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        手足口病患兒心肌酶等血清指標(biāo)的分析

        2018-03-31 06:07:51黎曼儂李季梅
        中國婦幼健康研究 2018年1期
        關(guān)鍵詞:普通型危重口病

        王 喆,張 倩,黎曼儂,黎 麗,李季梅,張 鳳

        (1.昆明市婦幼保健院檢驗(yàn)科;2.兒科,云南 昆明 650031)

        手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)是臨床上發(fā)病率較高的傳染性疾病,近年來雖然相關(guān)衛(wèi)生條件有所改善,但HFMD的發(fā)病率仍然可達(dá)0.6%以上[1],近3年來呈現(xiàn)出了明顯上升的趨勢,且在部分地區(qū)容易呈現(xiàn)暴發(fā)流行,嚴(yán)重影響了小兒的生命健康。長期的HFMD疾病的進(jìn)展可導(dǎo)致心肌炎、心內(nèi)膜炎、肺水腫以及腦膜炎的發(fā)生,預(yù)后不佳[2-3]。

        心臟以及腦部神經(jīng)組織是HFMD較為常見的累及器官或者組織,對于心腦等重要器官的損傷是增加HFMD患兒后遺癥發(fā)生的主要因素。在HFMD發(fā)病的早期通過檢測血清學(xué)分子標(biāo)志物或者其他輔助檢查方法,可以為早期糖皮質(zhì)激素、神經(jīng)營養(yǎng)性藥物的及時(shí)臨床干預(yù)提供參考,從而降低遠(yuǎn)期神經(jīng)系統(tǒng)等并發(fā)癥的發(fā)生,改善預(yù)后。α-羥基丁酸脫氫酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase,α-HBDH)、乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase mulscle brain,CK-MB)等是評估心肌細(xì)胞損傷的重要標(biāo)志[4],而為神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、酸性鈣結(jié)合蛋白S100(S-100β)是評估神經(jīng)系統(tǒng)損傷和受累的重要標(biāo)志[5],本次研究重在探討相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)在不同程度的HFMD患者中的異常表達(dá),進(jìn)而為早期診斷HFMD患者的心臟以及腦部神經(jīng)組織的損傷提供重要參考。

        1資料與方法

        1.1一般資料

        選取2016年1月至2016年3月在昆明市婦幼保健院治療的手足口病患兒179例,其中21例為危重型患兒,89例為重型患兒,69例為普通型患兒,同時(shí)選取本院門診健康體檢兒童30例(對照組),納入標(biāo)準(zhǔn):①手足口病診斷符合衛(wèi)生部2010年版《手足口病診療指南》[6];②患兒家屬知情同意并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①近3個(gè)月有上呼吸道感染或手術(shù)史;②合并有神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

        1.2標(biāo)本采集及檢測方法

        患者于入院當(dāng)時(shí)采肘靜脈血,2mL血樣在室溫下靜置30分鐘后,4 000r/min離心10分鐘分離血清,并將血清置于4℃搖床上,避免溶血的發(fā)生,將血清置于Eppendorf管中,-80℃超低溫冰箱保存,避免反復(fù)凍融,為減小批間誤差和測量誤差,全部標(biāo)本采集完成后一次性成批檢測LDH、α-HBDH、CK和CK-MB水平。放射免疫試劑盒購自南京凱基生物科技有限公司,生化檢測儀器Olmypus 640購自上海精密儀器有限公司。

        CTnI的檢測采用化學(xué)發(fā)光法檢測,采肘靜脈血2mL血樣在室溫下靜置30分鐘后,4 000r/min離心10分鐘分離血清,Beckman counter DXI80 儀器購自上海精密儀器有限公司。

        采肘靜脈血2mL血樣在室溫下靜置30分鐘后,4 000r/min離心10分鐘分離血清,4℃保存待測,以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶,靜置15min后混勻,對比稀釋為7個(gè)濃度,取出板條,除了對照孔外每個(gè)孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,劑量為100μL/孔,采用封板蓋封住,室溫反應(yīng)120分鐘,使用PBS液體洗滌3次,除了空白對照孔,每孔加入檢測液(100μL),室溫孵育1小時(shí),PBS洗滌3次,加入底物(50μL/孔),避光孵育25分鐘,加入終止液5分鐘后測定450nm處吸光度。酶標(biāo)儀科華KBH ST-300購自上海精密試驗(yàn)儀器有限公司,NSE、S-100抗體購自南京凱基生物科技有限公司,配套試劑購自羅氏檢測公司,嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行操作。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        數(shù)據(jù)處理分析應(yīng)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料采用(χ±S)表示,組間比較使用方差分析,兩兩比較使用LSD檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2結(jié)果

        2.1患兒基本情況

        各組患兒一般臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

        表1各組患兒一般臨床資料比較[χ±S,n(%)]

        Table 1 Comparison of general clinical data of children among groups[χ±S,n(%)]

        組別例數(shù)(n)年齡(y)男/女危重型212.32±0.8113(61.90)/8(38.10)重型892.40±0.7551(57.30)/38(42.70)普通型692.37±0.9442(60.87)/27(39.13)對照組302.41±0.8819(63.33)/11(36.67)F/χ22.1810.458P>0.05>0.05

        2.2各組血清心肌酶及心肌肌鈣蛋白Ⅰ比較

        手足口病患兒血清LDH、α-HBDH、CK和CK-MB明顯高于對照組,而CTnI明顯低于對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);危重型手足口病患兒血清LDH、α-HBDH、CK和CK-MB分別為(402.13±34.29)IU/L、(312.37±61.92)IU/L、(154.20±17.82)IU/L和(27.83±9.04)IU/L,均明顯高于重型和普通型患兒,而CTnI為(0.11±0.02)IU/L,明顯低于重型和普通型患兒,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(具P<0.05),見表2。

        表2  各組血清心肌酶及CTnI比較(χ±S)

        注:a與對照組比較P<0.05;b與普通型比較P<0.05;c與重型比較P<0.05。

        2.3各組血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶含量比較

        危重型和重型手足口病患兒NSE為(27.10±6.52)ng/mL和(19.43±6.10)ng/mL,均高于普通型患兒和對照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);危重型患兒NSE水平高于重型患兒,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);普通型和對照組NSE比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),見表3。

        表3各組血清NSE含量比較(ng/mL,χ±S)

        Table 3Comparison of serum NSE levels among groups (ng/mL,χ±S)

        組別例數(shù)(n)NSEFP危重型2127.10±6.52abc重型8919.43±6.10ab32.104<0.05普通型6911.20±3.22對照組3010.53±2.81

        注:a與對照組比較P<0.05;b與普通型比較P<0.05;c與重型比較P<0.05。

        2.4各組血清S-100蛋白水平比較

        表4各組血清S-100含量比較(pg/mL,χ±S)

        Table 4Comparison of the content of serum S-100β among groups(pg/mL,χ±S)

        組別例數(shù)(n)S?100bFP危重型21730.14±42.19abc重型89420.11±32.27ab54.291<0.05普通型69314.20±45.58對照組30302.82±56.73

        注:a與對照組比較P<0.05;b與普通型比較P<0.05;c與重型比較P<0.05。

        3討論

        3.1手足口病患兒心肌損傷及神經(jīng)系統(tǒng)累及的血清標(biāo)志物研究背景

        HFMD主要發(fā)生在5歲以下的兒童,潛伏期多為2~10天,平均3~5天,多數(shù)HFMD急性起病,發(fā)熱、口痛、厭食、口腔黏膜出現(xiàn)散在皰疹或潰瘍,位于舌、頰黏膜及硬額等處為多。嚴(yán)重的HFMD患兒在發(fā)病1~5天出現(xiàn)腦膜炎、腦炎(以腦干腦炎最為兇險(xiǎn))、腦脊髓炎、肺水腫、循環(huán)障礙等,少數(shù)病例病情危重,可致患兒死亡。HFMD導(dǎo)致的患兒腦部及心臟的損傷,是HFMD的主要病因。然而迄今為止臨床上對于HFMD發(fā)病早期的心臟及腦組織損傷的診斷缺乏有效依據(jù),血清學(xué)Cox A16、EV 71等抗原檢測耗時(shí)較長,費(fèi)用較高,多在HFMD發(fā)病6~7d以后才逐漸上升[7],且Cox A16、EV 71等抗原水平檢測并不能提示HFMD腦組織及心肌細(xì)胞損傷程度[8-9]。LDH、α-HBDH、CK和CK-MB等是評估心肌細(xì)胞損傷的重要標(biāo)志,在正常人群中由于心肌細(xì)胞膜完整而難以進(jìn)入循環(huán)血中,而HFMD由于腸道病毒對于心肌及腦組織的損傷,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞膜的破裂,細(xì)胞內(nèi)的LDH、α-HBDH、CK和CK-MB釋放入血,導(dǎo)致外周血中的相關(guān)指標(biāo)顯著上升。但迄今為止對于相關(guān)指標(biāo)的研究僅僅限于心肌梗死患者,而對于HFMD患兒特別是年齡小于3歲的患者,相關(guān)心肌損傷指標(biāo)的生物學(xué)標(biāo)記作用研究不足;NSE主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織中,可以通過促進(jìn)α-磷酸甘油轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇丙酮酸,在神經(jīng)元細(xì)胞損傷后,細(xì)胞內(nèi)的NSE透過血腦屏障進(jìn)行循環(huán)血中,進(jìn)而導(dǎo)致外周血中的NSE的上升[10-11];S-100蛋白作為神經(jīng)元標(biāo)志性酸性蛋白,主要存在于角質(zhì)細(xì)胞和施萬細(xì)胞中,對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷具有重要的標(biāo)志作用[12-13],雖然相關(guān)研究探討了S-100及NSE在HFMD中的異常表達(dá),但對于S-100和NSE與不同病情嚴(yán)重程度的HFMD的關(guān)系的探討不足。本次研究的創(chuàng)新性在于首次綜合性分析了5種肌損傷指標(biāo)在HFMD中的表達(dá),并通過患兒的皮膚黏膜損傷、心腦損傷等進(jìn)行分級,進(jìn)而進(jìn)一步探討S-100和NSE對于早期評估心腦損傷的價(jià)值。

        3.2心肌酶譜、肌鈣蛋白I等對于手足口病心臟損傷的評估價(jià)值

        本次研究發(fā)現(xiàn),LDH、α-HBDH、CK和CK-MB在HFMD患者體內(nèi)明顯高于正常對照組,雖然上升的幅度不一,但多數(shù)指標(biāo)可上升50%以上,其中LDH可上升至402.13±34.29IU/L,而CK-MB可上升至27.83±9.04IU/L,相關(guān)心肌細(xì)胞損傷指標(biāo)的上升提示在HFMD發(fā)病早期通過檢測血清中LDH、α-HBDH等可以為早期診斷以及臨床干預(yù)提供參考。但有趣的是,雖然CTnI也作為心肌損傷指標(biāo),但在重型及危重型HFMD患者血清中顯著下降,其中危重型患兒的血清CTnI僅為0.11±0.02IU/L,明顯低于正常對照人群,這與Tan等[8]研究者報(bào)道的CTnI平均上升30%~45%數(shù)據(jù)不符,其主要考慮主要與危重患兒的損傷主要表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)的受累,雖然心肌細(xì)胞存在一定的損傷,但鑒于本次研究中ELISA檢測患兒血清相關(guān)指標(biāo)的時(shí)間在發(fā)病8h以后,半衰期較短,多數(shù)可能已經(jīng)腎臟的排泄和肝臟的代謝,故表現(xiàn)為CTnI的下降,但仍然需要進(jìn)一步研究和探討。

        3.3神經(jīng)元特異性烯醇化酶和S-100蛋白在評估手足口病患兒神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的價(jià)值

        NSE參與腦神經(jīng)元細(xì)胞的磷酸甘油的代謝,并對于神經(jīng)元損傷具有特異性的標(biāo)志作用,本次研究中HFMD患兒的血清NSE明顯高于正常對照人群,且病情越重,患兒的血清NSE的表達(dá)越高,其中危重型和重型手足口病患兒NSE可達(dá)20ng/mL左右,表明NSE可以作為早期診斷HFMD的潛在指標(biāo),同時(shí)通過動態(tài)檢測血清NSE的表達(dá)能夠?yàn)樵u估HFMD的腦神經(jīng)元損傷程度提供參考。Isgro等[14]和陳迪等[15]學(xué)者通過分析了43例重型HFMD患兒的血清NSE資料,發(fā)現(xiàn)NSE可平均上升45%以上,且NSE大于25ng/mL時(shí),患兒發(fā)生腦膜炎及腦干腦炎的幾率可上升5%以上,預(yù)后不佳。S-100蛋白是一種反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的特異性物質(zhì),通過對于神經(jīng)元細(xì)胞膜上的磷脂羥基末端的修飾作用,進(jìn)而參與神經(jīng)元細(xì)胞的相關(guān)生理性代謝,S-100蛋白的上升往往提示神經(jīng)元細(xì)胞膜的損傷,本次研究中危重型和重型HFMD患兒血清中的S-100均明顯高于正常對照人群,且危重組患兒的指標(biāo)上升更為明顯,提示S-100蛋白是評估HFMD患兒腦組織損傷的重要指標(biāo),可以在一定程度上反映患兒的腦損傷程度。

        3.4總結(jié)與展望

        綜上所述,血清心肌酶及心肌肌鈣蛋白的檢測能盡早發(fā)現(xiàn)手足口病患兒心肌損害,從而有利于早期臨床干預(yù)進(jìn)而改善預(yù)后,NSE和S-100蛋白在危重型和重型手足口病患兒中明顯增高,與病情的嚴(yán)重程度有關(guān),臨床上通過檢測血清中的NSE或者S-100蛋白水平的表達(dá),能夠?yàn)樵u估腦組織損傷提供參考。但需要注意的是本次研究中的CTnI表達(dá)下調(diào)與相關(guān)研究不符,希望后續(xù)研究可以在HFMD患兒發(fā)病后的不同時(shí)期進(jìn)行檢測,進(jìn)而進(jìn)一步探討CTnI的診斷或者預(yù)后隨訪價(jià)值。

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