唐強(qiáng) 張峻崢 段煉 熊玉玲 粱紹偉 范勇 王智勇

（1重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科 重慶 401520）（2?？谑腥嗣襻t(yī)院耳鼻咽喉科 海南 ?？?570100）

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤(sinonasal inverted papilloma,SNIP)是鼻腔鼻竇常見的黏膜上皮源性良性腫瘤，具有侵襲性生長(zhǎng)，易復(fù)發(fā)及易惡變的特點(diǎn)。本研究著重從INP、SNIP、NSCC3種病理形態(tài)出發(fā),采用RT-PCR法檢測(cè)Msx2,topoⅡ-a及HPV16在3種組織中的表達(dá)情況來探討3個(gè)因子在SNIP惡變發(fā)生發(fā)展過程中的相關(guān)性和作用,為臨床治療提供理論依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

選取2011—2013年在我科收治患者的原發(fā)病灶新鮮組織標(biāo)本33例：INP10例,男5例,女5例；平均年齡48歲。SNIP13例：男9例，女4例，平均年齡51歲。其中SNIP組又分不典型增生輕度5例，不典型增生中度4例及不典型增生重度4例。NSCC10例：男8例，女2例，平均年齡56歲。所有組織均保存于RNA保存液中并放入-80℃冰箱中。

1.2 方法

采用熒光定量PCR儀7000型(美國(guó)ABI公司)進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn),實(shí)時(shí)熒光定量擴(kuò)增曲線得到Ct值。步驟如下：（1）RNA提?。翰捎肨rizol試劑提取細(xì)胞RNA：將新鮮組織、TRIzol 1ml放入勻漿器，冷凍勻漿，置Eppendorf管中移至室溫狀態(tài)5min。與0.2ml氯仿混合并充分震蕩，4℃放置10min，12000 r/min離心7min；吸取上清400υl，加入異丙醇400υl，4℃放置10min，12000r/min離心7min；棄上清，加入1ml75%的乙醇，4℃靜止10min，12000r/min離心10min，棄上清，瞬時(shí)離心20s，靜置10min（于超凈工作臺(tái)），用無(wú)酶水溶解RNA。（2）RT-PCR檢測(cè)目的基因的表達(dá)：反應(yīng)體系為20ul在PCR管中加入待測(cè)基因上游及下游引物，cDNA模板SYBRGreen試劑，將配制好的PCR反應(yīng)溶液置于Realtime PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，過程如下：95℃2mim預(yù)變性，95℃變性15s，60℃退火40s，擴(kuò)增45個(gè)循環(huán)。所有樣品均設(shè)3個(gè)平行管，重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2.結(jié)果

2.1 3組病變組織中Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表達(dá)

Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表達(dá)程度，均為NSCC組＞SNIP組＞INP組,且3組之間差異顯著(P＜O.05)。詳見表1。

2.2 Msx2.topoⅡ-a.HPV16在SNIP三組不同病理間的表達(dá)

在SNIP三組不同的病理形態(tài)分組中Msx2.topoⅡ-a.HPV16均有表達(dá)，表達(dá)程度重度不典型增生組＞中度不典型增生組＞輕度不典型增生組，兩兩比較差異顯著(P＜O.05)。詳見表2。

表1 3組鼻腔鼻竇病變組織中Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表達(dá)

表2 SNIP不典型增生程度間Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表達(dá)

3.討論

本研究結(jié)果顯示在INP，SNIP，NSCC三組中，Msx2.topoⅡ-a.HPV16三種因子表達(dá)程度為NSCC組＞SNIP組＞INP組，且在SNIP中，表達(dá)情況也為重度＞中度＞輕度，說明在三種基因的表達(dá)水平與組織的惡性程度密切相關(guān)。

HPV16是目前公認(rèn)的腫瘤惡變因子，Msx2是可調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡的基因，topoⅡ-a是調(diào)節(jié)細(xì)胞核酸功能的重要基因。故Msx2和topoⅡ-a反映了SNIP的增殖速度及惡性程度的生物學(xué)行為，可作為新的評(píng)判SNIP發(fā)展及預(yù)后的參考指標(biāo)，通過對(duì)這2種指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，有助于判斷SNIP的復(fù)發(fā)，惡變潛能及預(yù)后，在臨床干預(yù)及藥物的靶向治療等方面具有重要意義。

【參考文獻(xiàn)】

[1]張峻崢,楊一兵,湯勇,吳錫芳,叢林海,阮標(biāo).Msx2、topoⅡ-α、HPV16及VEGF在鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的定量及意義[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014,28(23)：1819-1823.