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        一種帶磁力攪拌的免疫散射比濁儀的設(shè)計

        2018-03-03 05:51:39楊延麗
        天津科技 2018年2期
        關(guān)鍵詞:濁法比色嵌入式

        楊延麗,潘 峰

        (1. 廈門安防科技職業(yè)學(xué)院 福建廈門361026;2. 桂林長海發(fā)展有限責(zé)任公司 廣西桂林541001)

        0 引 言

        C反應(yīng)蛋白(CRP)是一種急性時相反應(yīng)蛋白,在急性和慢性感染、創(chuàng)傷、腫瘤、心肌梗塞時其血濃度急劇升高,檢測 CRP對臨床診斷有重要的參考價值[1]。目前我國臨床試驗測定 CRP特定蛋白的方法主要有兩種,透射比濁法和散射比濁法。在大型全自動生化分析儀器中常用的是透射比濁法,但是生化儀受其方法學(xué)的制約只能檢測到分子量大的蛋白,如免疫球蛋白和白蛋白。而臨床上需要了解的恰恰是分子量精確到 ng/mL或 pg/mL級別的蛋白含量。對于門診臨床快速診斷的要求而言,研制便攜式、小體積、快速檢測的特定蛋白免疫檢測儀器是非常必要的。這種專門的特定蛋白儀采用免疫散射比濁法,它可以將靈敏度提高到 ng/mL級別,從而增加了很多具有獨特臨床價值的蛋白檢測項目。

        此外,為了適應(yīng)門診臨床診斷的簡便、快速檢測需求,最新的CPR試劑通常采用全血進(jìn)行測試,省去了血清分離的處理過程,這對分析儀提出了更高的要求。為了適應(yīng)這種需求,本設(shè)計研制的特定蛋白分析儀器采用免疫比濁檢測方法,利用自動化的攪拌功能,將病人全血與試劑充分混合,使免疫反應(yīng)中抗體抗原的結(jié)合更加充分。本儀器是一種將液相內(nèi)的沉淀反應(yīng)、現(xiàn)代光學(xué)檢測技術(shù)和自動分析技術(shù)相結(jié)合的特定蛋白分析儀器,不僅可以檢驗 CRP,也可以測量免疫球蛋白、糖化血紅蛋白等。

        1 總體設(shè)計方案

        根據(jù)免疫散射比濁檢測法原理,結(jié)合特定蛋白檢測試劑,針對全血檢驗的需求,本儀器總體框圖如圖 1所示。儀器由嵌入式處理器、光學(xué)裝置、硅光電二極管、放大電路、A/D轉(zhuǎn)換電路、恒溫裝置、比色杯檢測傳感器、試劑IC卡讀卡器、微型打印機(jī)、USB接口、帶觸摸屏的顯示模塊、電源等模塊組成。

        圖1 儀器總體框圖Fig.1 Block diagram of the instrument

        根據(jù)本儀器所使用的試劑特性,其主要的散射光是前向散射,故本儀器采集前向角為15~25 °的前向散射光,采用兩級透鏡將搜集到的散射光聚焦,最后將光線投射到硅光電二極管上。光路設(shè)計如圖 2所示。

        圖2 光路設(shè)計示意圖Fig.2 Schematic of optical path design

        2 比濁儀硬件設(shè)計

        為了使儀器獲得較高的靈敏度和效率,光源與光電轉(zhuǎn)換器件的響應(yīng)頻譜范圍做良好的匹配是很重要的。根據(jù)試劑顆粒的尺寸,本儀器選用 LD紅光點狀激光器作為光源,激光器輸出波長為 650,nm,最小光斑直徑為φ0.3,mm,輸出功率為 200,mW,光束發(fā)散度小,具備一致性好、穩(wěn)定可靠性高的優(yōu)點。光電轉(zhuǎn)換傳感器采用日本濱松的硅光電二極管 BPW69A,感光面積 5.8,mm×5.8,mm,峰值波長 660,nm,光譜響應(yīng)范圍 190~1,050,nm,較低的暗電流(小于200,pA),較高的響應(yīng)速度,較高的穩(wěn)定性。

        在比色杯孔底座下,各設(shè)計一套恒溫裝置,包括PTC加熱片,DS18B20數(shù)字溫度傳感器,儀器開機(jī)后嵌入式處理器控制電路開啟加熱片加熱,由DS18B20實時檢測溫度,使溫度保持在接近人體溫度的 35~37,℃范圍內(nèi),用于給比色杯內(nèi)的反應(yīng)液加溫。

        在儀器的兩個比色杯位置下面,各設(shè)計了一套直流電機(jī)+磁鐵裝置,當(dāng)傳感器檢測到有比色杯插入測試孔時,自動啟動磁力控制電機(jī),儀器嵌入式處理器控制電磁鐵轉(zhuǎn)動,帶動比色杯內(nèi)的攪拌子快速攪拌反應(yīng)液,促進(jìn)全血中特定蛋白與試劑的免疫反應(yīng)。

        高靈敏度的硅光電二極管將接收到的散射光轉(zhuǎn)換成電流信號,再由OPA121運放對電流信號進(jìn)行放大,放大后的信號送入A/D轉(zhuǎn)換芯片ADS1253轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號后,由嵌入式處理器接收并存儲。

        嵌入式處理器選用成熟的 ARM32芯片STM32F407,用于儀器的多任務(wù)處理:檢測比色杯插入取出狀態(tài)、控制恒溫裝置、控制磁力攪拌裝置、控制LED光源、讀取A/D轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)、與試劑管理IC卡通信、接收觸摸屏信息、控制顯示屏模組、與 PC通信、將相關(guān)信息和結(jié)果保存打印等。

        3 比濁儀軟件設(shè)計

        儀器的軟件設(shè)計包括嵌入式處理器內(nèi)的軟件和上位機(jī) PC軟件。嵌入式處理器軟件實現(xiàn)整機(jī)管理,采用 freeRTOS嵌入式操作系統(tǒng)管理所有任務(wù),相對于單片機(jī)系統(tǒng)而言,該軟件系統(tǒng)效率高,能夠有序處理彩色液晶屏幕刷新、觸摸屏輸入、恒溫控制、磁力攪拌、試劑 IC卡管理、與 PC通訊、打印輸出等任務(wù)。上位機(jī) PC的軟件主要完成曲線擬合、與醫(yī)院管理系統(tǒng)聯(lián)機(jī)、臨床檢驗相關(guān)數(shù)據(jù)管理等功能。其中比較重要的部分是利用測試得到的吸光值,去計算被測反應(yīng)液中待測物含量的功能。

        在免疫比濁法的抗原和抗體結(jié)合的過程中,吸光度與濃度之間不呈線性關(guān)系,通常情況是三次方程曲線關(guān)系。免疫比濁法在實際操作中,根據(jù)所用的終點法或速率法,用五點或七點不同濃度進(jìn)行定標(biāo),經(jīng)過三次曲線方程擬合求出一條能真實反映實際濃度與吸光度關(guān)系的曲線方程,作為定量的工作曲線。如果采用以往單一標(biāo)準(zhǔn)濃度單點定標(biāo)方法,以及采用兩點定標(biāo)方法,誤差較大,尤其是高值濃度范圍內(nèi),測定結(jié)果與實際偏差太大。所以簡單地采用線性擬合的方式處理免疫比濁數(shù)據(jù),只能適用于濃度很低的情況。如果采用五點定標(biāo)的方式,使用 logit-log函數(shù)擬合曲線[2],擬合曲線的精度用相關(guān)系數(shù)(或稱決定系數(shù))R2的大小來判定[3],只要相關(guān)指數(shù) R2的值控制在0.99以上,則可以得到精確的擬合度、較高的準(zhǔn)確性和較小的誤差。

        為了去除干擾信號以及本底的影響,本儀器測試前先用空比色杯測試一次光值,然后以實際測試比色杯反應(yīng)液的光值減去空杯光值的方法扣除本底。在測試比色杯反應(yīng)液光值時,每隔 10,s測試一次數(shù)值,一共測試12次,然后將12次數(shù)據(jù)求平均值,提高測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。因為被測物含量與反應(yīng)液中抗體抗原結(jié)合物濃度有關(guān),結(jié)合物的濃度與硅光電二極管所測得的散射光強(qiáng)度有關(guān),本儀器將硅光電二極管測得電流轉(zhuǎn)換成電壓,經(jīng)過高性能運動放大轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號后,儀器將該信號傳送到PC機(jī),PC機(jī)根據(jù)五點定標(biāo) logit-log函數(shù)計算出參數(shù),用確定參數(shù)的logistic4P方程計算待測物的濃度。PC機(jī)將待測物濃度數(shù)據(jù)回傳給儀器的嵌入式處理器,再結(jié)合所用試劑類型、試劑批號、測試時間等信息,生成免疫比濁檢驗報告,通過微型熱敏打印機(jī)打印出來作為診斷依據(jù)。

        為了檢驗本儀器測試特定蛋白指標(biāo)的準(zhǔn)確性,將一組 10個已知濃度的測試液(3.01,μg/mL、3.23,μg/mL、6.57,μg/mL、8.73,μg/mL、16.79,μg/mL、18.39,μg/mL、 46.83,μg/mL、 57.09,μg/mL、130.76,μg/mL、141.18,μg/mL)分別使用本儀器和全自動生化儀測試。測試結(jié)果表明,本儀器測試光值再通過擬合曲線計算出的濃度數(shù)據(jù),誤差都在該測試液允許的范圍內(nèi),但是總體誤差比全自動生化儀大,特別是低端的 3個濃度的測試液,用本儀器無法區(qū)分。但是從醫(yī)院門診做初步判斷需要快速出結(jié)果的要求角度而言,本儀器能夠在10,min內(nèi)給出檢驗結(jié)果,相比生化儀需要隔天甚至幾天出結(jié)果,檢驗速度上明顯優(yōu)于生化儀。

        4 結(jié) 論

        設(shè)計本儀器的主要目的是為了滿足快速檢驗的需求,在采樣現(xiàn)場即刻進(jìn)行分析,省去標(biāo)本在實驗室檢驗時的復(fù)雜處理程序,快速得到檢驗結(jié)果。本儀器主要適用于新型的使用全血進(jìn)行 C反應(yīng)蛋白的免疫檢驗要求,設(shè)計了磁力攪拌、帶觸摸屏的液晶屏、微型打印機(jī)等適應(yīng)快速出結(jié)果的檢驗要求的功能模塊。為了達(dá)到檢驗性能指標(biāo)的要求,采用了與上位機(jī)PC聯(lián)機(jī)進(jìn)行精確的曲線擬合計算,從而達(dá)到在測量范圍內(nèi) 10個濃度測試液誤差都在允許范圍內(nèi)的指標(biāo),滿足了快速檢驗的需求?!?/p>

        [1]王慧,羅煒,陳濤. 免疫透射比濁法CPR檢測試劑盒的性能評價[J]. 中國熱帶醫(yī)學(xué),2006,6(8):1479-1480.

        [2]張弢,許培仁,雷素萍. 膠乳增強(qiáng)免疫比濁實驗中標(biāo)準(zhǔn)曲線的模式[J]. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2005(3):392.

        [3]周記薌. 實用回歸分析方法[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1990:48-50.

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