焦紅葉，薛 飛，程 友

(南京軍區(qū)總醫(yī)院耳鼻喉科，江蘇南京 210000)

鼻咽癌是耳鼻咽喉科較為常見(jiàn)的惡性腫瘤，且近5年發(fā)病率逐年上升[1]。鼻咽癌易早期發(fā)生淋巴結(jié)或血行轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[2]。 p53基因是重要的抗癌基因，對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、增殖、分化及凋亡起調(diào)控作用，p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the ASPP family，iASPP) 可以發(fā)揮拮抗p53的生物學(xué)效應(yīng)，在促進(jìn)癌細(xì)胞異常持續(xù)性增殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用，也提高了癌細(xì)胞的侵襲能力[3-6]。因此，iASPP可為鼻咽癌的早期診斷及預(yù)后評(píng)估提供實(shí)驗(yàn)室參考指標(biāo)。為探討iASPP在鼻咽癌診斷中的價(jià)值，本研究分析了鼻咽癌患者iASPP表達(dá)水平，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2010年1月至2012年12月在本院經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為鼻咽癌的133例患者，同時(shí)選取本院病理科既往收集的30例患者鼻咽部慢性黏膜炎活組織蠟塊作為對(duì)照組。鼻咽癌組133例，其中男89例、女44例，年齡39～75歲，平均(53.3±12.5)歲，病理學(xué)分型：Ⅰ型6例、Ⅱ型13例、Ⅲ型114例，TNM分期：Ⅰ期13例、Ⅱ期33例、Ⅲ期57例、Ⅳ期30例，92例患者獲得隨訪(fǎng)。對(duì)照組30例，其中男20例、女10例，年齡33～70歲，平均(51.4±15.0)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)鼻咽癌的診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)頭頸外科學(xué)分會(huì)制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)年齡18～79歲；(3)所有患者均經(jīng)過(guò)病理活檢或術(shù)后病理學(xué)證實(shí)；(4)獲取組織學(xué)標(biāo)本前，患者無(wú)鼻咽癌放化療史；(5)患者一般資料、臨床資料收集完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)具有放化療史；(2)復(fù)發(fā)性鼻咽癌患者；(3)各項(xiàng)臨床資料不完整，無(wú)法納入統(tǒng)計(jì)的患者。兩組患者年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學(xué) 采用石蠟切片(切片厚度3 mm)脫蠟至水，切片厚度3 mm，3%過(guò)氧化氫(H2O2)室溫孵育5 min；去離子水沖洗3次，每次3 min，采用10%牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL純水)封閉，室溫孵育 5 min；加入iASPP抗體(鼠來(lái)源，南京碧云天生物科技有限公司)，37 ℃孵育2 h；磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗3次，每次5 min，滴加辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗(兔來(lái)源，購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司)，37 ℃ 孵育30 min；PBS沖洗3次，每次5 min，加入硝基四氮唑藍(lán)/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)顯色5 min，復(fù)染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購(gòu)自上海精密儀器有限公司，配套試劑購(gòu)自南京泰康生物科技有限公司。

1.2.2判斷標(biāo)準(zhǔn) 陽(yáng)性著色的iASPP蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，顯色為黃色、褐色，(1)依據(jù)顯色強(qiáng)度：無(wú)色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、褐色及黑色(3分)；(2)依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例： <5%為0分、≥5%～≤25%為1分、 >25%～≤50%為2分、>50%～≤75%為3分、>75%為4分。兩種積分之和，0～1分為陰性(-)；2分為弱陽(yáng)性(+)；3～5分為陽(yáng)性(++)、6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

2 結(jié) 果

2.1兩組標(biāo)本中iASPP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 鼻咽癌組織中iASPP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率(72.18%)高于對(duì)照組的20.00%(χ2=28.461，P<0.01)，見(jiàn)表1、圖1。

表1 兩組標(biāo)本中iASPP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較(n)

A:鼻咽部慢性黏膜炎組織;B:鼻咽癌組織

圖1免疫組織化學(xué)染色(×400)

2.2iASPP蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者臨床相關(guān)特征的關(guān)系 原發(fā)腫瘤(T3～T4)、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者iASPP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于原發(fā)腫瘤(T1～T2)、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)，而iASPP表達(dá)與患者的年齡、性別、病理學(xué)分型、TNM分期無(wú)關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 iASPP蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者的臨床相關(guān)特征的關(guān)系[n(%)]

2.3隨訪(fǎng)結(jié)果分析 92例鼻咽癌患者獲得隨訪(fǎng)，其中iASPP蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者63例、陰性表達(dá)患者29例，iASPP蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者的5年生存率(71.43%)與陰性表達(dá)患者(86.21%)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.993，P=0.084)，見(jiàn)圖2。

圖2 鼻咽癌患者的5年生存函數(shù)圖

3 討 論

臨床上鼻咽癌早期血行轉(zhuǎn)移率可達(dá)25%以上，臨床預(yù)后較差，5年生存率不足35%[7-8]。惡性腫瘤依靠超聲或CT等早期診斷較困難。而通過(guò)對(duì)鼻咽癌發(fā)病過(guò)程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，可以為鼻咽癌患者的早期診斷提供潛在的理論參考指標(biāo)。

p53/CYC/NOTCH信號(hào)通路及p53/HES信號(hào)通路的激活，可以促進(jìn)上游轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因的激活，提高轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子或啟動(dòng)子的活性，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡[9-10]。而iASPP通過(guò)拮抗性抑制p53受體，進(jìn)而沉默了p53導(dǎo)致的保護(hù)性效應(yīng)的產(chǎn)生[11]。iASPP對(duì)于相關(guān)保護(hù)性信號(hào)通路的抑制，促進(jìn)了癌細(xì)胞的自我增殖，并提高了浸潤(rùn)能力，促進(jìn)了病情進(jìn)展[3，12]。已有的研究探討了iASPP在鼻咽癌患者病灶組織中的異常表達(dá)，但缺乏對(duì)于iASPP的表達(dá)與患者臨床病理特征間關(guān)系的研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，在鼻咽癌病灶組織中，iASPP的表達(dá)明顯上升，表達(dá)陽(yáng)性率高于正常組織，提示iASPP可能參與了鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。侯文群等[13]和WANG等[14]通過(guò)回顧性分析研究了73例患者臨床資料，從免疫組織化學(xué)結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)明顯的iASPP表達(dá)陽(yáng)性率的上升，且iASPP的陽(yáng)性率越高，患者的病情越嚴(yán)重、預(yù)后越差，這與本研究的結(jié)果一致。在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率較高，提示iASPP促進(jìn)了癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)的浸潤(rùn)。此外，iASPP的表達(dá)與鼻咽癌原發(fā)灶的范圍有關(guān)，提示在癌細(xì)胞早期浸潤(rùn)或擴(kuò)張過(guò)程中，iASPP的生物活性作用可能較為劇烈，也提示iASPP的表達(dá)對(duì)于原發(fā)部位惡性腫瘤的生物學(xué)調(diào)控作用較為明顯，而對(duì)于轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等部位的調(diào)控作用較弱。

綜上所述，鼻咽癌患者癌組織中iASPP的表達(dá)上調(diào)，與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、原發(fā)腫瘤的范圍有關(guān)，但本研究對(duì)于iASPP在鼻咽癌患者中血清學(xué)診斷價(jià)值分析不足，存在一定局限性。

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