胡玉英，梁佳駒，劉豐豪，李明杰*，尚榮國

(1. 三二〇一醫(yī)院，陜西 漢中 723000；2.西安交通大學(xué)，陜西 西安 710061)

神經(jīng)痛口服液為我院臨床使用的治療神經(jīng)性疼痛的院內(nèi)制劑，由白芍、柴胡、當(dāng)歸、川芎、蔓荊子、全蝎等中藥組成。具有活血化瘀、祛風(fēng)通絡(luò)、鎮(zhèn)痛止痛之功效，用于三叉神經(jīng)痛、偏頭痛、舌咽神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛等癥狀，療效顯著，未見明顯不良反應(yīng)事件。本制劑原采用傳統(tǒng)水提醇沉法制備，產(chǎn)品儲(chǔ)存過程中易產(chǎn)生沉淀，澄明度難以保證。因此為了解決產(chǎn)品穩(wěn)定性，筆者采用單因素試驗(yàn)法，以處方中君藥白芍的活性成分芍藥苷的含量和除雜率為評價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選CTSA+B天然澄清劑用于神經(jīng)痛口服液澄清工藝。CTSA+B天然澄清劑是一種新型的食品添加劑，由A、B兩組分組成，系高分子藥用化合物，在保留藥液中的高分子物質(zhì)、多糖及可溶性固體物方面優(yōu)于傳統(tǒng)的水提醇沉法，具有有效、簡便、成本低以及制劑穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC2010高效液相色譜儀、島津LCSolutions工作站(日本島津)；色譜柱：島津WdndaSil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；BT25S型十萬分之一分析天平(賽多利斯(中國)有限責(zé)任公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)110736-201337)；白芍、柴胡、當(dāng)歸、川芎、蔓荊子、全蝎等飲片(陜西龍力藥業(yè)有限公司)，經(jīng)鑒定符合2015版《中國藥典》藥品標(biāo)準(zhǔn)；神經(jīng)痛口服液(批號(hào)20161214，20161218，20161225,本院自制)；甲醇、乙腈為色譜純(Fisher Scientific)；磷酸、正丁醇、硫酸、氯仿、乙酸乙酯、甲酸等均為分析純；水為純化水；CTSA+B天然澄清劑(南通綠神生物工程有限公司，批號(hào)20161016)。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸(14∶86)為流動(dòng)相；流速為1.0 min/mL；柱溫30℃；檢測波長為230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.1.2 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷容器中減壓干燥12 h以上的芍藥苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含0.2 mg的溶液作為對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

精密量取本品5 mL，置分液漏斗中，加水5 mL，用乙醚30 mL振搖洗滌，棄去洗滌液，再用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20 mL，收集提取液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，?0 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.2 除雜率的測定

分別精密量取絮凝前后提取液10 mL，分別置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，取出置于干燥器中至室溫，精密稱定，計(jì)算除雜率。

除雜率(%)=(絮凝前干膏重-絮凝后干膏重)/絮凝前干膏重×100%

2.3 藥液的制備

按處方比例稱取藥材，加8倍量的水，加熱回流提取至提取液變無色停止，濾過，濃縮至1.0 g/mL的濃縮液，備用。

2.4 CTSA+B天然澄清劑的配制

根據(jù)產(chǎn)品說明書，A組分用純化水配制成1%的溶液，B組分用純化水配制成1%的混懸液，靜置24 h，備用。

2.5 水提液澄清工藝單因素考察

2.5.1 CTSA+B天然澄清劑加入順序考察[1]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液，加純化水稀釋至1∶5 (生藥g∶藥液mL)，2份，每份100 mL，在75～85℃保溫下[2]，澄清劑A、B組分用量設(shè)定都為1%(mL)，邊加邊以120 r/min的速度勻速攪拌5 min[2]，樣品液1先加B組分，保溫60 min后，再加A組分；樣品液2先加A組分，保溫60 min后，再加B組分。觀察兩種加入順序的澄清效果。CTSA+B天然澄清劑加入順序?qū)Τ吻逍Ч挠绊懸姳?。

表1 CTSA+B天然澄清劑加入順序?qū)Τ吻逍Ч挠绊?/p>

由表1可知，CTSA+B天然澄清劑A、B組分的加入次序應(yīng)為先加B組分后加A組分，B組分為主澄清劑。

2.5.2 澄清劑用量[3]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液，加純化水稀釋至1∶5(生藥g∶藥液mL)，4份，每份100 mL，保溫75～85℃，120 r/min的條件下攪拌，加入不同量B組分混懸液，攪拌5 min，靜置保溫60 min，再次在上述條件下，加相對應(yīng)的A組分，A組分為B組分的50%[2]，攪拌5 min，保溫靜置，觀察沉降情況，沉淀不再增加時(shí)，濾過，測定含量及除雜率見表2。結(jié)果表明，CTSA+B澄清劑加入量以生藥計(jì)算B組分用量1%(g/g)，澄清效果最好。

表2 CTSA+B天然澄清劑用量對澄清效果的影響

2.5.3 A、B組分比例的考察[4]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液，加純化水稀釋至1∶5(生藥g∶藥液mL)，4份，每份100 mL，保溫75～85℃，120 r/min的條件下攪拌，按照表2加入1%的B組分混懸液，攪拌5 min，靜置保溫60 min，再分別加入相當(dāng)于B組分的1/4、1/3、1/2、1倍量的A組分，攪拌5 min，保溫靜置，觀察沉降情況，沉淀不再增加時(shí)，濾過，測定含量及除雜率見表3。結(jié)果表明，B∶A=2∶1時(shí)，澄清效果最好，即以生藥計(jì)B組分用量為1%，A組分為0.5%。

表3 A、B組分比例對澄清效果的影響

2.5.4 藥液濃度的考察[1]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液4份，每份10 mL，加純化水分別配制成1∶3 、1∶5、1∶7、1∶9(生藥g∶藥液mL)的稀釋液，于75～85℃保溫下，120 r/min的條件下攪拌，按照表3下結(jié)果的CTSA+B天然澄清劑的用量加入，保溫靜置，觀察沉降情況，沉淀不再增加時(shí)，濾過，測定結(jié)果見表4。結(jié)果表明，藥液濃度為1∶7(生藥g∶藥液mL)以上時(shí)，澄清效果最好，根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)，提取液濃度過低，不利于后續(xù)濃縮處理，因此，選取藥液濃度1∶7為最佳。

表4 藥液濃度對澄清效果的影響

2.5.5 保溫溫度[5]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液，加純化水稀釋至1∶7(生藥g∶藥液mL)，4份，每份100 mL，于60℃、70℃、80℃、90℃，120 r/min的條件下攪拌，分別加入1%的B組分和0.5%的A組分，測定結(jié)果見表5。結(jié)果表明，當(dāng)溫度于80℃～90℃時(shí)絮凝效果最好。

表5 保溫溫度對澄清效果的影響

2.5.6 攪拌速度[6]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液，加純化水稀釋至1∶7(生藥g∶藥液mL)，4份，每份100 mL，于80～90℃，在攪拌速度80 r/min、120 r/min、150 r/min、200 r/min的條件下，分別加入1%的B組分和0.5%的A組分，測定結(jié)果見表6。結(jié)果表明，攪拌速度120 r/min的條件下，澄清效果最好。

表6 攪拌速度對澄清效果的影響

2.5.7 保溫時(shí)間[7]

取2.3項(xiàng)下制備的濃縮提取液，加純化水稀釋至1∶7(生藥g∶藥液mL)，4份，每份100 mL，于80～90℃保溫，保溫時(shí)間分別為2 h、4 h、6 h、8 h的條件下，120 r/min的條件下攪拌，分別加入1%的B組分和0.5%的A組分，測定結(jié)果見表7。結(jié)果表明，保溫時(shí)間大于4 h時(shí)澄清效果最好。

表7 保溫時(shí)間對澄清效果的影響

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

2.6.1 澄清工藝

根據(jù)以上的考察結(jié)果，CTSA+B天然澄清劑最佳澄清工藝為：提取液濃度1∶7；澄清劑用量以生藥計(jì)：B組分1%(g/g)、A組分0.5%(g/g)；在80℃～90℃保溫；攪拌速度120 r/min；先加B組分，攪拌5 min，靜置保溫60 min 后再加A組分，攪拌5 min。保溫4 h以上。濾過，濃縮至適量，過濾，灌封。

2.6.2 澄清劑工藝與醇沉工藝比較[8]

取“2.3”項(xiàng)下的提取液，分A、B兩組,每組3份,按照澄清劑澄清工藝和醇沉(70%乙醇，冷藏沉淀24 h，濾過，回收乙醇，濃縮至適量，過濾，灌封)工藝，測定結(jié)果見表8。結(jié)果顯示，芍藥苷平均含量為0.261 mg/mL，RSD=1.347 5%(n=3)。除雜率為37.0%，RSD=0.270%(n=3)，3個(gè)月后醇沉法瓶內(nèi)有絮狀沉淀物。結(jié)果表明CTSA+B天然澄清劑澄清工藝穩(wěn)定可行。

表8 兩種澄清工藝對比試驗(yàn)結(jié)果

2.6.3 生產(chǎn)工藝驗(yàn)證

按照此工藝生產(chǎn)三批樣品，驗(yàn)證澄清工藝結(jié)果見表9。結(jié)果表明，三批制劑質(zhì)量經(jīng)檢驗(yàn)全部符合要求，此澄清工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控。

表9 澄清工藝驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

中藥口服液，多為復(fù)方制劑，具有品種多樣性和成分復(fù)雜性的特點(diǎn)，因此利用天然澄清劑進(jìn)行澄清，需要仔細(xì)考察選擇澄清條件；在本實(shí)驗(yàn)中，選用CTSA+B天然澄清劑，考察神經(jīng)痛口服液的最佳澄清工藝。CTSA+B天然澄清劑是一種新型食用果汁澄清劑，具有安全、無毒、不殘留、不引入異味等優(yōu)點(diǎn)，是人工合成絮凝劑的理想代替品。其A、B兩組分全用純化水做溶媒，不引入酸，不改變提取液的pH值，同時(shí)澄清速度快，保留成分更多，在降低成本、縮短工期及增強(qiáng)制劑的穩(wěn)定性方面均優(yōu)于水提醇沉法。

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