韓芬

VSMC在臨床上被認(rèn)為是產(chǎn)生多種動(dòng)脈疾病的細(xì)胞水平根源, 若VSMC加速生長, 則會(huì)在很大程上導(dǎo)致高血壓、冠心病及糖尿病等血管疾病的發(fā)生, 臨床研究認(rèn)為對(duì)VSMC增殖進(jìn)行抑制可對(duì)心血管疾病的預(yù)防和控制起到良好的作用［1］。丹參酮ⅡA具有溶脂性, 可對(duì)人體的血管細(xì)胞皮進(jìn)行有效保護(hù), 同時(shí)也可對(duì)血小板聚集進(jìn)行抑制, 從而對(duì)心肌缺血區(qū)的冠狀動(dòng)脈血流量情況進(jìn)行有效的改善, 對(duì)VSMC增殖的抑制效果良好［2］。本文主要是通過實(shí)驗(yàn)的方式對(duì)丹參酮ⅡA抑制VSMC增殖作用進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取體重在125 g左右、身體健康的雄性SD大鼠120只, 分為對(duì)照組、A組和B組, 各40只。

1.2 材料與試劑

1.2.1 材料 丹參酮ⅡA(上海第一生化藥業(yè)有限公司), 低糖DMEM培養(yǎng)液(上?；鄯f生物科技有限公司), 胎牛血清(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

1.2.2 試劑 V-FITC、Binding Buffer細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(上海研卉生物科技有限公司), RT-PCR試劑盒(北京天根生化科技有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 將全部大鼠脫臼處死, 將其腹主動(dòng)脈取下后祛除內(nèi)膜與外周結(jié)締組織, 所有操作過程均為無菌操作。使用具有預(yù)冷效果的PBS將大鼠的中膜組織進(jìn)行沖洗, 剪成小塊后放置于培養(yǎng)瓶中, 將細(xì)胞放置于含有濃度為10%的FBS的DMEM低糖培養(yǎng)液當(dāng)中, 并在濃度為5%的CO2、溫度約為37℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。1周后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在其組織邊處爬出, 之后平均隔1 d進(jìn)行1次培養(yǎng)液的更換, 當(dāng)細(xì)胞處于80%左右的融合狀態(tài)后, 進(jìn)行傳代, 并取VSMC的4～6代完成純化后進(jìn)行分組干預(yù)：對(duì)照組在VSMC中加入濃度為30%的50 μl FBS培養(yǎng)液；A組使用濃度為30%的25 μl FBS培養(yǎng)液、劑量為10 ml/L的25 μl丹參酮ⅡA；B組使用濃度為30%的25 μl FBS培養(yǎng)液、劑量為20 ml/L的25 μl丹參酮ⅡA。使用四唑鹽(MTT)法對(duì)細(xì)胞毒性進(jìn)行檢測、流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測。

1.4 觀察指標(biāo) 比較三組平滑肌細(xì)胞抑制情況及細(xì)胞凋亡情況、p21 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組平滑肌細(xì)胞抑制情況比較 平滑肌細(xì)胞抑制情況：A、B組的吸光度值(0.639±0.018)、(0.298±0.015)均低于對(duì)照組(1.432±0.121), 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；A組吸光度值高于B組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組平滑肌細(xì)胞抑制情況比較( ±s)

表1 三組平滑肌細(xì)胞抑制情況比較( ±s)

注：與對(duì)照組比較, aP＜0.05；與A組比較, bP＜0.05

組別 只數(shù) 吸光度值對(duì)照組 40 1.432±0.121 A組 40 0.639±0.018a B組 40 0.298±0.015ab

2.2 三組細(xì)胞凋亡情況、p21 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率、p21 mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于A、B組, B組的細(xì)胞凋亡率、p21 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于A組, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

臨床上對(duì)冠心病和高血壓等心腦血管疾病常會(huì)使用中藥方法進(jìn)行治療, 丹參屬于一種中藥藥材, 其性微寒、味苦,可作用于患者的心、肝等部位, 具有良好的活血通絡(luò)、清心除煩及止痛祛瘀的功效［3］。臨床上通過實(shí)驗(yàn)顯示丹參具有較強(qiáng)的藥理作用, 可有效增強(qiáng)患者的心肌收縮能力、對(duì)冠狀動(dòng)脈血管進(jìn)行擴(kuò)張、使血流量增加并能夠?qū)ζ湫呐K功能進(jìn)行改善等。丹參是丹參酮ⅡA的最主要成分, 能夠?qū)ζ交〖?xì)胞增殖情況進(jìn)行有效抑制, 具有積極的抗缺血缺氧、微循環(huán)的作用。在正常的生理狀況下, VSMC可對(duì)血管擴(kuò)張情況進(jìn)行有效調(diào)節(jié), 具有對(duì)血管功能的維持、對(duì)調(diào)節(jié)因子釋放的分泌作用［4,5］。但當(dāng)機(jī)體內(nèi)的血管內(nèi)皮功能發(fā)生損傷后, 多種的細(xì)胞因子會(huì)得到釋放, 并會(huì)作用于VSMC膜受體當(dāng)中, 從而將細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路進(jìn)行全面激活, 最終形成對(duì)VSMC的增殖促進(jìn)作用［6］。

在臨床上, 許多心血管疾病的病理基礎(chǔ)均為VSMC出現(xiàn)異常增殖情況而導(dǎo)致的［7］, 所以臨床上對(duì)VSMC增殖的抑制研究十分重視。本文主要是以SD大鼠作為研究對(duì)象, 通過對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈的培養(yǎng)來進(jìn)一步獲取VSMC, 在此基礎(chǔ)上使用丹參酮ⅡA進(jìn)行藥物干預(yù), 并使用MTT檢測法對(duì)大鼠的細(xì)胞毒性進(jìn)行檢測。通過檢測結(jié)果顯示, 直接加入FBS培養(yǎng)液的對(duì)照組的吸光度值明顯要高于使用劑量不同的丹參酮ⅡA+FBS培養(yǎng)液的A、B組(P＜0.05), 而A、B組進(jìn)行組間比較顯示, A組的吸光度值明顯高于B組(P＜0.05)；對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率與p21 mRNA表達(dá)量明顯低于A、B組(P＜0.05),B組的細(xì)胞凋亡率與p21 mRNA表達(dá)量明顯高于A組(P＜0.05)。由此可見使用丹參酮ⅡA可有效對(duì)VSMC的增殖進(jìn)行抑制。p21基因表達(dá)產(chǎn)物為p21蛋白, 是一種細(xì)胞周期性的調(diào)控蛋白, 若受到相關(guān)條件的誘導(dǎo)便會(huì)發(fā)生促進(jìn)細(xì)胞凋亡的情況［8-10］, 本研究中對(duì)照組的細(xì)胞凋亡、p21 mRNA表達(dá)量均低于A、B組, 可見丹參酮ⅡA可通過對(duì)p21 mRNA相對(duì)表達(dá)量的抑制, 進(jìn)而對(duì)VSMC增殖進(jìn)行有效抑制。

綜上所述, 丹參酮ⅡA對(duì)VSMC增殖的抑制作用顯著,且該藥物的機(jī)制在很大程度上同細(xì)胞周期蛋白p21的表達(dá)強(qiáng)度有關(guān)。

［1］ 李澤爭, 王葳, 王巍巍, 等.丹參酮ⅡA對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制探討.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2015, 16(10):861-865.

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