靳慶娥，蘇建榮

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京　100050)

乳腺癌病因復(fù)雜，是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所致，涉及到諸多原癌基因和抑癌基因的失調(diào)。脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase，SYK)是非受體酪氨酸蛋白激酶家族一員，最早發(fā)現(xiàn)其在淋巴細(xì)胞分化成熟和免疫細(xì)胞活化過(guò)程中起重要作用[1，2]。隨著研究深入發(fā)現(xiàn)其在許多腫瘤中都存在差異表達(dá)，扮演了原癌基因和抑癌基因的雙重角色[3]。SYK 在乳腺癌、鼻咽癌等腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，研究顯示乳腺癌、鼻咽癌中SYK的低表達(dá)受其啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化影響[4，5]。但關(guān)于SYK功能性位點(diǎn)rs290987與乳腺癌相關(guān)性的研究目前鮮有報(bào)道。本文以北京地區(qū)漢族女性人群為研究對(duì)象，分析了乳腺癌患者和正常人群rs290987位點(diǎn)多態(tài)性的差異，為臨床實(shí)踐提供了參考。

1　材料和方法

1.1研究對(duì)象選取2015年7月～2016年6月臨床明確診斷為乳腺癌的57例女性患者作為實(shí)驗(yàn)組，平均年齡48.8±8.9歲。取同期與之年齡相匹配的60例健康查體女性作為對(duì)照組，平均年齡48.9±8.0歲。所有研究對(duì)象均為漢族。所有入組人員均簽署知情同意書(shū)。

1.2試劑和儀器全血DNA提取試劑盒購(gòu)自QIAGEN(Cat.No.51104)，啟動(dòng)子區(qū)擴(kuò)增引物由生工生物(上海)股份公司合成，梯度PCR擴(kuò)增儀購(gòu)自Bio-Rad，高速離心機(jī)購(gòu)自Eppendorf公司。血清SYK ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢華美公司。

1.3方法采集空腹靜脈血3 ml，應(yīng)用試劑盒提取基因組DNA，采用PCR聯(lián)合DNA測(cè)序方法檢測(cè)各標(biāo)本-803位點(diǎn)的基因型。ELISA方法定量檢測(cè)血清SYK的水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理?；蛐头植疾捎忙?遺傳平衡吻合度Hardy-Weinberg檢驗(yàn)。組間比較采用Pearsonχ2檢驗(yàn)。多態(tài)位點(diǎn)與乳腺癌相關(guān)性采用非條件Logistic回歸模型進(jìn)行分析，采用比值比(odd ratio，OR)和95%置信區(qū)間(confidence interval，CI)表示相對(duì)危險(xiǎn)度。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)乳腺癌組和對(duì)照組基因型分布經(jīng)檢驗(yàn)均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，具有群體代表性 (χ2=0.864，P=0.352；χ2=0.529，P=0.466)。

2.2乳腺癌組和對(duì)照組SYK-803位點(diǎn)基因型和等位基因分布差異乳腺癌組與對(duì)照組相比，基因型和等位基因分布頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.617，P=0.010；χ2=5.393，P=0.020)。

2.3SYK-803A>T多態(tài)性與乳腺癌相關(guān)性分析見(jiàn)表1。對(duì)基因型和年齡分別做單因素分析(χ2=6.672，P=0.036；t=0.016，P=0.987)，根據(jù)給出的P值，將基因型納入回歸模型，而年齡未納入模型，OR和P值也未經(jīng)年齡校正。病例組T等位基因頻率高于對(duì)照組(χ2=5.348，P=0.021)。攜帶T等位基因的個(gè)體(TA+TT)罹患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶A等位基因(AA)的2.87倍(OR=2.87；95% CI=1.27～6.49)。

表1

不同組間SYK-803位點(diǎn)基因型和等位基因分布及與乳腺癌相關(guān)性[n(%)]

2.4乳腺癌組和對(duì)照組血清SYK水平比較乳腺癌組血清SYK水平低于對(duì)照組(4 128.7±508.9 pg/ml vs 4 858.0±413.1 pg/ml)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=33.278，P<0.01)。

3討論乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是多基因參與多步驟協(xié)同作用的結(jié)果，其中包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。啟動(dòng)子區(qū)CpG甲基化和單核苷酸多態(tài)影響轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合而導(dǎo)致mRNA轉(zhuǎn)錄下調(diào)是抑癌基因失活的最常見(jiàn)機(jī)制。由于種族、遺傳和各種致癌因素的復(fù)雜性，乳腺癌個(gè)體在組織形態(tài)、免疫表型和治療效果等方面都存在很大差異。暴露于同樣的環(huán)境中，有些人發(fā)生腫瘤，另一些人則不發(fā)生腫瘤，這說(shuō)明個(gè)體的遺傳易感因素在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

SYK具有雙重功能，在血液系統(tǒng)腫瘤中扮演原癌基因角色，在上皮源性腫瘤中常發(fā)揮抑癌基因功能。乳腺癌組織中SYK低表達(dá)增加了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)并與不良預(yù)后相關(guān)。目前對(duì) SYK 在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)多集中在甲基化和相關(guān)機(jī)制研究。而SYK啟動(dòng)子區(qū)的遺傳變異與許多腫瘤的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[6]，例如在鼻咽癌中SYK啟動(dòng)子區(qū)SNP影響其與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合而使mRNA表達(dá)下調(diào)。Kim等[7]發(fā)現(xiàn)SYK內(nèi)含子8(rs290227)G等位基因增加了人們患血管性癡呆(VaD)的風(fēng)險(xiǎn)。Faryal等[8]對(duì)207例乳腺癌患者進(jìn)行SYK外顯子和外顯子/內(nèi)含子交界處測(cè)序，共發(fā)現(xiàn)10種類型突變，這些突變使患乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)至少增加5倍(P<0.000 1)，并且某些突變還影響了其與miRNA的相互作用進(jìn)而影響SYK的可變剪切。有研究顯示乳腺癌病例中SYK5’UTR和5’SD的SNP能導(dǎo)致突變蛋白的產(chǎn)生進(jìn)而影響腫瘤的侵襲和遷移[9]。

本文以-803A>T SNP為切入點(diǎn)，分析乳腺癌組和正常對(duì)照組基因型和等位基因分布頻率的差異，探討了該遺傳變異與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。結(jié)果顯示兩組間基因型和等位基因分布頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與攜帶AA野生基因型相比，攜帶TA和TT基因型者罹患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)分別增加了2.77倍和3.13倍。在中國(guó)南方漢族人群中，SYK-803A>T的(TA+TT)基因型是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，該多態(tài)可能引起轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)改變進(jìn)而影響SYK基因轉(zhuǎn)錄，增加攜帶該等位基因個(gè)體發(fā)展成結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)[10]。本文結(jié)果顯示該位點(diǎn)也是乳腺癌發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。文獻(xiàn)報(bào)道血清SYK和VEGF-C聯(lián)合檢測(cè)是食管癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要預(yù)測(cè)分子；血清SYK水平與肺腺癌淋巴結(jié)受累程度呈負(fù)相關(guān)。本文結(jié)果顯示乳腺癌組血清SYK水平顯著低于正常對(duì)照組，因此血清SYK水平與乳腺癌發(fā)病也密切相關(guān)。

除-803外，SYK啟動(dòng)子區(qū)還包括多個(gè)SNP位點(diǎn)，對(duì)于其它位點(diǎn)與-803是否有連鎖不平衡關(guān)系，是否與乳腺癌有相關(guān)性，都需要后續(xù)進(jìn)一步研究。要明確SYK基因啟動(dòng)子區(qū)-803位點(diǎn)SNP與乳腺癌易感性的確切關(guān)系尚需更多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和擴(kuò)大地域范圍。

參考文獻(xiàn)：

[1]Coopman PJ，Do MT，Barth M，et al．The SYK tyrosine kinase suppresses malignant growth of human breast cancer cells[J]．Naure，2000，406(6797)：742-747．

[2]Sada K，Takano T，Yanagi S，et al．Structure and function of Syk protein-tyrosine kinase[J]．J Biochem，2001，130(2)：177-186．

[3]Krisenko MO，Geahlen RL．Calling in SYK：SYK’s dual role as a tumor promoter and tumor suppressor in cancer[J]．Biochim Biophys Acta，2015，1853(1)：254-263．

[4]李璐，梁輝，陳群蓉．鼻咽癌組織中SYK基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化分析[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，30(2)：39-41，45．

Li L，Liang H，Chen QR．Methylation of SYK gene promoter region in nasopharyngeal carcinoma[J]．J Mol Lab Med，2015，30(2)：39-41，45．

[5]Yuan Y，Mendez R，Sahin A，et al．Hypermethylation leads to silencing of the SYK gene in human breast cancer[J]．Cancer Res，2001，61(14)：5558-5561．

[6]Blancato J，Graves A，Rashidi B，et al．SYK allelic loss and the role of SYK-regulated genes in breast cancer survival[J]．PLoS One，2014，9(2)：e87610．

[7]Kim Y，Kong M，Lee C．Association of intronic sequence variant in the gene encoding spleen tyrosine kinase with susceptibility to vascular dementia[J]．World J Biol Psychiatry，2013，4(3)：220-226．

[8]Faryal R，Ishfaq M，Hayat T，et al．Novel SYK gene variations and changes in binding sites of miRs in breast cancer patients[J]．Cancer Biomark，2016，16(3)：319-326．

[9]Kanwal S，Kayani MA，F(xiàn)aryal R．Identification of novel SNPs in SYK gene of breast cancer patients：computational analysis of SNPs in the 5’UTR[J]．Mol Biol Rep，2012，39(8)：8345-8351．

[10]Peng H，Huang J，Hu Y，et al．Associations between polymorphisms in the SYK promoter and susceptibility to sporadic colorectal cancer in a Southern Han Chinese population-a short report[J]．Cell Oncol，2015，38(2)：165-172．