均簽署知情同意書。

1.2主要儀器與試劑美國BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀，所有單克隆抗體、同型對照、熒光微球和溶血素均購自美國BD公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1標(biāo)本采集：所有病例均嚴(yán)格無菌操作，在患者入院治療前，抽取骨髓2 ml，肝素抗凝。

1.3.2流式細(xì)胞術(shù)檢測分析：分別吸取所收集的患者骨髓細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞數(shù)至(0.5～1.0)×106個(gè)/ml，采用四色流式分析方案檢測胞膜抗原，每管取100 μl樣本加不同組合抗體各20 μl，同時(shí)做同型對照管，混勻，避光20 min，溶血后上機(jī)檢測，采用CellQuest Pro軟件獲取并分析10 000個(gè)細(xì)胞，通過CD45/SSC和CD138聯(lián)合設(shè)門并分析該細(xì)胞群中各抗原的陽性率和表達(dá)強(qiáng)度，膜抗原陽性率>20%為陽性。

1.3.3其他臨床指標(biāo)檢測：采用SYSMEX XE-2100血液分析儀檢測血紅蛋白(Hb)濃度，采用全自動生化儀檢測血清β2微球蛋白(β2-MG) 濃度及血清乳酸脫氫酶(LDH)濃度。

2　結(jié)果

2.1MM患者瘤細(xì)胞表面CD269和CD317的表達(dá)情況MM組和對照組的CD269陽性率分別為(86.6±2.35)% vs (4.33±1.69)%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.256，P<0.05)；CD317陽性率分別為(71.42±0.62)% vs (8.32±3.89)%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.102，P<0.05)。

2.2CD269和CD317的表達(dá)與其他CD抗原表達(dá)的關(guān)系見表1。45例MM患者CD269和CD317陽性組的CD56陽性率為68.88%(31/45)，CD117陽性率為17.77%(8/45)，而18例陰性組中CD56陽性率為5.55%(1/18)；CD117陽性率為66.66%(12/18)； CD56 的表達(dá)水平陽性組顯著高于陰性組(t=4.032，P<0.05)，而CD117的表達(dá)水平陽性組顯著低于陰性組(t=2.832，P<0.05)，CD19，CD20的表達(dá)兩組間差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Spearman相關(guān)性分析顯示，MM患者CD269和CD317表達(dá)水平與CD56表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.392，P<0.05)，與CD117表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.210，P<0.05)。

2.3CD269和CD317表達(dá)與其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性見表2。MM患者CD269和CD317陽性組血清Hb含量顯著低于陰性組患者(t=3.012，P<0.05)，血清β2-MG水平陽性組低于陰性組(t=2.024，P<0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清LDH水平在兩組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Spearman相關(guān)性分析顯示，MM患者CD269和CD317表達(dá)水平與血清Hb含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.212，P<0.05)，與血清β2- MG水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.312，P<0.05)。

表1

63例MM患者CD269，CD317陽性組

表2

63例MM患者CD269，CD317陽性組

3討論多發(fā)性骨髓瘤(MM)是骨髓內(nèi)漿細(xì)胞異常增生并伴單克隆性免疫球蛋白增多為特點(diǎn)的一種惡性腫瘤。MM患者臨床上主要表現(xiàn)為貧血、腎功能損害、免疫力低下、骨破壞、感染等[6]。目前的治療手段有化療、自體骨髓或外周血造血干細(xì)胞移植及生物治療等，但整體療效并不令人滿意。因此對MM的發(fā)生發(fā)展機(jī)制及預(yù)后因素的研究對于尋求有效的MM新免疫療法依然重要。

BCMA(CD269)屬于B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)的受體之一[7]，BAFF可調(diào)控惡性B細(xì)胞的增殖，BAFF及其受體參與了MM的存活、分化與增殖，在MM的病理生理中發(fā)揮重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)[8]，BAFF和APRIL基因在MM細(xì)胞株和初(難)治、復(fù)發(fā)MM患者的表達(dá)水平均顯著增加?？扇苄訠CMA在骨髓瘤患者中高表達(dá)，其表達(dá)高低與患者疾病進(jìn)展及預(yù)后具有相關(guān)性，因此BAFF-BCMA軸在B細(xì)胞腫瘤的細(xì)胞生理中可能起著至關(guān)重要的作用。

BST-2(CD317)是一種II型跨膜蛋白，早期研究發(fā)現(xiàn)CD317可通過調(diào)控免疫應(yīng)答發(fā)揮抗病毒、抗炎癥作用。近年研究表明[9～12]，CD317是一個(gè)腫瘤相關(guān)抗原，在多發(fā)性骨髓瘤、B淋巴瘤、肺癌、子宮內(nèi)膜癌、慢性B 淋巴細(xì)胞白血病等均有表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象，提示可能參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。盡管CD317在腫瘤生物學(xué)領(lǐng)域的作用機(jī)制尚不明確，但已有不少該領(lǐng)域的專家如Chiriva-Internati教授等[13]和Carpenter等[14]開展了靶向CD317的抗腫瘤治療研究。

缺鐵性貧血是一種由于體內(nèi)的貯存鐵不足，影響血紅蛋白的合成而導(dǎo)致的貧血。缺鐵性貧血患者的骨髓中有較為豐富的有核細(xì)胞，且巨核細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量均屬正常狀態(tài)?？蛇x作為本實(shí)驗(yàn)有效的陰性對照。

本研究分析MM細(xì)胞表面CD269，CD317的表達(dá)水平及與CD56，CD117，CD19，CD20表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果表明：CD269，CD317在MM患者漿細(xì)胞表面有較高的陽性表達(dá)率，證實(shí)CD269和CD317參與了MM的發(fā)生發(fā)展過程。與CD56表達(dá)率呈正相關(guān)，與CD117表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)，而與CD19，CD20表達(dá)率不相關(guān)。CD56與骨髓瘤細(xì)胞向骨髓基質(zhì)定位有關(guān)。正常漿細(xì)胞不表達(dá)CD56，骨髓瘤細(xì)胞可異常表達(dá)。有研究表明CD56錨定作用可以限制骨髓瘤的髓外侵襲，因此與良好預(yù)后相關(guān)[15]。Pan等[16]研究發(fā)現(xiàn)，CD56陰性MM患者更易伴有腎功能不全及髓外浸潤，這可能與患者的不良預(yù)后相關(guān)。CD117是一種腫瘤相關(guān)標(biāo)志物，CD117高表達(dá)可能與高腫瘤負(fù)荷及高增殖活性有關(guān)。本研究中CD269，CD317陽性組CD56表達(dá)率顯著高于陰性組，CD117表達(dá)率顯著低于陰性組，初步認(rèn)為表達(dá)CD269，CD317的MM患者腫瘤負(fù)荷較小、增殖減低，可能預(yù)后較好。

有研究顯示[17]，血清β2-微球蛋白及LDH在MM疾病發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中發(fā)揮著重要作用，其表達(dá)水平的高低與MM病情進(jìn)展存在密切的關(guān)聯(lián)，國外學(xué)者[18]研究證實(shí)血清β2-微球蛋白是MM分期的重要指標(biāo)之一，與腫瘤負(fù)荷存在一定相關(guān)性[19]；而LDH是機(jī)體內(nèi)糖酵解中重要代謝酶，惡性腫瘤及血液型疾病患者血清中LDH表達(dá)水平將出現(xiàn)明顯升高現(xiàn)象[20]。

本研究結(jié)果表明：CD269，CD317陽性組Hb含量、血清β2-MG水平低于陰性組，CD269，CD317表達(dá)水平與血清Hb含量、β2-MG水平呈負(fù)相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與LDH水平無相關(guān)性(P>0.05)，提示CD269，CD317陽性MM患者預(yù)后良好。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)揭示了CD269，CD317在初診MM患者中的免疫表型特點(diǎn)及免疫診斷和預(yù)后價(jià)值，目前國內(nèi)尚無CD269，CD317在MM免疫診斷和預(yù)后意義中的相關(guān)報(bào)道，還需擴(kuò)大樣本量、延長預(yù)后因素的觀察時(shí)間、積累更多的其他有關(guān)MM骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、融合基因、細(xì)胞遺傳學(xué)診斷方面以及其他預(yù)后因素臨床資料進(jìn)行更深入研究。

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