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        傳統(tǒng)推拿“束悗療法”對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度、超氧化物歧化酶、丙二醛表達(dá)的影響

        2018-04-08 02:36:22劉明軍陳飛騰陳林青李躍宗
        中國老年學(xué)雜志 2018年6期
        關(guān)鍵詞:菌素中醫(yī)藥大學(xué)療法

        尚 坤 劉明軍 陳飛騰 李 波 王 蕾 陳林青 李躍宗 張 欣

        (長春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長春 130117)

        “束悗療法”的記載首見于《內(nèi)經(jīng)》,是一種中醫(yī)傳統(tǒng)推拿操作手法〔1〕。該手法選取四肢大血管或大神經(jīng)干走行線路為施術(shù)部位,以手指或手掌按壓局部并停留一定時間為主要操作手法,然后采用“緩按快放”或“快按緩放”的方式放開按壓部位以推動局部氣血運(yùn)行,達(dá)到疏通經(jīng)絡(luò)、活血止痛的治療目的。課題組曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)取得滿意療效〔1〕。本研究以傳統(tǒng)推拿“束悗療法”為主要干預(yù)手段,通過觀察DPN模型大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNCV)、坐骨神經(jīng)中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表達(dá)的改善情況開展相關(guān)機(jī)制研究。

        1 材料與方法

        1.1實(shí)驗(yàn)動物與分組選取雄性Wistar大鼠80只,鼠齡8 w,由長春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。分籠飼養(yǎng),每籠10只,食用標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠糧。按完全隨機(jī)設(shè)計法(隨機(jī)數(shù)字表)將大鼠分為對照組、模型組、推拿組、藥物組,每組20只。

        1.2實(shí)驗(yàn)藥品與試劑鏈脲佐菌素(美國Sigma公司,1 g/瓶);彌可保(甲鈷胺注射液,衛(wèi)材中國藥業(yè)有限公司,500 μg/支);MDA、SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

        1.3實(shí)驗(yàn)儀器推拿手法測定儀(TAP-Ⅱ型,上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)發(fā)展有限公司);Medlab-u/4cs生物信號采集處理系統(tǒng)(南京美易科技有限公司);光學(xué)顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司);酶標(biāo)儀(Bio-rad,美國)。

        1.4方法

        1.4.1動物模型的制備取實(shí)驗(yàn)大鼠60只,將鏈脲佐菌素臨用前用pH值4.2~4.5的0.1 mol/L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液避光條件下配成1%濃度溶液,按劑量50 mg/kg于實(shí)驗(yàn)大鼠左下腹腔內(nèi)單次注射,72 h后取尾血測血糖,凡血糖>16.7 mmol/L作為糖尿病大鼠。血糖未達(dá)標(biāo)的造模大鼠,補(bǔ)打30 mg/kg 0.1%鏈脲佐菌素,72 h后測血糖,不足要求則棄去。如此在1 w后血糖仍>16.7 mmol/L,且從形態(tài)上有周圍神經(jīng)病變出現(xiàn),SNCV明顯降低時,即制成周圍神經(jīng)病變模型大鼠。另取實(shí)驗(yàn)大鼠20只,用0.1 mol/L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液(pH4.2、4℃)按同體積左下腹腔內(nèi)單次注射,72 h后取尾血測血糖,作為對照組。實(shí)驗(yàn)中的模型組、藥物組各死亡2只,推拿組死亡1只。

        1.4.2干預(yù)方法①推拿組:將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥,固定其頭部與上肢。施術(shù)者以左手牽拉大鼠一側(cè)下肢,使下肢伸直呈水平位,以右手拇指指腹緩慢按壓于大鼠腹股溝處,力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為1 kg,持續(xù)30 s左右,然后突然抬手,停止按壓,即“緩按快放”;間隔60 s左右,再次以右手拇指指腹快速按壓于大鼠腹股溝處,力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為1 kg,持續(xù)30 s左右,然后緩慢抬手,停止按壓,即“快按緩放”。如此操作3次。以上治療方法每日早晚操作2次,共治療8 w。②藥物組:將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥,捆綁固定,每日1次,每次10 min。根據(jù)人與動物體表面積計算法換算注射彌可保,大鼠用藥量為50 μg/kg,隔日注射于下肢肌肉,左右腿交替注射,以利于吸收,共治療8 w。③對照組和模型組:將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥,捆綁固定,每日1次,每次10 min,共8 w。

        1.4.3檢測指標(biāo)及方法將實(shí)驗(yàn)大鼠治療8 w后尾靜脈取血以檢測血糖。以電子秤稱取每只大鼠體重后,腹腔注射10%水合氯醛(350 mg/kg)進(jìn)行麻醉,將大鼠俯臥固定于固定架上,暴露出坐骨神經(jīng),用無菌玻璃剝離器輕輕剝離坐骨神經(jīng)并游離下來,應(yīng)用生物信號采集處理系統(tǒng),測得SNCV,然后迅速將坐骨神經(jīng)放入液氮中,放入-70℃冰箱中存放,以備勻漿。

        1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0軟件進(jìn)行方差分析、秩和檢驗(yàn)。

        2 結(jié) 果

        2.1各組SNCV比較與對照組SNCV〔(35.47±2.65)m/s〕比較、模型組SNCV明顯降低〔(25.66±2.84)m/s〕(P<0.01),證明實(shí)驗(yàn)造模成功。與模型組比較,推拿組SNCV明顯增加〔(33.82±2.29)m/s〕(P<0.01),藥物組也明顯增加〔(32.17±2.73)m/s〕(P<0.01),提示推拿“束悗療法”和藥物療法能夠有效改善DPN大鼠SNCV;推拿組與藥物組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

        2.2各組坐骨神經(jīng)SOD、MDA水平比較與對照組比較,坐骨神經(jīng)SOD水平顯著降低、MDA水平顯著增高(P<0.01),證明實(shí)驗(yàn)造模成功。與模型組比較,推拿組坐骨神經(jīng)SOD水平顯著增加、MDA水平顯著降低(P<0.01),與模型組比較,藥物組坐骨神經(jīng)SOD、MDA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

        表1 各組坐骨神經(jīng)SOD、MDA表達(dá)比較

        與對照組比較:1)P<0.05,2)P<0.01;與模型組比較:3)P<0.01

        3 討 論

        “束悗療法”是一種中醫(yī)傳統(tǒng)推拿操作手法〔1〕,其最早記載見于《內(nèi)經(jīng)》。在《靈樞·雜病篇》中記載:“痿厥為四末束悗,乃疾解之,日二,不仁者,十日而知,無休。病已止?!敝饕囊馑际窃谥委燄糌拾Y病人時,將患者四肢捆綁起來,待其產(chǎn)生憋悶脹痛感覺后,迅速解開,每天治療2次,原本四肢沒有知覺的患者在治療10 d之后就會產(chǎn)生知覺,這種治療方法不要停止,直到患者痊愈為止??梢姡笆鴲幆煼ā敝械摹笆?,意為約束,束縛;“悗”,《辭海》解釋為“煩悶”,《靈樞·五亂》中記載有“清濁相干,亂于胸中,是謂大悗”。由此引申束悗具有約束阻滯之意。《靈樞集注》中曾批注“夫按之束之,皆導(dǎo)引之法,猶尺蠖之欲伸而先屈也”??梢?,在治療氣機(jī)不暢、麻痹不仁的病癥時,可以在四肢脈位運(yùn)用束悗按抑的手法,達(dá)到通郁開閉、導(dǎo)氣通達(dá)的治療目的。然而,現(xiàn)代推拿臨床中,源于中醫(yī)傳統(tǒng)古籍的束悗療法卻鮮有應(yīng)用,僅散見于個別理論性的文獻(xiàn)探討中〔2〕。

        現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,DPN的病理表現(xiàn)一是營養(yǎng)神經(jīng)的血管出現(xiàn)病變,表現(xiàn)為毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞增生或基底膜增厚;二是神經(jīng)本身出現(xiàn)病變,主要表現(xiàn)為神經(jīng)纖維軸索的損傷或構(gòu)成髓鞘或神經(jīng)內(nèi)膜的施萬細(xì)胞的變性壞死〔3,4〕。中醫(yī)則認(rèn)為,DPN屬于“痹證”、“痿證”之范疇,多由于氣虛失運(yùn)、血虛不榮、痰瘀阻滯或風(fēng)濕痹阻等原因?qū)е戮植垦骶徛?,瘀阻脈道,皮肉經(jīng)脈失去氣血濡養(yǎng)而痿廢不用〔5,6〕。這與DPN所表現(xiàn)出來的臨床癥狀是相吻合的。課題組在也曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療DPN并取得滿意療效〔1〕。

        鏈脲佐菌素是一種廣譜抗菌素,不但具有抗菌、抗腫瘤的功效,還由于其對胰島β細(xì)胞高度選擇性的毒性作用而具有致糖尿病的副作用〔7~9〕。同時,由于鏈脲佐菌素對組織毒性相對較小,動物存活率高,是國內(nèi)外經(jīng)常使用的制備糖尿病動物模型的成熟方法。神經(jīng)電生理檢查是早期診斷DPN的敏感指標(biāo),神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢是糖尿病出現(xiàn)神經(jīng)病變的一個先兆,常常用于評價臨床療效與預(yù)后情況。

        有研究表明,當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)高血糖后,高糖引起線粒體中的超氧陰離子增多,誘發(fā)周圍細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激,最終造成糖尿病的各種慢性并發(fā)癥〔10〕。自由基是反映機(jī)體氧化應(yīng)激的直接指標(biāo),但是自由基具有短瞬即逝的特性,實(shí)驗(yàn)中難以測定。但是一些蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA自由基損傷的終產(chǎn)物作為反映氧化應(yīng)激的可靠指標(biāo)和間接指標(biāo)則能夠檢測到。MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物,其在坐骨神經(jīng)中表達(dá)的高低能夠反映出脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的程度,也反映出機(jī)體細(xì)胞受到自由基攻擊的嚴(yán)重程度;SOD是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)部重要的自由基清除酶,其表達(dá)的高低直接反映了機(jī)體清除自由基的能力〔11,12〕。因此,神經(jīng)組織內(nèi)MDA、SOD表達(dá)的高低能夠直接反映神經(jīng)組織損傷及修復(fù)狀態(tài)。

        本研究發(fā)現(xiàn),傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN大鼠模型下肢SNVC,表明對周圍神經(jīng)功能恢復(fù)具有有效的促進(jìn)作用;同時“束悗療法”能夠提高坐骨神經(jīng)中SOD的表達(dá),降低MDA的表達(dá),表明具有抗氧化的作用從而發(fā)揮保護(hù)坐骨神經(jīng)形態(tài)功能的療效。

        1劉鵬,張燕,李躍宗.“束悗療法”治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變〔J〕.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013;29(5):880-1.

        2曠時恩,曠晉.束悗療法在傷病治療的臨床應(yīng)用〔J〕.中華推拿療法雜志,2004;2(4):15-6.

        3沈薇,董繼宏,汪聽.糖尿病周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制及治療展望〔J〕.中國臨床神經(jīng)科學(xué),2008;16(2):204-7.

        4Laybutt DR,Kaneto H,Hasenkam PW,etal.Increased expression of antioxidant and antiapoptotic genes in islets that may contribute top-cell survival during chronic hyperglycemia〔J〕.Diabetes,2002;51(2):413-23.

        5逄紫千,謝占峰,閻慧.針刺對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠尾神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的影響〔J〕.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011;27(4):523-5.

        6逄紫千,閻慧,解占峰.針刺對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)組織病理學(xué)的影響〔J〕.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012;28(4):594-6.

        7Raekietan N,Raekietan ML,Nadkarni MR.Studies on diabetogenic action of Stre-Ptozotoein(NSC-37917)〔J〕.Cancer Chemother Rep,1963;29:91-8.

        8于德民,吳銳,尹雑,等.實(shí)驗(yàn)性鏈脲佐菌素糖尿病動物模型的研究〔J〕.中國糖尿病雜志,1995;3(2):105-9.

        9黃繼漢,黃曉陣,陳志揚(yáng),等.藥理試驗(yàn)中動物間和動物與人體間的等效劑量換算〔J〕.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004;9(9):1069-72.

        10Brownlee M.The pathobiology of diabetic complieations:a unifying methanism〔J〕.Diabeties,2005;54(6):1615-25.

        11Ceriello A,Bortolotti N,Falleti E,etal.Total radicaltrapping antioxidant parameter in NIDDM,patients〔J〕.Diabetes Care,1997;20:194-7.

        12Blaszczak R,Klljawski K,Kedziora-Kornatowska K,etal.The total antioxidant capacity and low-molecular antioxidant concentration in plasma of type-2 diabetes patients with different stage of metabolic compensation and concomitant diabetic nephropathy〔J〕.Pol Merkuriusz Lek,2005;18(103):29-32.

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