楊偉翔，李 娟

（廣東省深圳市寶安區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東深圳518101）

牛羊臨床常發(fā)的疾病有消化道疾病、呼吸道疾病以及全身感染性菌血癥等，其中細(xì)菌性感染所占比例能占到臨床病例的70%以上，對養(yǎng)殖危害巨大，故快速準(zhǔn)確地對細(xì)菌性感染進(jìn)行檢疫對臨床意義重大，下面筆者以此為話題和大家作一下探討。

1 牛羊消化道特點

牛羊為反芻動物，其消化道有別與單胃動物，牧草經(jīng)口腔首先進(jìn)入瘤胃進(jìn)行消化，而瘤胃中的消化過程非常復(fù)雜，因牧草植物纖維含量較高，纖維本身屬于多糖的一種，其本質(zhì)也是由單糖分子構(gòu)成。無論是單胃動物還是反芻動物，其消化道中的消化液都不含纖維素酶成分，不會對纖維素產(chǎn)生分解作用。對于單胃動物來講，植物類纖維主要起到清掃腸道的作用，對于反芻動物而言，雖然它們同樣不能直接分解纖維素，但由于瘤胃中含有大量的益生微生物，如細(xì)菌、真菌、纖毛蟲等，這些微生物對纖維類物質(zhì)能起到分解作用，最終形成有機(jī)酸被機(jī)體吸收，故瘤胃環(huán)境是偏酸性的，酸性環(huán)境不利于其他有害菌的生長，利于維持整個微生態(tài)的平衡。

2 致病菌的鑒定

由于消化道中有大量益生微生物干擾，故需要加以區(qū)分鑒別。常用的判斷方法有溶血法，如果分離到的細(xì)菌有溶血作用，則代表對動物有一定毒性，還有動物模型法，常用的動物為小白鼠，將分離的可疑菌通過液體培養(yǎng)基增殖后，通過腹腔注射入小鼠體內(nèi)，如果和空白組相比，試驗組小鼠明顯出現(xiàn)食欲下降、精神不振、全身組織器官炎癥壞死甚至死亡等情況，則代表分離的菌株是致病菌。但實際存在的問題是，已經(jīng)可以證明有少部分的菌株即使是非致病性也有一定的溶血作用，同時有些正常菌株在注射入腹腔后，也會引發(fā)腹膜炎，使得實驗小鼠表現(xiàn)一系列臨床癥狀，導(dǎo)致判斷結(jié)果的不確定性增加。

3 檢疫技術(shù)

為了克服上述缺陷，目前有兩種比較成熟的方法用以解決標(biāo)準(zhǔn)判定問題，分別為菌群對比法和分子生物學(xué)法。

3.1 菌群對比法

菌群對比法依賴大數(shù)據(jù)，簡而言之就是將健康狀態(tài)下的牛羊，通過測定不同生長階段的瘤胃微生物菌群結(jié)構(gòu)種類，匯總一個整體數(shù)據(jù)，這個數(shù)據(jù)即是一個健康動物的參考標(biāo)準(zhǔn)，如果發(fā)生細(xì)菌性消化道疾病，則瘤胃中的微生態(tài)菌群結(jié)構(gòu)必然出現(xiàn)大的改變，通過對比正常菌群的結(jié)構(gòu)就能快速判斷出疾病類型和感染菌株的種類，哪種數(shù)量明顯增加的菌種即為感染的致病菌，將其分離保存?zhèn)溆谩?/p>

保存的致病菌菌株有何作用呢，一般會用在兩個方面，一是藥敏數(shù)據(jù)的測定，常用的方法是紙片法和試管法，藥敏試驗可以測定出分離的致病菌株對應(yīng)的敏感藥物種類，繼而選用敏感抗生素進(jìn)行治療。還能通過橫向和縱向?qū)Ρ人幟魯?shù)據(jù)，判斷養(yǎng)殖場的菌株耐藥變化情況，便于及時調(diào)整用藥方案，減少耐藥情況的發(fā)生。二是致病菌株可以人為擴(kuò)大培養(yǎng)，并通過物理或化學(xué)方法滅活后，制備成自家苗免疫健康羊只，便于及時控制疫情，如羊大腸桿菌性腹瀉疫苗就是將致病性大腸桿菌分離純化，通過普通肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，加入甲醛溶液滅活后，再加入鋁膠佐劑，每只羊視個體大小肌肉注射0.5～2.0ml，一周之內(nèi)便可產(chǎn)生高滴度的大腸桿菌抗體，保護(hù)健康羊只不受感染。

3.2 分子生物學(xué)法

通過測定基因的序列和基因庫中的致病微生物的序列進(jìn)行對比，如果重合度相同，則代表所分離的菌株為致病性微生物，反之則是非致病性的。分子生物學(xué)法結(jié)果比較直觀和準(zhǔn)確，但需要人類建立龐大的基因數(shù)據(jù)庫，目前這個基因庫還不是十分的完善，且其中可能有一定概率的錯誤，后期需要大量實驗去補(bǔ)充和修改。目前這個基因庫中的數(shù)據(jù)以國外研究較多，由于我國的養(yǎng)殖模式、氣候環(huán)境、牛羊品種、飼草種類等和國外有一定差異，結(jié)果只能作為參考，同時希望我國政府能夠重視這項工作，使我國的檢疫水平能夠上一個新臺階。

4 呼吸道和全身感染

呼吸道和全身菌血癥性感染與消化道感染性疾病不同，前兩者不存在自身微生態(tài)系統(tǒng)，其本身環(huán)境純凈，呼吸道中可能存在極少量的條件致病菌，而機(jī)體內(nèi)環(huán)境中更是不會存在微生物。當(dāng)發(fā)生感染后，只要無菌操作規(guī)范，基本分離到的菌都是確定的致病菌株，不存在像消化道那樣有益生微生物的干擾情況，因此，呼吸道和全身感染性病原確診相對簡單，病原分離后可通過形態(tài)觀察、生物學(xué)特性鑒定、血清學(xué)鑒定、分子生物學(xué)方法等對結(jié)果進(jìn)行判斷。

5 臨床常見致病菌的檢疫

5.1 沙門氏菌病的檢疫

牛羊沙門氏菌感染類型多為鼠傷寒沙門氏菌、都柏林沙門氏菌和流產(chǎn)沙門氏菌，主要發(fā)生于腸道，生殖道中也能分離到。沙門氏菌的菌體形態(tài)、菌落外觀以及染色特征等與大腸桿菌很像，需要經(jīng)過生化鑒定才能將二者區(qū)分。最常采用的方法是鑒別培養(yǎng)基法，由于大腸桿菌能發(fā)酵乳糖，而沙門氏菌不發(fā)酵，故在麥康凱培養(yǎng)基上大腸桿菌顯粉紅色菌落，沙門氏菌為無色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂上培養(yǎng)時，表面帶有金屬光澤的菌落是大腸桿菌，若為中間黑色，四周環(huán)狀透明的菌落，則為沙門氏菌。另外，沙門氏菌代謝過程中能產(chǎn)生硫化氫，遇到亞鐵離子便生成黑色沉淀，可以通過三糖鐵培養(yǎng)基將二者鑒別。利用生化反應(yīng)的特征不同進(jìn)行病原鑒別可使疫情得到快速判斷。

5.2 布氏桿菌病的檢疫

布氏桿菌病主要表現(xiàn)慢性或隱性感染，其檢疫一般通過血清學(xué)檢查和變態(tài)反應(yīng)檢查。血清學(xué)檢查有兩種，一種是通過已知抗體檢查病料中是否有布氏桿菌抗原，常用方法有熒光抗體技術(shù)、反向間接凝集試驗、間接炭凝集試驗和免疫組化法等；另一種是通過已知抗原檢測感染后7～15d之內(nèi)的可疑病畜體內(nèi)是否存在高滴度的抗體，通過抗原抗體凝集試驗、ELISA等方法進(jìn)行檢查。變態(tài)反應(yīng)檢查適用于大群動物的檢疫，檢測時將布氏桿菌水解素以0.2～0.3ml的量注射到牛羊的尾根皺褶部位或肘關(guān)節(jié)后側(cè)無毛部分的皮內(nèi)，注射后觀察24～48h，如果發(fā)生紅腫，則變態(tài)反應(yīng)呈陽性，可以斷定羊只感染。變態(tài)反應(yīng)法檢出率高，結(jié)果準(zhǔn)確，水解素注射后不會產(chǎn)生抗體，對后期血清學(xué)檢查無影響，臨床應(yīng)用較為廣泛。

5.3 魏氏梭菌的檢疫

魏氏梭菌是消化道常見感染菌，由于本菌厭氧且對糖類分解作用強(qiáng)，絕大多數(shù)的糖類如葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、果糖、淀粉、糊精等都可分解，分解后產(chǎn)酸產(chǎn)氣劇烈，利用這一特征，可設(shè)計牛乳暴烈發(fā)酵試驗來判定。將牛乳培養(yǎng)基置于無菌試管中，接種可疑菌落后液面用滅菌石蠟液封，37℃恒溫培養(yǎng)約6～8h，可見培養(yǎng)基中產(chǎn)生大量氣泡，由于發(fā)酵過程產(chǎn)酸，能將乳中酪蛋白凝固，使得外觀看起來如海綿狀，產(chǎn)生的氣泡可將凝固的酪蛋白沖散，外觀可見動態(tài)的發(fā)酵過程，故稱暴烈發(fā)酵試驗，這個試驗可用于快速檢測魏氏梭菌感染。

6 討論

除了沙門氏菌、布氏桿菌、魏氏梭菌外，還有巴氏桿菌、大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌等重要細(xì)菌類型在臨床同樣比較常見，鑒定方法大同小異，主要為病原分離、染色觀察、生化鑒定、血清學(xué)鑒定、分子生物學(xué)鑒定等。和病毒感染不同，細(xì)菌感染目前都有針對性的敏感抗生素進(jìn)行治療，只要治療時機(jī)恰當(dāng)，用藥科學(xué)，大部分的細(xì)菌感染都預(yù)后良好。由于我國畜牧業(yè)發(fā)展水平和國外發(fā)達(dá)國家相比還有一定差距，臨床用藥監(jiān)管不嚴(yán)格，臨床上濫用抗生素的情況還存在，最終導(dǎo)致耐藥菌株產(chǎn)生的速度加快，同時藥物在機(jī)體中的代謝時間延長，肉、奶等食品中的藥物殘留也加大，嚴(yán)重危害食品安全，我國政府一定要予以重視。