孟亞鵬，陶宏凱，曾佑琴

根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)每年球每年死于癌癥患者高達(dá)700萬(wàn)，其死于胃癌患者占了70萬(wàn)例，我國(guó)胃癌患病率和死亡率是世界平均水平2倍多。胃癌初期無(wú)明顯癥狀，至發(fā)現(xiàn)經(jīng)常處于中晚期，現(xiàn)有的放、化療手段難以根本解決問(wèn)題。利用傳統(tǒng)的中醫(yī)藥尋找治療胃癌的新藥和手段是目前的一個(gè)熱點(diǎn)[1]。

冬蟲(chóng)夏草是一種復(fù)合物，由冬蟲(chóng)夏草菌寄生于蟲(chóng)草蝙蝠蛾的子座及幼蟲(chóng)尸體上形成，中醫(yī)認(rèn)為冬蟲(chóng)夏草味甘、性溫暖、益腰腎、止咳痛、補(bǔ)虛損、益精氣。目前的研究也顯示冬蟲(chóng)夏草具有抑制腫瘤、促調(diào)節(jié)免疫等作用。天然蟲(chóng)草生長(zhǎng)海拔較高，周期長(zhǎng)，產(chǎn)量小，因此價(jià)格昂貴。從冬蟲(chóng)夏草菌種分離培養(yǎng)的蟲(chóng)草菌，可以看做冬蟲(chóng)夏草的代替品，化學(xué)成分分析表明，蟲(chóng)草菌中的蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草多糖，其活性與天然冬蟲(chóng)夏草無(wú)明顯差別[2]。因此利用蟲(chóng)草菌絲體代替天然的冬蟲(chóng)夏草，并進(jìn)行體外抗腫瘤研究，意在明確冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體對(duì)腫瘤的作用效果和藥理機(jī)制，為冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體資源的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

人工菌絲體購(gòu)至浙江萬(wàn)豐企業(yè)集團(tuán)制藥有限公司發(fā)酵蟲(chóng)草菌粉，供試胃癌細(xì)胞為人胃癌細(xì)胞株SGC-7901，試驗(yàn)藥品、RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、雙抗、胰酶與EDTA消化液、MTT等；試驗(yàn)儀器有超凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、分光光度計(jì)、培養(yǎng)板等。

1.2 方法

1.2.1 冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物的方法 采用自動(dòng)煎藥機(jī)講購(gòu)買(mǎi)的蟲(chóng)草菌粉制成水煎液，調(diào)整水煎液的pH 到7.3～7.4，然后采用32層紗布過(guò)濾，15000 r﹒min-1離心20 min，上述操作重復(fù)一次，吸取上清，采用過(guò)濾除菌的方法收集過(guò)濾液，4℃密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物的處理 獲取的冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物設(shè)置3個(gè)質(zhì)量濃度組(10、100、1000 μg﹒mL-1)，用環(huán)磷酰胺設(shè)置陽(yáng)性，用無(wú)菌蒸餾水配置成0.5 μg﹒mL-1溶液，過(guò)濾除菌。

1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng) SGC-7901細(xì)胞培養(yǎng)采用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基添加1 5%的胎牛血清和1%雙抗。消化呈單個(gè)細(xì)胞采用0.25%的胰酶和0.02%EDTA(1∶1)，細(xì)胞消化后進(jìn)過(guò)稀釋然后進(jìn)行計(jì)數(shù)，以103、104個(gè)細(xì)胞進(jìn)行接種培養(yǎng)。

1.2.4 細(xì)胞增殖活性的檢測(cè) SGC-7901細(xì)胞增殖活性檢測(cè)采用MTT法，利用MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖的抑制率。加入冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物的細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后，棄培養(yǎng)基，加入MTT進(jìn)行顯色。利用分光光度計(jì)測(cè)定570 nm的吸光率。細(xì)胞數(shù)量以光密度值（OD）來(lái)表示，OD值越高，表示細(xì)胞增殖活性越強(qiáng)。抑制率=(對(duì)照組OD值-給藥組OD值)/對(duì)照組OD值*100%[3～4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞生對(duì)長(zhǎng)的影響

表1 冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用

從表1可以看出，冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞的抑制效果較好，冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物10、100、1000 μg﹒mL-1三個(gè)劑量組和環(huán)磷酰胺組處理的OD值均明顯低于對(duì)照組，冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞的抑制率和冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物的量有關(guān)，加入冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物量越大抑制的效果隨之加強(qiáng)，此結(jié)果顯示冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞的毒性呈劑量依賴關(guān)系。且冬蟲(chóng)夏草人工菌絲水提物1000 μg﹒mL-1和環(huán)磷酰胺組對(duì)SGC-7901細(xì)胞抑制率均達(dá)到75%以上，效果較好。

3 結(jié)論與討論

冬蟲(chóng)夏朝中的有效成分主要是多種蛋白質(zhì)，抗真菌抗生素和真菌多糖，研究表明這些物質(zhì)對(duì)腹水瘤有明確的抑制作用。冬蟲(chóng)夏草中的真菌多糖、蟲(chóng)草酸對(duì)人體免疫系統(tǒng)有促進(jìn)作用，可以提高骨髓細(xì)胞的造血功能，促進(jìn)紅細(xì)胞的產(chǎn)生，對(duì)抗白血病和粒細(xì)胞的減少，也能抑制癌細(xì)胞的分裂，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力[5～6]。對(duì)青海產(chǎn)天然冬蟲(chóng)夏草（特級(jí)）、四川產(chǎn)天然冬蟲(chóng)夏草 (二級(jí))、蟲(chóng)草頭孢菌絲粉和蟲(chóng)草菌絲浸膏進(jìn)行了的成分分析表明，四個(gè)樣品中氨基酸的種類都是17種，其中谷氨酸含量最高，胱氨酸含量最低，四種樣品人體必需氨基酸含量一樣豐富，總氨基酸含量稍有差異外，氨基酸屬性基本一致，說(shuō)明冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體與冬蟲(chóng)夏草的成分基本一致，研究冬蟲(chóng)夏草菌絲體可以解決冬蟲(chóng)夏草數(shù)量少、價(jià)格昂貴的的問(wèn)題。

本研究用冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞進(jìn)行了體外試驗(yàn)，采用了MTT法檢測(cè)了藥物作用對(duì)SGC-7901細(xì)胞的增殖抑制效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體水提物對(duì)SGC-7901細(xì)胞抑制效果較好，尤其在冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體水提物在高劑量1000 μg﹒mL-1時(shí)，抑制的效率可以到到76.48%。由此推論，冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體水提物抑制癌細(xì)胞的可能機(jī)制是通過(guò)提高機(jī)體免疫能力而間接影響癌細(xì)胞，而不是直接作用于癌細(xì)胞將其殺死，只是抑制了細(xì)胞的增殖[7]，后期的實(shí)驗(yàn)需要在瘤株動(dòng)物中進(jìn)行后續(xù)的研究，為冬蟲(chóng)夏草人工菌絲體的開(kāi)發(fā)和利用提供依據(jù)。