常靜

(周口市兒童醫(yī)院（周口市婦幼保健院）婦產(chǎn)科，河南 周口 466000)

宮頸癌是在我國(guó)女性中常見的惡性腫瘤之一，其在臨床上的高發(fā)病率以及高死亡率嚴(yán)重影響我國(guó)女性的生活質(zhì)量、生育甚至威脅生命安全[1-3]。近年來臨床上對(duì)宮頸癌的治療取得了不小的進(jìn)步，但由于其發(fā)生到形成是一個(gè)多源性、多個(gè)步驟及多階段的過程，并且其發(fā)病原因并不十分清楚，常規(guī)治療難以達(dá)到理想的治療效果，因此對(duì)宮頸癌的患者來說，發(fā)現(xiàn)新的分子靶點(diǎn)，并對(duì)其采取針對(duì)性治療成為臨床的熱點(diǎn)[4-6]。特異性肽酶22（USP22）是泛素特異性水解酶之一，其在多種惡性腫瘤中都有表達(dá)，近年來有研究表明USP22在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)過程中起到關(guān)鍵作用，其可以調(diào)控基因的復(fù)制和表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞周期，USP22缺乏的癌細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢和停滯的現(xiàn)象[7-9]。因此本文通過研究USP22的表達(dá)水平對(duì)宮頸癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響，來探討其與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取我院因?qū)m頸癌行手術(shù)治療的術(shù)后標(biāo)本100例（收集時(shí)間：2012年1月～2013年12月），因?qū)m頸上皮瘤變（CIN）行手術(shù)治療的術(shù)后標(biāo)本60例。

宮頸癌組織， 年齡 41～66 歲， 平均 52．4±9．5歲，臨床分期：Ⅰ期42例、Ⅱ期58例，病理學(xué)分級(jí)：G1級(jí)24例、G2級(jí)40例、G3級(jí)32例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例。CIN組織，年齡37～65歲，平均50．4±10．8 歲，其中 CINⅡ級(jí) 29 例、CINⅢ級(jí) 31 例：兩組患者的年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0．05）。

1．2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1．2．1 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考人民衛(wèi)生出版社《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵所有患者均在本院接受手術(shù)治療，標(biāo)本來源于手術(shù)后；⑶CIN組織標(biāo)本來源于因CINⅡ級(jí)～Ⅲ級(jí)手術(shù)后標(biāo)本；⑷宮頸癌患者臨床分期：Ⅰ期～Ⅱ期；⑸所有患者手術(shù)前均未接受放化療。

1．2．2 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴轉(zhuǎn)移性宮頸癌；⑵合并其他部位惡性腫瘤疾病疾病；⑶未經(jīng)病理學(xué)證實(shí)；⑷既往具有放化療病史。

1．3 免疫組化染色方法 二甲苯脫蠟后，采用梯度乙醇水化各5min，再用PBS沖洗，抗原修復(fù)后再次用PBS沖洗液沖洗切片，先滴加1：150稀釋的一抗 （兔抗人USP22單克隆抗體），4℃保持10-12h；以PBS沖洗后再滴加二抗，37℃保持半小時(shí)，PBS清洗后DAB顯色，蘇木精復(fù)染后梯度乙醇脫水，二甲苯透明，并用中性樹膠封片。

1．4 免疫組化結(jié)果判斷 免疫組化結(jié)果判定：USP22蛋白陽性著色表達(dá)于細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≧3分為陽性?？偡郑? 分：“-”表達(dá)；為 3～5 分，“+”表達(dá)；為6～9 分，“++”表達(dá)；＞9 分，“+++”表達(dá)。

1．5 術(shù)后隨訪 本研究納入的100例宮頸癌患者，術(shù)后均進(jìn)行了隨訪觀察，主要觀察患者的生存率、生存時(shí)間，隨訪方式主要通過電話、患者到門診接受相關(guān)診查，每一次隨訪做好記錄，術(shù)后第1年每一個(gè)病例隨訪1次，術(shù)后第2年和第3年每3個(gè)月進(jìn)行一次隨訪。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16．0，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；生存分析采用kaplan-meier法，生存時(shí)間分析采用log-rank秩和檢驗(yàn)；P值＜0．05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組標(biāo)本中USP22蛋白陽性表達(dá)率比較 宮頸癌組中的USP22蛋白陽性表達(dá)率58．00%、CIN組中的USP蛋白陽性表達(dá)率31．67%，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）；（表 1，圖 1）。

表1 兩組標(biāo)本中USP22蛋白陽性表達(dá)率比較

圖1 A為USP22蛋白在宮頸癌組織中陽性表達(dá)，B為USP22蛋白在CIN組織中呈陰性表達(dá)，（100倍）

2．2 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 組織學(xué)分級(jí)G3級(jí)、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶直徑＞5cm宮頸癌組織中的USP22蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于宮頸癌組織學(xué)分級(jí)G1+G2級(jí)、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶直徑≤5cm的患者，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）；（表 2）。

表2 USP22蛋白陽性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

2．3 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達(dá)率與患者預(yù)后的關(guān)系 USP22蛋白陽性表達(dá)患者的3年無病生存率58．62%、3年總生存率60．34%均顯著的低于 USP22蛋白陰性患者的 78．57%、85．71%，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）；（表 3）。USP22蛋白陽性表達(dá)患者的生存時(shí)間顯著的低于USP22 蛋 白 陰 性 表 達(dá) 患 者 （Z=4．465，P=0．035＜0．05）；圖 2。

表3 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達(dá)率與患者預(yù)后的關(guān)系[n（%）]

3 討論

圖2 兩組患者的生存時(shí)間函數(shù)圖

在全球范圍內(nèi)，宮頸癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)病率中高居首位，尤其我國(guó)為該類腫瘤疾病的高發(fā)地區(qū)，據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)每年發(fā)病患者占全球總數(shù)的1/3-1/4，且隨著人們生活方式和觀念的轉(zhuǎn)變，目前宮頸癌的發(fā)病有明顯年輕化的趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了我國(guó)女性的正常生活、生育以及生命。為了盡可能的降低該疾病對(duì)女性的傷害，目前臨床上多采用更先進(jìn)的篩查手段，并逐步提高女性的普查意識(shí)，做到該類疾病的早發(fā)現(xiàn)早治療，以提高臨床上的治愈率。宮頸癌發(fā)病的重要原因是乳頭瘤病毒（HPV）感染導(dǎo)致的宮頸正常細(xì)胞癌變，臨床上是對(duì)確診宮頸癌的患者可采用手術(shù)、放療、化療、藥物及基因等個(gè)性化的綜合治療[10]，但目前對(duì)于宮頸癌的發(fā)病原因仍不十分清楚，其發(fā)病是一個(gè)多源性、多個(gè)步驟及多階段的過程，其與諸多因素有關(guān)，例如早婚、早育、多個(gè)性伴侶、吸煙、免疫力低下等，因此對(duì)宮頸癌發(fā)病機(jī)制更深入全面的研究，有助于對(duì)于該病的診斷及治療[11]。雖然近年來手術(shù)治療宮頸癌的效果逐漸提高，但是由于癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，嚴(yán)重影響了相關(guān)治療的療效，因此在分子水平上尋找治療腫瘤的靶向治療逐漸在臨床上獲得認(rèn)可，而宮頸癌治療常關(guān)注的分子靶點(diǎn)是VEGF，其可以控制腫瘤組織的血管的生成，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)，在臨床上取得了一定療效，因此這也提示我們可以尋找新的抑制腫瘤生長(zhǎng)的分子靶點(diǎn)[12，13]。DUBs是一類蛋白酶超家族，可以作用于特異性蛋白質(zhì)-泛素，切斷泛素鏈，從而避免底物降解，其中USP22是DUBs中最多一類，作為一個(gè)人類轉(zhuǎn)錄輔助因子復(fù)合物（hSAGA）的亞單位，可以降解對(duì)組蛋白H2A、H2B的尾端特異的泛素化分子，并通過這種方式改變核酸的復(fù)制和表達(dá)，進(jìn)而影響癌細(xì)胞的增殖，從而控制腫瘤的生長(zhǎng)，并有希望成為抑制腫瘤的關(guān)鍵靶點(diǎn)[14，15]，目前已經(jīng)在多種惡性腫瘤發(fā)現(xiàn)其存在，但在宮頸癌卻報(bào)道較少，因此本文通過研究UPS22與宮頸癌的關(guān)系，來為臨床上的治療提供新的選擇。

3．1 兩組標(biāo)本中USP22蛋白陽性表達(dá)率比較 本文考察了USP22在宮頸癌和CIN中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)宮頸癌組中的USP22蛋白陽性表達(dá)率高于CIN組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明USP22在宮頸癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)過程中扮演著重要角色，其與癌細(xì)胞的增殖關(guān)系密切，因此可以以USP22為分子靶點(diǎn)，采用治療藥物干擾其正常的表達(dá)，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞的增殖，提高患者的治療效果。

3．2 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達(dá)率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 腫瘤病情的發(fā)展進(jìn)程可由組織學(xué)分級(jí)、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤病灶直徑等指標(biāo)來表達(dá)，因此可以通過研究USP22與以上指標(biāo)的關(guān)系，來表達(dá)其與腫瘤病情發(fā)展的關(guān)系。本文發(fā)現(xiàn)組織學(xué)分級(jí)G3級(jí)、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶直徑＞5cm宮頸癌組織中的USP22蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于宮頸癌組織學(xué)分級(jí)G1+G2級(jí)、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶≤5的患者，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明USP22與腫瘤病情發(fā)展關(guān)系密切，推測(cè)其與宮頸癌的分化程度有關(guān)，并且參與宮頸癌的淋巴轉(zhuǎn)移過程，還可能參與了腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)。

3．3 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達(dá)率與患者預(yù)后的關(guān)系 由于以USP22為分子靶點(diǎn)的治療藥物，具有更高的靶向性，可以在更大程度上抑制癌細(xì)胞的擴(kuò)散，從而達(dá)到改善預(yù)后的目的，因此本文以USP22蛋白陽性表達(dá)患者治療后的生存率為考察指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)USP22蛋白陽性表達(dá)患者的3年無病生存率和3年總生存率均顯著的低于USP22蛋白陰性患者的；USP22蛋白陽性表達(dá)患者的生存時(shí)間顯著的低于USP22蛋白陰性表達(dá)患者，結(jié)果均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明USP22不僅參與了宮頸癌變的發(fā)生發(fā)展過程，并且還參與了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散，以USP22為分子靶點(diǎn)的治療明顯可以改善患者預(yù)后，提高患者生存率，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。

綜上所述，本文通過研究USP22蛋白陽性表達(dá)與宮頸癌的關(guān)系，闡明了USP22參與了宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及擴(kuò)散，并以其為分子靶點(diǎn)的治療明顯提高生存率和改善患者預(yù)后，有望成為新的宮頸癌的治療靶點(diǎn)。

[1]孔琳，雷張濤，周亮．宮頸癌化療進(jìn)展[J]．中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志，2015，38(7)：541-543．

[2]幸瓊，幸情．HR-HPV與TCT篩查宮頸癌及其癌前病變的臨床價(jià)值[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，34(6)：761-763．

[3]Mckee SJ，Bergot A，Leggatt GR．Recent progress in vaccination against human papillomavirus-mediated cervical cancer[J]．Reviews in Medical Virology，2015，25(S1)：54-71．

[4]張燕茹，王月云．宮頸癌防治研究進(jìn)展[J]．中國(guó)腫瘤，2015，24(12)：998-1002．

[5]黃璇，張?jiān)?，HUANGXuan，等．宮頸癌預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J]．腫瘤防治研究，2016，43(9)：806-810．

[6]Kahng J，Kim EH，Kim HG，et al．Development of a cervical cancer progress prediction tool for human papillomavirus-positive Koreans：A support vector machine-based approach[J]．Journal of International Medical Research，2015，43(4)：217-230．

[7]鄭鳳霞，聶麗菊，孫平風(fēng)，等．宮頸癌中表皮生長(zhǎng)因子受體基因狀態(tài)的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)婦幼保健，2015，30(15)：2465-2467．

[8]王技軍，賀巖．USP22在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J]．實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2016，30(6)：551-554．

[9]Jones J，Dean JL，Schrecengost RS，et al．Abstract 1862：Discerning the role of USP22 in prostate cancer development and progression[J]．Cancer Research，2015，75(15)：1862-1862．

[10]古杰超，馮秀蘭，黃偉剛．鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCCA)與細(xì)胞角蛋白19(CK19)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早期宮頸癌及癌前病變?cè)\斷的臨床價(jià)值[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，34(5)：618-620．

[11]李霓，鄭榮壽，張思維，等．2003～2007年中國(guó)宮頸癌發(fā)病與死亡分析[J]．中國(guó)腫瘤，2012，21(11)：801-804．

[12]宋春麗．宮頸癌組織中KISS-1、VEGF的表達(dá)及意義[J]．中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2015，15(10)：1221-1223．

[13]王廣嬌，楊欣，郝敏．血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展[J]．國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2016，43(5)：519-523．

[14]Hu J，Yang D，Zhang H，et al．USP22 promotes tumor progression and induces epithelial-mesenchymal transition in lung adenocarcinoma[J]．Lung Cancer，2015，88(3)：239-245．

[15]敖寧，劉玉琴，AONing，等．USP22在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用研究進(jìn)展[J]．基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，32(10)：1235-1238．