李紅 張偉斌 陸明實(shí)

（廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 廣東 廣州 510080 ）

大腸癌目前在我國(guó)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，于惡性腫瘤中位居第三位，對(duì)患者身心健康的影響較大，且死亡率較高，應(yīng)引起高度重視[1]。近幾年，隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，分子靶向藥物治療在大腸癌臨床治療中獲得了廣泛運(yùn)用。相關(guān)研究也表明，表皮生長(zhǎng)因子受體在大腸癌中出現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，KRAS作為表皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路中的重要作用基因，參與了該病的發(fā)生與進(jìn)展[2]?；诖耍狙芯繛榱诉M(jìn)一步探討大腸癌的病理類型與KRAS基因突變的關(guān)系，選取本院2016年8月~2017年8月期間診治的62例大腸癌患者的臨床資料展開(kāi)回顧性分析，總結(jié)匯報(bào)如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取在本院外科手術(shù)治療的62例大腸癌患者作為研究對(duì)象，均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：（1）滿足大腸癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）臨床資料完整且有效；均排除以下患者：（1）合并其他腫瘤或組織病變者；（2）意識(shí)障礙無(wú)法正常溝通。患者：男34例，女28例；年齡26～81歲，平均（50.7±11.3）歲；原發(fā)部位：直腸48例，左半結(jié)腸5例，右半結(jié)腸9例；浸潤(rùn)深度：淺肌層以內(nèi)3例，深肌層6例，全層53例；臨床分期：I期12例，II期38例，III期24例，IV期10例；病理類型：高分化腺癌9例，中分化腺癌27例，低分化腺癌15例，黏液性腺癌11例；出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移10例。

1.2 方法

所有患者均行手術(shù)切除大腸癌組織標(biāo)本，經(jīng)10%的中性緩沖福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋。進(jìn)行HE染色，于顯微鏡下觀察腫瘤病理學(xué)特征。選取腫瘤組織豐富的蠟塊，切片，運(yùn)用Maxwell系統(tǒng)提取人類基因組DNA，濃度運(yùn)用Nanodrop 1000 spectroptometer檢測(cè)，運(yùn)用液相芯片技術(shù)平臺(tái)檢測(cè)KRAS基因突變情況，包括KRAS外顯子2、3，檢測(cè)系統(tǒng)為L(zhǎng)uminex 200，檢測(cè)過(guò)程分為多重PCR擴(kuò)增目的的基因片段、多余核苷酸及引物去除、等位基因特意引物延伸、雜交反應(yīng)、數(shù)據(jù)讀取五個(gè)步驟。KRAS目的基因Ct值小于38且其差值的絕對(duì)值小于8，則視為基因突變，列入KRAS突變型組，否則為KRAS野生型組[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，組間對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05提示差異顯著。

2.結(jié)果

62例大腸癌標(biāo)本中，共檢出22例KRAS基因突變，突發(fā)發(fā)生率為35.5%。不同病理類型患者的KRAS基因突變發(fā)生率對(duì)比，差異不顯著（P＞0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的KRAS基因突變發(fā)生率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，對(duì)比差異顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表。

表 大腸癌的臨床病理與KRAS基因突變的關(guān)系[n（%）]

3.討論

RAS基因家族與人類腫瘤相關(guān)的基因有三種——HRAS、KRAS和 NRAS，其中KRAS基因?qū)θ祟惏┌Y影響最大，它好像分子開(kāi)關(guān)：當(dāng)正常時(shí)，能調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)的路徑；當(dāng)發(fā)生突變時(shí)，則導(dǎo)致細(xì)胞持續(xù)生長(zhǎng)，削弱細(xì)胞的分化功能，細(xì)胞增殖失控而癌變，并使癌細(xì)胞在脫離表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路的控制下生長(zhǎng)，進(jìn)而促使癌細(xì)胞的擴(kuò)散[4]。美國(guó)的一項(xiàng)研究表明，對(duì)于KRAS基因突變的癌癥患者，給予表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑治療難以見(jiàn)效[5]。由此可見(jiàn)，檢測(cè)KRAS基因突變對(duì)癌癥患者的臨床治療具有重要的意義。

相關(guān)研究報(bào)道顯示，我國(guó)大腸癌患者出現(xiàn)KRAS基因突變的概率約為36.7%[6]。本研究組共檢出22例KRAS基因突變，發(fā)生率為35.5%，與文獻(xiàn)報(bào)道相近。本研究結(jié)果還顯示，不同病理類型患者的KRAS基因突變發(fā)生率無(wú)明顯差異，但有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的KRAS基因突變發(fā)生率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，由此分析，大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與KRAS基因突變密切相關(guān)。

綜上所述，大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與KRAS基因突變具有一定的相關(guān)性，檢測(cè)KRAS基因突變有助于評(píng)估患者疾病的預(yù)后及指導(dǎo)治療。以上所做基因突變分析均在益善測(cè)試中心完成。

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