朱滿桂　馮艷　杜萌　劉星星　劉翠平　李夏西

[摘要]目的系統(tǒng)評價Toll樣受體4（TLR4）基因Asp299Gly基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性的相關(guān)性。方法計算機檢索Pubmed，Cohrance，Embase，CNKI，維普，萬方等網(wǎng)站，檢索時限均為各數(shù)據(jù)庫建庫到2016年7月31日，搜尋符合納入和排除條件的隨機對照研究，采用RevMan5.3軟件進行Meta分析及相關(guān)統(tǒng)計學分析。結(jié)果共納入5篇文獻，樣本量總計為1456例，其中研究組501例，對照組955例。Meta分析未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性相關(guān)（等位基因A vs G：OR=1.01，95%CI=0.49～2.07，P=0.98；基因型AA/AG vs GG：0R=0.67，95%CI=0.18～2.48，P=0.55；基因型AA vs AG/GG：OR=1.01，95%CI=0.47～2.19，P=0.98）。結(jié)論未見TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性；多態(tài)性；單核苷酸；肺炎鏈球菌??；Meta分析

[中圖分類號]R446 [文獻標識碼]B [文章編號]2095-0616（2017）17-36-04

肺炎鏈球菌（streptococcus pneumoniae）是社區(qū)獲得性肺炎的最常見的致病原因，在全球具有高發(fā)病率與死亡率。肺炎鏈球菌可導致局部感染如中耳炎和肺炎，亦可導致嚴重侵襲性疾病包括菌血癥和腦膜炎，而后者是肺炎鏈球菌病導致5歲以下兒童死亡的主要病因。越來越多的研究表明，肺炎鏈球菌感染發(fā)展為侵入性致死性疾病與宿主遺傳因素密切相關(guān)。Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs）基因是人體識別病原微生物并調(diào)控免疫反應的重要受體基因，參與介導和調(diào)控細菌和病毒的感染。Toll樣受體基因中最重要的是TLR4基因，在急性炎癥反應中發(fā)揮的作用尤為突出。TLR4基因3號外顯子Asp299Glv突變推測與個體對肺炎鏈球菌病的易感性可能有關(guān)。TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與肺炎鏈球菌病的相關(guān)性已有多篇文獻報道，現(xiàn)搜集相關(guān)文獻進行Meta分析，以期了解肺炎鏈球菌病易感性關(guān)系的基因證據(jù)。

1材料與方法

1.1文獻檢索方法

搜索Pubmed，Cohmnce，Embas數(shù)據(jù)庫，英文檢索詞：Toll-like receptor、TLR、polymorphism、Streptococcuspneumoniae以及pneumococcal；系統(tǒng)地搜索CNKI、萬方、知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫，中文檢索詞：Toll樣受體、TLR、肺炎鏈球菌病、肺炎。其搜索到的文章不需要限制語言的種類，有關(guān)TLR4基因多態(tài)性和肺炎鏈球菌病感染性關(guān)系的文章就可以收錄。使用相應的手段找到更多的相關(guān)文獻。全部的文章需要滿足這樣一個條件：在2016年7月31日之間發(fā)表的。

1.2文獻標準

（1）TLR4基因多態(tài)性以及肺炎鏈球菌病感染情況有著一定的關(guān)系的病例對照文章；（2）研究信息完備，包括研究組以及對照組的每一個基因型分布情況；（3）論文中報道信息完整以及依照報道結(jié)果可以推算出每一個基因型分布情況，文中統(tǒng)計方式無錯誤；（4）清除未明確列出實驗組或?qū)φ战M基因型人數(shù)的文獻；（5）對照人群不能偏離Hardy-Weinberg平衡（HWE），P>0.05。

1.3質(zhì)量評價

參考英國牛津循證醫(yī)學中心文獻嚴格評價項目（Oxford critical appraisal skill program，OxfordCASP，2004）㈣評價納入病例對照研究的質(zhì)量：（1）樣本數(shù)目是不是足夠多；（2）診斷標準是不是出現(xiàn)含糊不清的情況；（3）對照組是否和研究組有著比較性；（4）基因測定手段合理與否；（5）分組情況是否符合科學研究規(guī)定；（6）數(shù)據(jù)是否充分等。由第一作者與通信作者依據(jù)統(tǒng)一標準確定每篇文章是否納入，假設意見不一致時可與其他作者討論解決。

1.4統(tǒng)計學方法

Meta分析使用Review Manager5.3軟件（Cochrane網(wǎng)下載）。每一項實驗的差異性依照Cochrane手冊。當試驗結(jié)果出現(xiàn)顯著異質(zhì)性（I²>50%）時，使用隨機效應模型，尋找異質(zhì)性來源，并分析產(chǎn)生原因；當試驗結(jié)果無明顯異質(zhì)性（I²≤50%）時，則使用固定效應模型。通過繪制倒漏斗圖直觀判斷發(fā)表偏倚。

2結(jié)果

2.1文獻篩選情況

總計納入文獻5篇，研究群體大部分為白人?？倶颖玖?456例，研究組501例，對照組955例，納入Meta分析的文獻數(shù)據(jù)如表1。

2.2 Meta分析結(jié)果

2.2.1TLR4基因Asp299Gly位點等位基因與基因型結(jié)果 詳見表2。

2.2.2等位基因模型（A vs G）Meta分析結(jié)果 等位基因A vs G時Q=8.35，P=0.08，F(xiàn)=52%，異質(zhì)性大，采用隨機效應模型得到OR=1.01（95%CI=0.49～2.07），Z=0.03，P=0.98（圖1），差異無統(tǒng)計學意義，即TLR4基因Asp299Gly多態(tài)性與肺炎鏈球菌病的關(guān)聯(lián)無統(tǒng)計學意義。

2.2.3基因型模型（AA/AG vs GG）Meta分析結(jié)果 分析基因型AA/AG vs GG時：12=0%，采用固定效應模型得到OR=0.67（95%CI=0.18～2.48），Z=0.60，P=0.55（圖2），即TLR4基因Asp299Glv多態(tài)性與肺炎鏈球菌病的關(guān)聯(lián)無統(tǒng)計學意義。

2.2.4基因型模型（AA vs AG/GG）meta分析結(jié)果 基因型AA vs AG/GG時：12=53%，采用隨機效應模型得OR=1.01（95%CI=0.47～2.19），Z=0.03，P=0.98（圖3）。均未見TLR4基因Asp299Glv多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性存在相關(guān)性。漏斗圖如圖4所示，研究分布較為對稱，表明發(fā)表偏倚尚可。

3討論

Toll樣受體識別各種病原體和宿主細胞感染的跨膜蛋白，與炎癥反應密切相關(guān)。TLR4基因位于染色體9q32-q33，其單核苷酸多態(tài)性299位點的天冬氨酸替代為甘氨酸（Asp299Gly、896a/g，SNPID：rs4986790）可使TLR4受體的胞外結(jié)構(gòu)域發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，從而導致免疫系統(tǒng)對LPS反應下降，即更易對病原體易感。TLR4有兩種識別LPS信號的模式：一種為細胞表面糖蛋白14（CD14）依賴性，一種為非CD14依賴性。而細菌的識別大多為CD14依賴性。TLR4可與CD14、髓樣分化蛋白-2（MD-2）形成CD14/TLR4/MD-2復合體，由TLR4胞內(nèi)段與MyD88結(jié)合啟動LPS信號轉(zhuǎn)導通路，從而導致免疫反應，因此，TLR4基因多態(tài)性被認為與各類感染性疾病相關(guān)，如膿毒癥、牙周炎、炎癥性腸病等。一項綜合7項研究的Meta分析指出TLR4 Asp299Gly基因多態(tài)性與革蘭陰性菌易感性不相關(guān)。肺炎鏈球菌作為導致兒童侵襲性感染最常見的革蘭陽性菌，目前暫無研究TLR4 Asp299Gly基因多態(tài)性肺炎鏈球菌易感性的Meta分析。Malley等發(fā)現(xiàn)缺乏TLR4的小鼠在暴露于肺炎鏈球菌溶血素環(huán)境下較正常小鼠更容易發(fā)生侵襲性感染及死亡。Tanaka等發(fā)現(xiàn)TLR4單克隆抗體UT12可改善肺炎球菌肺炎預后，提示TLR4可能與革蘭陽性球菌如肺炎鏈球菌相關(guān)。

本研究5篇研究中Moens與Yuan的研究發(fā)現(xiàn)TLR4 Asp299Gly與肺炎鏈球菌病無關(guān)聯(lián)，而最近的一項研究卻顯示二者臨界相關(guān)，攜帶等位基因A更易感肺炎鏈球菌病。Meta分析整合納入的5篇文獻，發(fā)現(xiàn)在等位基因和各種基因型的對比上，其P值均大于0.05，表明尚無明確證據(jù)證明二者有關(guān)。得到陰性結(jié)果可能因為：（1）納入文獻較少，總樣本量較少。本Meta分析為明確TLR4 Asp299Glv多態(tài)性位點與肺炎鏈球菌的關(guān)系，所以排除了一切非肺炎鏈球菌病作為對象的研究，例如研究對象僅籠統(tǒng)概括為肺炎，或者侵襲性肺炎的。嚴格的納入標準保證了納入文獻的質(zhì)量，但也限制了納入文獻的數(shù)量，造成Meta分析的效度受影響。（2）單純TLR4Asp299Gly多態(tài)性位點并不能有效地影響肺炎鏈球菌病的臨床轉(zhuǎn)歸。肺炎鏈球菌病是否發(fā)展為嚴重的侵襲性疾病從而引起死亡，不僅取決于基因位點突變后宿主是否對肺炎鏈球菌易感，更取決于患者的年齡、基礎疾病以及治療是否及時，用藥是否規(guī)范等。（3）TLR4 Asp299Glv多態(tài)性位點需要與其他多態(tài)性位點共同作用才能在肺炎鏈球菌病的易感性上發(fā)揮作用。例如Huebinger等檢測了TLR4信號轉(zhuǎn)導相關(guān)通路上的6個多態(tài)性位點，表明TLR4的基因轉(zhuǎn)導通路與復雜性感染相關(guān)，本Meta分析納入的三項研究中缺乏對TLR4相關(guān)的其他多態(tài)性位點的研究，結(jié)論具有一定的片面性。因此，未來新的關(guān)于TLR4 Asp299Gly多態(tài)性與肺炎鏈球菌易感性的研究不僅可從增加樣本量著手，也可增加TLR4相關(guān)的多態(tài)性位點，以期更深入地研究TLR4通路相關(guān)基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌易感性的關(guān)系。

（收稿日期：2017-06-14）