李 林

惡性黑素瘤的惡性程度較高，是1種危害人類健康的皮膚腫瘤。近年，伴隨生活環(huán)境和飲食習(xí)慣的改變，該病的發(fā)病率呈逐年增加趨勢(shì)[1]。目前惡性黑素瘤的發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚有待于闡明。SOX4基因是SOX(SRY-like HMG box)是1類重要核轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞的增殖、分化等功能，與腫瘤病情發(fā)展密切相關(guān)[2]?；蜓芯堪l(fā)現(xiàn)，SOX4基因在惡性黑素瘤中的具體作用尚未明確，本文檢測(cè)研究SOX4在惡性黑素瘤組織中的表達(dá)， 探討其在惡性黑素瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組共納入惡性黑素瘤患者70例，均為本院皮膚科收治的組織標(biāo)本，其中男性41例，女性29例；年齡30～70歲，平均(52.17±7.95)歲；病程3個(gè)月～2.5年，平均(13.49±3.88)個(gè)月；原發(fā)黑素瘤 39例，轉(zhuǎn)移性黑素瘤 31例；浸潤(rùn)深度根據(jù)Clark法[3]分級(jí)：Ⅰ～Ⅱ期27例；Ⅲ～Ⅳ期43例。Breslow[4]分級(jí)：Ⅰ～Ⅱ期31例；Ⅲ～Ⅳ期39例。惡性黑素瘤診斷：所有標(biāo)本經(jīng)組織病理和免疫組化檢查(S100、HMB45均為陽(yáng)性)證實(shí)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合惡性黑素瘤診斷者；②年齡>18歲；③首次發(fā)病者；④患者知情。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他類型腫瘤者；②伴心、肝腎等器官嚴(yán)重障礙者；③患有其他類型皮膚病者；④資料遺失者。同期收集正常皮膚組織30例作為對(duì)照組，其中男性17例，女性13例；年齡35～70歲，平均(50.85±7.99)歲。所有正常皮膚標(biāo)本者體檢(心電圖、血液生化等)提示均正常。兩組患者間的性別、年齡比較，P均>0.05，兩組患者間具有可比性。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

標(biāo)本處理：組織標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定過(guò)夜，常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，片厚5 μm，敷于多聚賴氨酸預(yù)先處理的玻片上，晾干，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。染色方法：切片脫蠟至水，3%雙氧水室溫孵育約10 min，PBS浸泡2次，5 min/次，5%～10%正常山羊血清室溫孵育30 min，傾去血清，勿洗；滴加一抗(兔抗人SOX4)工作液，4 ℃過(guò)夜，PBS沖洗3次；用含有生物素標(biāo)記二抗的工作液室溫孵育30 min，PBS沖洗3次，用辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液在室溫孵育30 min；PBS沖洗后DAB 顯色，自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染；脫水，透明，封片。

1.3 結(jié)果判斷

陽(yáng)性反應(yīng)為惡性黑素瘤組織呈棕褐色或棕黃色顆粒，高倍鏡下(×400)隨機(jī)選3個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野下陽(yáng)性細(xì)胞，依據(jù)SOX4的染色強(qiáng)度計(jì)分和判斷標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)色(0分)，淡黃色(1分)，棕黃色(2分)，棕褐色(3分)。陽(yáng)性細(xì)胞百分率不著色為0分，<10%為1分，10%～50%為2分，>50%為3分。上述兩類積分相乘為最后積分：0～1分為(一)，2～3分為(+)，4～6分為(++)，>6分為(+++)[5]。積分判定由2名病理科醫(yī)生進(jìn)行。

1.4 分析指標(biāo)

①比較兩組研究對(duì)象的SOX4陽(yáng)性積分。②分析SOX4陽(yáng)性積分與惡性黑素瘤臨床病理特征的相關(guān)性。③分析SOX4表達(dá)與惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行分析，用表示計(jì)量資料，比較進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組SOX4陽(yáng)性表達(dá)積分比較

惡性黑素瘤組患者的SOX4陽(yáng)性表達(dá)積分明顯高于對(duì)照組，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 兩組SOX4陽(yáng)性表達(dá)積分比較分]

2.2 SOX4陽(yáng)性表達(dá)與惡性黑素瘤臨床特征的關(guān)系

惡性黑素瘤組織中SOX4陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)，與Breslow分級(jí)、Clark分級(jí)和潰瘍形成顯著相關(guān)(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 SOX4陽(yáng)性表達(dá)與惡性黑素瘤臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 SOX4陽(yáng)性表達(dá)與惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3組惡性黑素瘤患者SOX4陽(yáng)性表達(dá)率分別為69.23%、95.45%、100.00%，轉(zhuǎn)移組明顯高于原位組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 SOX4陽(yáng)性表達(dá)與惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討論

惡性黑素瘤源于神經(jīng)嵴黑素細(xì)胞，具有高侵襲、高轉(zhuǎn)移等臨床特征。目前臨床治療惡性黑素瘤的方法包括化學(xué)治療、手術(shù)和生物治療等，由于惡性黑素瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物具有較好的耐受性，且轉(zhuǎn)移性高，常規(guī)化療無(wú)法有效殺滅癌細(xì)胞[6]。研究表明，在早期階段對(duì)惡性黑素瘤給予手術(shù)為主，患者的預(yù)后好[7]。因此，探討惡性黑素瘤的早期臨床特征相關(guān)標(biāo)志物或與其病情發(fā)展、轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)具有重要意義。近年，與惡性黑素瘤臨床特征相關(guān)的標(biāo)志物陸續(xù)得到報(bào)道，如腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞[8]、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-C[9]、缺氧誘導(dǎo)因子1[10]及金屬蛋白酶抑制劑4[11]等，然而惡性黑素瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移涉及多種因子、蛋白和基因，對(duì)惡性黑素瘤作出全面、精確的早期診斷，探求其他有效的標(biāo)志物是當(dāng)前臨床面臨的重要醫(yī)學(xué)問(wèn)題。

SOX4為SOX 轉(zhuǎn)錄因子家族成員，在腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡或分化中發(fā)揮了雙重作用(促癌和抑癌效應(yīng))[12]。研究表明，SOX4在多種腫瘤組織中的表達(dá)呈升高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)展發(fā)展聯(lián)系密切[12]。越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn)，SOX4在許多腫瘤如乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌及肝癌中的表達(dá)顯著升，目前雖然SOX4在腫瘤病情中發(fā)揮作用的具體機(jī)制尚不清楚[13]。本研究觀察發(fā)現(xiàn)，惡性黑素瘤患者的SOX4陽(yáng)性表達(dá)積分明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。因此，SOX4可能與惡性黑素瘤的發(fā)生發(fā)展聯(lián)系密切。為了進(jìn)一步探討SOX4表達(dá)與惡性黑素瘤臨床病理特征及其轉(zhuǎn)移的關(guān)系，筆者分析了SOX4陽(yáng)性表達(dá)與惡性黑素瘤患者的年齡、性別、分期、浸潤(rùn)等的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：惡性黑素瘤組織SOX4陽(yáng)性表達(dá)與與年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)，與Breslow分級(jí)、Clark分級(jí)和潰瘍形成有顯著性差異(P<0.01)。因此，SOX4表達(dá)與惡性黑素瘤臨床病理特征聯(lián)系密切。

晚期惡性黑素瘤的臨床治療效果較差，患者的生存率和生存時(shí)間均較低，惡性黑素瘤病灶細(xì)胞轉(zhuǎn)移是其主要因素之一。惡性黑素瘤具有高度侵襲性，可向身體任何部位轉(zhuǎn)移，其中約1/3的惡性黑素瘤可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如可轉(zhuǎn)移至肺、腎上腺、胃及腦等部位，這些患者的預(yù)后取決于惡性黑素瘤的轉(zhuǎn)移位置[14]。故筆者分析SOX4陽(yáng)性表達(dá)與惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，將所有患者分為原位組、局部轉(zhuǎn)移組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組，結(jié)果顯示：3組惡性黑素瘤患者的SOX4陽(yáng)性表達(dá)率分別為69.23%、95.45%、100%，轉(zhuǎn)移組明顯高于原位組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。因此，SOX4陽(yáng)性表達(dá)改變是惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)。

SOX4參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制尚待闡明。SOX4在多種腫瘤中呈上調(diào)表達(dá)，其可促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡，以此促進(jìn)腫瘤發(fā)生，SOX4促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞增殖介導(dǎo)了腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移[12]。在黑色素瘤中SOX4能夠結(jié)合NF-κB p50啟動(dòng)子的上游靶位，抑制p50表達(dá)，達(dá)到干擾腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的效果。SOX4表達(dá)與惡性黑素瘤發(fā)生、發(fā)展及其轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。

綜上所述，惡性黑素瘤患者組織標(biāo)本中SOX4呈上調(diào)表達(dá)，且與患者的臨床病理特征呈顯著性相關(guān)，是臨床評(píng)價(jià)其轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要標(biāo)志物。

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