張玉香 王藝霖 王鵬珍 劉玉偉 王雅娟 楊文秀

[摘 要]目的 探討萬壽菊中葉黃素的測定方法，為葉黃素產品的產業(yè)化生產提供依據。方法 選取高效液相色譜法以萬壽菊為原料提取葉黃素，利用watersC18色譜柱；將甲醇：乙腈=40：60為流動相；流速控制在1mL·min-1；柱溫30℃；檢驗波長445nm；體積5μL；外標法定量，測定萬壽菊中葉黃素的含量。結果 葉黃素含量在8.99-44.68μg·mL-1范圍內，葉黃素濃度和峰面積存在良好線性關系；樣本總體回收率為99.35%；萬壽菊干花葉黃素含量顯著高于顆粒中的含量。結論 高效液相色譜法在測定萬壽菊中葉黃素含量當中有著顯著作用，該方法準確度、靈敏度以及專屬性強，能夠有效測定萬壽菊中葉黃素含量，并為工業(yè)制取提供有力支持。

[關鍵詞]萬壽菊 葉黃素 測定

中圖分類號：J514 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2018）09-0398-01

葉黃素是一種天然色素，色澤鮮艷，易于著色，營養(yǎng)價值高，而且安全無毒副作用，因此在食品、藥品、化妝品等領域有著十分廣泛的應用，應用范圍也在不斷擴大。萬壽菊當中具有豐富的葉黃素含量，而在測定葉黃素的過程當中也有多種方法可供選用，當前主要包括紫外可見分光光度法和高效液相色譜法。前者只能檢測出葉黃素和衍生物的總含量，難以對游離態(tài)的葉黃素含量進行準確測定，而后者則可以有效突破這一缺陷，可以有效提高結果準確度以及特定效率。下面將對高效液相色譜法對萬壽菊中葉黃素的測定進行探討。

1、材料與方法

1.1 實驗材料

本次實驗選擇的材料是萬壽菊干花和顆粒物；葉黃素對照品（總含量在95%以上）

1.2 儀器與試劑

根據高效液相色譜法測定萬壽菊中葉黃素的實際需要需要選用以下儀器：高效液相色譜儀、多頭磁力攪拌器、旋轉蒸發(fā)器、循環(huán)水式真空泵等。需要選用的實驗試劑主要有：乙醇、乙酸乙酯等分析純；甲醇乙腈色譜純。

1.3 實驗方法

首先，對此次研究的對照品溶液進行置位，選用精密稱取儀器選取葉黃素對照品2.23mg，利用已經將對照品進行溶解，定容到含量為25毫升的容量瓶當中，獲得89.7μg·mL-1葉黃素儲備液。其次，對此次研究當中的高效液相色譜條件進行調節(jié)，具體為：watersC18色譜柱；將甲醇：乙腈=40：60為流動相；流速控制在1mL·min-1；柱溫30℃；檢驗波長445nm；體積5μL。最后，制備樣品液。將萬壽菊干花/顆粒進行粉碎過篩，稱取過篩完成后的粉末5g，在其中加入100ml的四氫呋喃/無水乙醇混合液以及含量為80%的10ml KOH溶液。在40℃的溫度條件下用儀器攪拌4個小時，過濾和濾渣，用四氫氟喃洗滌濾渣，濾液通過旋蒸除去溶劑。用乙酸乙酯洗下旋蒸瓶當中的浸膏，再一次完成過濾之后將濾液收集起來，用乙酸乙酯定容。從中精確移取1ml，利用乙腈定容到10ml容量瓶當中，用微孔過濾，最終得到樣品液。

1.4 計算方法

利用高效液相色譜法對萬壽菊當中的葉黃素進行含量的測定，需要先計算出提取葉黃素的質量，之后通過葉黃素質量/萬壽菊顆粒質量得到萬壽菊當中葉黃素的含量。

2、結果

葉黃素含量在8.99-44.68μg·mL-1范圍內，葉黃素濃度和峰面積存在良好線性關系；樣本總體回收率為99.35%；萬壽菊干花葉黃素含量顯著高于顆粒中的含量。

3、討論

萬壽菊也被叫做金盞菊，是一種草本植物，含有豐富的葉黃素。葉黃素是天然色素，在水果、蔬菜、藻類生物當中都廣泛存在，是優(yōu)質天然色素以及抗氧化劑。天然葉黃素，有著非常突出的應用功能，如可以保護人體視力，淡化老年斑，預防癌癥、動脈硬化等疾病，與此同時還有著提高人體免疫力，促進微循環(huán)以及延緩衰老和提高人體生命活力的價值，是優(yōu)質抗氧化劑之一，同時也在藥品、化妝品、食品等各個領域有著廣泛的應用，可以滿足安全無毒和無副作用的要求，有著突出的研究和應用價值。葉黃素是植物中的黃金，而且萬壽菊產量也在逐步提高，但是針對于在萬壽菊中測定葉黃素含量以及萬壽菊當中開發(fā)利用葉黃素等問題還需要進行深層次的研究，特別是還與國外存在極大差距，仍然需要大量依賴進口。因此，加強對萬壽菊中葉黃素測定技術和開發(fā)利用方法的分析和研究顯得至關重要，也有著十分廣闊的前景。

通過大量的文獻報道以及實踐經驗總結可以發(fā)現，高效液相色譜法是當前測定萬壽菊中葉黃素含量的重要技術手段，當前已經成為了主要檢測方法，因為這一方法有著極強的選擇性和靈敏度，能夠顯著提高分離的質量和效率，能夠滿足定量以及定性分析的需求。憑借著高效液相色譜法在萬壽菊中葉黃素含量測定當中的諸多優(yōu)勢，這一方法得到了更多的關注。以往在利用這一技術檢測葉黃素時，將洗脫劑確定為二氯甲烷和乙酸乙酯，這樣的方法很容易造成基線漂移問題，分離效果以及分離后保存時間都得不到保障，極大程度上加大了成本和實際測定的難度。而且上面的兩種溶液會腐蝕高效液相色譜儀的管路。而在此次研究當中有關的實驗條件進行了優(yōu)化，把常規(guī)的洗脫劑甲醇乙腈作為改進條件，并通過調整有關比例投入的方式取得了較為突出的分離效果。

綜上所述，高效液相色譜法在測定萬壽菊中葉黃素含量當中有著顯著作用，該方法準確度、靈敏度以及專屬性強，能夠有效提高樣品回收率，降低雜質干擾，可以成為測定萬壽菊中葉黃素含量的穩(wěn)定方法。

參考文獻

[1] 陳麗梅.萬壽菊葉黃素的提取及分析方法研究進展[J].食品科學，2015，（16）：61-63.

[2] 孟祥河.高效液相法測定萬壽菊顆粒中葉黃素的含量[J].特產研究，2014，（5）：82-83.

[3] 張志強.薄層掃描法測定萬壽菊中葉黃素的含量[J].化學世界，2017，（9）：536-539.