張傳燕

（宜賓市第三人民醫(yī)院藥劑科 四川 宜賓 644000）

高效液相色譜法，簡稱HPLC，是一種對中藥復(fù)雜樣品進(jìn)行分析的方法，在中藥復(fù)雜樣品的分離過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。而隨著時(shí)代的發(fā)展，在材料分離方面，人們對其提出了新的更高的要求。而在固定相發(fā)展中，小顆粒的填料則成為了一個(gè)重要的發(fā)展方向。其中，超高效液相色譜法，簡稱（UPLC），就一種以1.7納米的填料作為固定相的分析方法，在小顆粒的填料過程中，不僅具有高效的柱效，而且?guī)椭酥兴帍?fù)雜樣品的分離，進(jìn)而促使分析更加的快速便捷。

1.資料和方法

1.1 一般資料

1.1.1儀器和試劑

高效液相色譜儀。在該儀器中，主要可包括四元梯度泵、真空脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、柱溫箱以及DAD檢測器等[1]。

超高效液相色譜儀。在該儀器中，主要可包括二元梯度泵、自動進(jìn)氧器、注溫箱、PDA檢測器等。

而與之相關(guān)的試劑可包括乙腈、甲酸、Milli-Q水[2]。

1.1.2實(shí)施高效液相色譜法的基本條件

色譜柱。選用Hypersil ODS2 C18以及ACQUITY UPLCTMBEH SHIELD RP18 column；流動相。將水標(biāo)為A，乙腈標(biāo)位B，兩者相加為0.01%（v/v）甲酸，且高效液相色譜的流速應(yīng)該保持在1.0毫升/分鐘，而超高效液相色譜的流速則應(yīng)該保持在0.25毫升/分鐘。同時(shí)，注溫應(yīng)該保持在30℃，檢測波長為280nm，在進(jìn)樣的過程中，采用高效液相色譜時(shí)，進(jìn)樣量為5μL,而采用超高效液相色譜時(shí)，進(jìn)樣量為3μL.而與之相關(guān)的兩組12色譜峰保留參數(shù)的五次線性梯度見表1[3]。

表1 用以兩組12色譜峰保留參數(shù)計(jì)算的五次線性梯度

1.2 方法

在對丹參水提組和川芎水提組進(jìn)行分析時(shí)，其即使中科院的重要方向，同時(shí)，也在項(xiàng)目開展過程中建立起了標(biāo)準(zhǔn)組分。就組分的具體提取方法而言，首先，在100千克的藥材中加入1000升的水進(jìn)行分兩次的提取，提取的時(shí)間一般為2小時(shí)和1.5小時(shí)，合并兩次進(jìn)行提取液。其次，以噴霧干燥的方式將其制造成干粉，為標(biāo)準(zhǔn)組分提供分析和制備的基礎(chǔ)。在該實(shí)驗(yàn)過程中，分別稱去誕生和川芎干粉各0.5克，分別加入20毫升75%的乙醇，并采用超聲進(jìn)行過濾，過濾的時(shí)間為10分鐘，將其過濾定容到25毫升作為備用。同時(shí)，在進(jìn)樣開始前，還應(yīng)該采用0.45μL的有機(jī)過濾膜進(jìn)行過濾[4]。

2.結(jié)果

高效液相色譜和超高效液相色譜兩者的12色譜峰保留參數(shù)具有較好的線性關(guān)系，兩組12色譜峰保留參數(shù)的線性關(guān)聯(lián)R2值分別為0.9914和0.9936.而在兩組12色譜峰保留參數(shù)的基礎(chǔ)之上，將川芎水體組分鐘各色譜峰在效液相色譜上的12色譜峰保留參數(shù)轉(zhuǎn)化為超高效液相色譜的12色譜峰保留參數(shù)，并運(yùn)用計(jì)算12色譜峰保留參數(shù)對超高效液相色譜進(jìn)行分離預(yù)測，通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，模擬圖和實(shí)驗(yàn)譜圖相匹配。

3.討論

通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜和超高效液相色譜之間存在不同的死時(shí)間和系統(tǒng)延遲，在對12色譜峰保留參數(shù)進(jìn)行計(jì)算時(shí)，死時(shí)間和系統(tǒng)延遲都有參與在這個(gè)過程中，所以兩者之間的系統(tǒng)差異得以被關(guān)聯(lián)校準(zhǔn)，并且運(yùn)用該關(guān)聯(lián)線性方程也可達(dá)到高效液相色譜和超高效液相色譜條件相互轉(zhuǎn)化的目的。

在通常情況下，為驗(yàn)證上述轉(zhuǎn)化方法的準(zhǔn)確性，一般會采用關(guān)聯(lián)線性方程對川芎水提組中的各色譜峰在高效液相色譜的12色譜峰保留參數(shù)將其轉(zhuǎn)化為超高效液相色譜的12色譜峰保留參數(shù)，并利用計(jì)算出了12色譜峰保留參數(shù)對條件進(jìn)行預(yù)測和優(yōu)化。

綜上所述，在中藥復(fù)雜體系分析中，高效液相色譜和超高效液相色譜是其重要的方法。而在本文中，通過建立12色譜峰保留參數(shù)在兩種方法中的線性關(guān)系，不僅實(shí)現(xiàn)了兩種分析方法的轉(zhuǎn)換，而且在該過程中實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)在兩個(gè)分析方法中的運(yùn)用，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了中藥復(fù)雜體系在效液相色譜和超高效液相色譜分析條件的轉(zhuǎn)化。

[1]金郁,薛興亞,肖遠(yuǎn)勝,章飛芳,石慧,梁鑫淼.中藥復(fù)雜樣品高效液相色譜和超高效液相色譜分析條件轉(zhuǎn)換方法[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2008,(01):80-84.[2017-08-04].

[2]劉磊.生物樣品自動化在線固相萃取—高效液相色譜分析方法學(xué)研究[D].南開大學(xué),2013（11）.

[3]高青,劉穎,宋彬彬,付龍,郭偉,錢忠直.超高效液相色譜與高效液相色譜方法轉(zhuǎn)換及驗(yàn)證[J].藥物分析雜志,2016,36(07):1279-1286.[2017-08-04]. DOI：10.16155/j.0254-1793.2016.07.21

[4]陳重均.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜定量分析中藥材及其制劑中真菌毒素方法的研究[D].浙江大學(xué),2015（19）.