蘆國芳，安建雄，馬 鈞，錢曉焱，王 永，楊小榮

抑郁癥是危害人類健康和情感性行為的主要疾病之一。據(jù)Mathers和Loncar[1]預(yù)計(jì)，到2030年抑郁癥在全球疾病致殘率和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的排名中將位居第二。Phillips等[2]2009年在英國TheLancet雜志上發(fā)表文章，稱中國抑郁癥的患病率為6.1%，按其比率推算，國內(nèi)抑郁癥患者已達(dá)到9 000萬。由于抑郁癥發(fā)病機(jī)制尚不清楚,至今尚缺乏防治抑郁癥的理想方法。然而，已有大量研究表明大腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的神經(jīng)炎癥在抑郁癥中扮有重要角色，此外，大量研究證實(shí)三氧可有效抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)[3]，已有研究表明小膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的炎癥反應(yīng)是抑郁癥發(fā)生與發(fā)展的重要原因[4-6]。然而迄今尚無三氧防治抑郁癥的報(bào)道。本研究通過建立抑郁癥小鼠模型，檢測(cè)各組小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量與炎癥因子白介素(interleukin,IL)-1β，IL-6和腫瘤壞死因子(tumer necrosis factor- α,TNF-α)的表達(dá)水平，探究三氧對(duì)抑郁癥小鼠的防治作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 C57BL/6J小鼠40只，清潔級(jí)，雄性，體重20～30 g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證編號(hào)：SCXK(京)2016-0011；醫(yī)用三氧水由三氧氣體溶于500 mL的醫(yī)用滅菌水配制而成的，溶液為80 μg/mL由醫(yī)用三氧治療儀(德國，Ozomed Basic)完成；特制的50 mL離心管；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(美國，Panlab，Harvard Apparatus)；免疫組化IBA1一抗(日本W(wǎng)ako公司)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)試劑盒(康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型制備 將40只小鼠隨機(jī)分為4組，即模型組、模型加三氧組、對(duì)照組和對(duì)照加三氧組(預(yù)防性干預(yù)及治療性干預(yù)小鼠數(shù)量和分組方法一致)，對(duì)模型組和模型加三氧組小鼠進(jìn)行連續(xù)7 d每天1 h的束縛應(yīng)激(為保證模型成功，每天束縛小鼠時(shí)間需一致)制備抑郁癥小鼠模型[7]。

1.2.1.1 三氧預(yù)防性干預(yù) 造模前3 d對(duì)模型加三氧組和對(duì)照加三氧組進(jìn)行腹腔注射三氧水(80 μg/mL，0.1 mL/10 g)干預(yù)，模型組和對(duì)照組腹腔注射0.9%生理鹽水設(shè)為對(duì)照，1/2d，共5次。

1.2.1.2 三氧治療性干預(yù) 造模成功后，對(duì)模型加三氧組和對(duì)照加三氧組進(jìn)行腹腔注射三氧水(80 μg/mL，0.1 mL/10 g)干預(yù)，模型組和對(duì)照組腹腔注射0.9%生理鹽水設(shè)為對(duì)照，1/2d，共5次。

1.2.2 行為學(xué)測(cè)試 自三氧干預(yù)結(jié)束起進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)(tail suspension test,TST)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(forced swimming test,FST)、新環(huán)境抑制進(jìn)食實(shí)驗(yàn)(novelty suppressed feeding test，NSFT)和開放曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(open field test,OFT)行為學(xué)測(cè)試,實(shí)驗(yàn)順序隨機(jī)，為期5 d。

1.2.2.1 TST 實(shí)驗(yàn)前60 min，將小鼠移至安靜的測(cè)試房，以緩解動(dòng)物緊張情緒。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠尾巴用膠帶固定起來懸掛在實(shí)驗(yàn)架(高于地面50 cm)上，實(shí)驗(yàn)持續(xù)6 min，前2 min統(tǒng)計(jì)小鼠不動(dòng)前的潛伏期時(shí)間，后4 min統(tǒng)計(jì)小鼠不動(dòng)總時(shí)間，全程通過高清數(shù)碼攝像機(jī)記錄實(shí)驗(yàn)過程[8]。

1.2.2.2 FST 實(shí)驗(yàn)前60 min，將小鼠移至安靜的測(cè)試房，以緩解動(dòng)物緊張情緒。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠置于直徑15 cm，水深10 cm,水溫(20±2)℃的上方開口圓柱形玻璃容器中，實(shí)驗(yàn)持續(xù)6 min，前2 min統(tǒng)計(jì)小鼠不動(dòng)前的潛伏期時(shí)間，后4 min統(tǒng)計(jì)小鼠不動(dòng)的總時(shí)間，全程通過高清數(shù)碼攝像機(jī)記錄實(shí)驗(yàn)過程[9]。

1.2.2.3 NSFT 實(shí)驗(yàn)前1 d將實(shí)驗(yàn)小鼠換至新鼠籠，24 h后進(jìn)行測(cè)試。實(shí)驗(yàn)前60 min，將小鼠移至安靜的測(cè)試房，實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠置于40 cm× 40 cm×40 cm的上方開口的玻璃盒中，在玻璃盒的中央放置一白色器皿，其上放一顆鼠糧，從把小鼠放入玻璃盒中開始計(jì)時(shí)至小鼠開始進(jìn)食為止，實(shí)驗(yàn)持續(xù)5 min,若5 min內(nèi)小鼠無進(jìn)食，則記為5 min，全程通過高清數(shù)碼攝像機(jī)記錄實(shí)驗(yàn)過程[10]。

1.2.2.4 OFT 實(shí)驗(yàn)前60 min,將小鼠移至安靜的測(cè)試房并打開軟件記錄日期，小鼠標(biāo)號(hào)后進(jìn)行測(cè)試，實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠置于曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)裝置60 cm×60 cm×60cm中心區(qū)域，通過曠場(chǎng)設(shè)備上方的攝像機(jī)及其相連的監(jiān)視器觀察5 min內(nèi)小鼠的活動(dòng)情況，包括休息時(shí)間、運(yùn)動(dòng)距離與速度，進(jìn)入中心區(qū)域的次數(shù)和時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將小鼠放回籠內(nèi)，用75%乙醇徹底擦拭實(shí)驗(yàn)裝置，并用紙巾擦干[11]。

1.2.3 取材 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用配制好的10%的水合氯醛(10 μL/g)進(jìn)行腹腔注射，待小鼠麻醉成功后剖開胸腔，從左心室插管，用加入肝素的生理鹽水進(jìn)行心室灌注，灌注速度為8 mL/min。待肝臟顏色由粉紅變透亮后取出全腦或立即分離海馬、額葉和杏仁核組織，全腦組織立即固定于4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行免疫組化染色(immunohistochemistry,IHC)，分離的各個(gè)腦區(qū)的組織液氮凍存用于RT-PCR檢測(cè)。

1.2.4 IHC染色 4%多聚甲醛固定的小鼠大腦經(jīng)過30%蔗糖脫水3 d，冰凍切片40 μm腦片浸泡于磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)中，換成含3% H2O2PBS孵育10 min。用PBS洗一遍，加入封閉液(30 mg/mL 5%封閉液)，20%山羊血清(1xPBS)搖床孵育1 h。吸去封閉液，加入稀釋的IBA1一抗，搖床孵育過夜。用PBS洗3遍，加入相應(yīng)的二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記)，搖床孵育2 h。用PBS洗3遍，加入二氧基聯(lián)苯胺顯色液顯色5 min，然后將腦片在PBS中貼到陽離子包被的載玻片上，晾干后經(jīng)乙醇梯度脫水二甲苯透明后用中性樹脂封片。

1.2.5 RT-PCR檢測(cè) RT-PCR檢測(cè)額葉、海馬及杏仁核中IL-1β、IL-6和TNF-α含量水平。

1.2.5.1 RNA抽提 取液氮冷凍右側(cè)海馬組織勻漿Trizol試劑盒(Promega)抽提總RNA。

1.2.5.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA 取1 μg總RNA,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Transgen)說明書逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

1.2.5.3 實(shí)時(shí)定量PCR cDNA用UltraSYRB supermix with ROX1(康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，定量反應(yīng)在Agilent Technologies Mx3005P定量PCR儀上進(jìn)行。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min，94 ℃變性5 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s，共進(jìn)行40次循環(huán)。PCR引物由primer bank以及在線Primer 3.0軟件設(shè)計(jì)，訂購于Life Technologies公司。引物序列分別為：IL-1β，上游引物GCAACTGTTCCTGAACTCAACT，下游引物ATCTTTTGGGGTCCGTCAACT；IL-6,上游引物TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC，下游引物TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC；TNF-α，上游引物CCCTCACACTCAGATCATCTTCT，下游引物GCTACGACGTGGGCTACAG。

2 結(jié)果

2.1 三氧預(yù)防性干預(yù) 預(yù)防性干預(yù)時(shí)間如圖1A。

2.1.1 行為學(xué)結(jié)果 在TST、FST、NSFT及OFT中，對(duì)照組與對(duì)照加三氧組各項(xiàng)行為學(xué)測(cè)試差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.056，P>0.05)。

2.1.1.1 TST 模型組不動(dòng)之前的潛伏期時(shí)間較對(duì)照組短(F=2.303,P<0.05)，模型組潛伏期時(shí)間較模型加三氧組短(F=3.478,P<0.05)(圖1F),后4 min總的不動(dòng)時(shí)間各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.807,P>0.05)(圖1E)。

2.1.1.2 FST 模型組不動(dòng)之前的潛伏時(shí)間較對(duì)照組短(F=3.144,P<0.05),模型組潛伏期時(shí)間較模型加三氧組短(F=3.112,P<0.05)(圖1C)。模型組后4 min總不動(dòng)的時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)(F=4.356,P<0.05)，模型組后4 min不動(dòng)的總時(shí)間較模型加三氧組長(zhǎng)(F=3.798，P<0.05)(圖1B)。

2.1.1.3 NSFT 模型組潛伏期時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)(F=3.499,P<0.05)，模型組較模型加三氧組潛伏期時(shí)間長(zhǎng)(F=2.809,P<0.05)(圖1D)。

2.1.1.4 OFT 我們監(jiān)測(cè)了小鼠行動(dòng)軌跡圖(圖G)，運(yùn)動(dòng)距離與速度，休息時(shí)間，進(jìn)入中心區(qū)域的次數(shù)與速度。從總區(qū)域運(yùn)動(dòng)距離與速度看，模型組運(yùn)動(dòng)距離較對(duì)照組短(F=4.528,P<0.05)，模型組運(yùn)動(dòng)距離較模型加三氧組短(F=2.478，P<0.05)。模型組運(yùn)動(dòng)速度較對(duì)照組慢(F=6.089,P<0.05)，模型組運(yùn)動(dòng)速度較模型加三氧組慢(F=3.125，P<0.05)(圖1H、1I)。從在中心區(qū)的休息時(shí)間看，模型組休息時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)(F=3.950,P<0.05)，模型組休息時(shí)間較模型加三氧組長(zhǎng)(F=4.908,P<0.05)(圖1J)。就進(jìn)入中心區(qū)域的速度來看，模型組較對(duì)照組運(yùn)行速度慢(F=2.256,P<0.05)，模型組休息時(shí)間較模型加三氧組短(F=3.675,P<0.05)(圖1K)。從進(jìn)入中心區(qū)域的次數(shù)可以看出各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.997,P>0.05)(圖1L)。

2.1.2 光鏡觀察各組小鼠同一部位海馬、額葉和杏仁核的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)(圖2A)及數(shù)量變化 在海馬、額葉及杏仁核中，對(duì)照組與對(duì)照加三氧組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.456，P>0.05)。模型組額葉區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組多(F=4.361,P<0.05)，模型組額葉區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較模型加三氧組多(F=3.112，P<0.05)。模型組海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組多(F=3.456,P<0.05)，模型組海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較模型加三氧組多(F=4.005，P<0.05)。各組小鼠杏仁核區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.012,P>0.05)(圖2B)。

2.1.3 RT-PCR檢測(cè)小鼠腦中額葉、海馬和杏仁核組織中炎癥因子IL-1β，IL-6和TNF-α的水平 對(duì)照組與對(duì)照加三氧組炎癥因子IL-1β，IL-6和TNF-α的水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.675，P>0.05)。額葉組織中，模型組炎癥因子TNF-α的水平高于對(duì)照組(F=2.265,P<0.05)，模型組TNF-α的水平高于模型加三氧組(F=4.556，P<0.05)，而2組IL-6、IL-1β的水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2C)。海馬組織中，模型組炎癥因子TNF-α、IL-1β的水平高于對(duì)照組(F=8.038,P<0.05)，模型組TNF-α、IL-1β的水平高于模型加三氧組(F=6.007，P<0.05)，而2組IL-6的水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2D)(F=5.808,P>0.05)。杏仁核組織中，各組IL-6、IL-1β和TNF-α的水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.124,P>0.05)(圖2E)。

圖1 三氧預(yù)防性干預(yù)行為學(xué)

圖2 三氧預(yù)防性干預(yù)海馬、額葉、杏仁核區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量

2.2 三氧治療性干預(yù) 治療性干預(yù)時(shí)間如圖3A。

2.2.1 行為學(xué)結(jié)果 在TST、FST、NSFT及OFT中，對(duì)照組與對(duì)照加三氧組各項(xiàng)行為學(xué)測(cè)試結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2.1.1 TST 模型組總的不動(dòng)時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組(F=3.765，P<0.05)，模型組與模型加三氧組總的不動(dòng)時(shí)間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.234,P>0.05)(圖3E)。模型組潛伏期時(shí)間與對(duì)照組及模型加三氧組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.096，P>0.05)(F=4.675，P>0.05)(圖3F)。

2.2.1.2 FST 模型組總的不動(dòng)時(shí)間較對(duì)照組短(F=4.567,P<0.05)，模型組與模型加三氧組總的不動(dòng)時(shí)間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.788，P>0.05)(圖3B)。模型組潛伏期時(shí)間較模型加三氧組長(zhǎng)(F=5.787，P<0.05)，模型組潛伏期時(shí)間與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.665，P>0.05)(圖3C)。

2.2.1.3 NSFT 模型組潛伏期時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)(F=3.004，P<0.05)，模型組潛伏期時(shí)間與模型加三氧組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.487,P>0.05)(圖3D)。

2.2.1.4 OFT 我們監(jiān)測(cè)了小鼠行動(dòng)軌跡圖(圖3G)，運(yùn)動(dòng)距離與速度，休息時(shí)間，進(jìn)入中心區(qū)域的次數(shù)與速度。從運(yùn)動(dòng)距離看，模型組與模型加三氧組及對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.825，P>0.05)(圖3H)。從休息時(shí)間看，模型組休息時(shí)間較模型加三氧組短(F=2.404,P<0.05)(圖3I)。就進(jìn)入中心區(qū)域的速度來看模型加三氧組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.347,P>0.05)(圖3K)。從進(jìn)入中心區(qū)域的次數(shù)可以看出，模型組進(jìn)入中心區(qū)域次數(shù)少于對(duì)照組(F=3.665，P<0.05)，而模型組與模型加三氧組進(jìn)入中心區(qū)域次數(shù)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3L)(F=1.761,P>0.05)。

圖3 三氧治療性干預(yù)行為學(xué)

2.2.2 光鏡觀察各組小鼠同一部位額葉、海馬和杏仁核的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)(圖4A)及數(shù)量變化 在額葉、海馬和杏仁核區(qū)域，對(duì)照組與對(duì)照加三氧組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.453，P>0.05)。在額葉、海馬和杏仁核區(qū)域，模型組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量均多于對(duì)照組(F=4.534，P<0.05)，模型組與模型加三氧組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.564，P>0.05)(圖4B)。

2.2.3 RT-PCR檢測(cè)小鼠腦中額葉、海馬和杏仁核組織中炎癥因子IL-1β，IL-6和TNF-α的水平 對(duì)照組與對(duì)照加三氧組炎癥因子IL-1β，IL-6和TNF-α的水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.895，P>0.05)。額葉組織中，模型組炎癥因子IL-1β、TNF-α的水平高于對(duì)照組(F=5.674,P<0.05)(F=3.022，P<0.05)，而模型組與模型加三氧組IL-1β、TNF-α的水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.452,P>0.05)，各組炎癥因子IL-6的水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.052，P>0.05)(圖4C)。海馬組織中模型組IL-6的水平高于模型加三氧組(F=3.354，P<0.05)，模型組IL-6的水平與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.889，P>0.05)，模型組TNF-α的水平高于對(duì)照組(F=2.677，P<0.05),模型組與模型加三氧組TNF-α和IL-1β的水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.454，P>0.05)(圖4D)。杏仁核組織中模型組TNF-α的水平均低于對(duì)照組與模型加三氧組(F=3.948，P<0.05)，模型組IL-6的水平高于對(duì)照組(F=3.044，P<0.05)，模型組與模型加三氧組IL-6的水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.056，P>0.05)，各組炎癥因子IL-1β的水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.526,P>0.05)(圖4E)。

圖4 三氧治療性干預(yù)海馬、額葉、杏仁核區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量

3 討論

抑郁癥又稱抑郁障礙，是常見的精神疾病之一，主要表現(xiàn)為情緒低落，興趣減低，悲觀，思維遲緩，缺乏主動(dòng)性，自責(zé)自罪，飲食、睡眠差，擔(dān)心自己患有各種疾病，感到全身多處不適，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺傾向和行為。目前治療抑郁癥的主要方法是抗抑郁藥，但常見的抗抑郁藥作用機(jī)制單一，且有頭暈、口干，心率加快等副作用，而產(chǎn)生耐藥反應(yīng)及自殺傾向嚴(yán)重者則需采用電休克治療，電休克可有效治療重度抑郁癥，但存在一定的局限性[12]。本研究探索三氧對(duì)抑郁癥的預(yù)防及治療作用。

抑郁癥確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，大腦中小膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的神經(jīng)炎癥扮有重要角色。小膠質(zhì)細(xì)胞是腦內(nèi)常駐免疫細(xì)胞，是機(jī)體抵御損傷和感染的第一道也是最主要的防線。在正常生理情況下，它主要起到免疫監(jiān)視、免疫防御和組織修復(fù)作用[13]，適度激活小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元有保護(hù)作用，但過度激活則釋放大量炎性介質(zhì)和神經(jīng)毒性物質(zhì)。有研究證實(shí)，源自小膠質(zhì)細(xì)胞的促炎因子如IL-1β、TNF-α等會(huì)調(diào)制下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)(hypothalamus-pituitary-adrenocorticalaxis,HPA)軸的活動(dòng)，阻礙皮質(zhì)激素對(duì)HPA軸的負(fù)反饋，造成HPA軸活動(dòng)過度[4]，損傷情緒中樞神經(jīng)可塑性[5]，降低腦中單胺類遞質(zhì)如5-羥色胺等的含量[6]，從而引起抑郁癥發(fā)生與發(fā)展。

三氧有抗炎、抗感染、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)等作用。有研究證實(shí),大鼠腹腔注射三氧可減輕血液TNF-α炎癥因子表達(dá)，增強(qiáng)超氧化物歧化酶Orgotein活性,降低活性氧水平，達(dá)到抗炎，抗氧化作用[3]。三氧可減少糖尿病腎病模型大鼠腎病組織凋亡表達(dá)，降低腎臟組織中TNF-α、缺氧誘導(dǎo)因子-1α水平[14]，抑制糖尿病視網(wǎng)膜病模型大鼠血清炎性因子釋放[15]。因此我們推測(cè)三氧可能通過抑制腦小膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到防治抑郁癥的目的。迄今尚未有關(guān)三氧防治抑郁癥的報(bào)道。

本研究采用束縛應(yīng)激法成功建立抑郁癥小鼠模型，同時(shí)采用三氧干預(yù)，行為學(xué)測(cè)試發(fā)現(xiàn)，預(yù)防性三氧干預(yù)可有效減少小鼠抑郁行為，但治療性三氧干預(yù)卻未能減輕小鼠抑郁表型。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)防性三氧干預(yù)可減少小鼠腦內(nèi)海馬、額葉和杏仁核區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，降低IL-6、IL-1β與TNF-α等炎癥因子水平。然而，治療性三氧干預(yù)卻未能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活與炎癥因子表達(dá)。

本研究發(fā)現(xiàn)三氧對(duì)小鼠抑郁癥發(fā)生有一定預(yù)防作用，但無治療效果，可能與下列因素有關(guān)：①三氧可有效抑制抑郁癥早期神經(jīng)炎癥，但對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞被充分激活后形成的神經(jīng)炎癥效果較差；②三氧的濃度和量可能與抑郁癥防治效果相關(guān)。本研究中三氧濃度及劑量為單一的80 μg/mL，0.1 mL/10 g，結(jié)果顯示對(duì)小鼠抑郁發(fā)生有一定預(yù)防效果，但無治療作用。未來多種濃度和劑量進(jìn)行干預(yù)將有利于發(fā)現(xiàn)三氧對(duì)抑郁作用的治療窗口；③治療效果可能也與給藥途徑有關(guān)。例如三氧大自血療法已廣泛應(yīng)用于臨床，三氧與血液結(jié)合后可激活免疫活性細(xì)胞，使干擾素、白介素等細(xì)胞因子的釋放增加，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體免疫及抗炎能力。本研究結(jié)論僅基于三氧水腹腔注射，大自血療法抗抑郁作用有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，一定濃度和劑量三氧水腹腔注射對(duì)預(yù)防小鼠抑郁癥發(fā)生有一定作用，其機(jī)制可能與減少小鼠腦內(nèi)海馬、額葉和杏仁核區(qū)域的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，降低小鼠腦中海馬、額葉及杏仁核區(qū)域炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)水平有關(guān)。但本研究未發(fā)現(xiàn)三氧水腹腔注射對(duì)已經(jīng)形成的抑郁小鼠模型有治療效果。

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