劉 彬 計(jì) 暢 朱楊帆 楊秋萍 畢鴻艷 劉舒文 任 惠※

阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。AD的直接致病因素是大腦內(nèi)β類淀粉樣蛋白(Aβ42)的大量沉積構(gòu)成老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)，從而使患者認(rèn)知功能下降〔1〕。目前AD的診斷主要依據(jù)患者臨床表現(xiàn)、頭顱CT或MRI等影像學(xué)資料、神經(jīng)心理檢查量表等綜合評(píng)價(jià),臨床診斷率低。因此尋找高敏感度、特異度、無創(chuàng)的生物學(xué)指標(biāo)以提高AD早期診斷率，為早期生活方式干預(yù)、藥物干預(yù)及延緩病程提供幫助。當(dāng)前用于AD診斷的特異性生物學(xué)指標(biāo)有Aβ42含量、tau蛋白總量和磷酸化tau蛋白等，但是這些生物學(xué)指標(biāo)需要通過腰穿取腦脊液獲得，有創(chuàng)傷性，不易被患者接受，而且上述檢測(cè)未能廣泛普及到普通醫(yī)院，開展上述檢查工作受限。1992年，麻省總醫(yī)院的Suzanne de la Monte等人在AD腦中發(fā)現(xiàn)大量與神經(jīng)元纖維纏結(jié)有關(guān)的神經(jīng)絲蛋白(neural thread protein，NTP)[2]。1997年，De la Monte團(tuán)隊(duì)成功分離出AD7c的cDNA，命名為AD7c-NTP。尿AD7c-NTP可特異性反映大腦神經(jīng)損傷，與Tau蛋白具有同等效力。AD7c-NTP特異性分布大腦額葉、顳葉，只反映大腦神經(jīng)元損傷；AD7c-NTP為神經(jīng)元軸突跨膜蛋白，與Tau蛋白共同定位；尿AD7c-NTP蛋白特異性反映腦神經(jīng)元損傷[3]，所以臨床開展尿AD7c-NTP檢測(cè)可以協(xié)助AD患者的早期發(fā)現(xiàn)及診治。

1.資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2016年4～9月對(duì)在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診和體檢的幾個(gè)相關(guān)科室患者進(jìn)行篩查，AD7c-NTP的含量檢測(cè)陽(yáng)性者，完善以下檢測(cè)：①進(jìn)行病史采集、全身及?？企w格檢查；②頭顱CT或MRI顯示有腦萎縮，排除腦血管病引起的癡呆；③簡(jiǎn)易精神神經(jīng)量表評(píng)定(MMSE)、Hachinski缺血指數(shù)(HIS)、日常生活能力量表(ADL)、漢密爾頓抑郁量表(HAMD)≤7；④甲狀腺功能正常、梅毒抗體陰性；⑤血尿常規(guī)、肝腎功能、血脂、心電圖、血壓正常，血糖檢測(cè)。

1.2 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) AD符合美國(guó)美國(guó)國(guó)立神經(jīng)病語(yǔ)言障礙腦卒中研究所和AD病及相關(guān)疾病協(xié)會(huì)(NINCDS-ADRDA)的很可能AD診斷標(biāo)準(zhǔn)〔4〕，MMSE:文盲≤17分，小學(xué)≤20分，中學(xué)及以上≤26分；HIS≤4分，HAMD≤8分。輕度的AD:MMSE≥19分且≤26分；中重度的AD:MMSE<19分；MCI(輕度認(rèn)知功能障礙)符合美國(guó)Mayo神經(jīng)病學(xué)研究中心的Petersen診斷標(biāo)準(zhǔn)，MMSE:文盲≤18～27分，小學(xué)≤21～27分，中學(xué)及以上≤25～27分；HIS≤4分，HAMD≤8分。正常對(duì)照組為年齡性格匹配智能檢查正常的老年人，無嚴(yán)重軀體疾病及精神障礙，MMSE≥26分且≤30分，HIS≤4分，ADL=20分。

1.3 AD7c-NTP測(cè)定 采用深圳市安群生物工程有限公司提供的AD7c-NTP檢測(cè)試劑盒。留取被檢測(cè)者中段晨尿，選取經(jīng)尿常規(guī)檢測(cè)合格的清亮標(biāo)本，經(jīng)過離心、過濾，取上清液2ml作為待測(cè)試液即樣本，采用改良的ELISA雙抗體夾心法，將樣本加入試劑盒中，存在于樣本中的AD7c-NTP與板上包被的抗體結(jié)合，通過洗板，將未結(jié)合的游離成分洗去；加入AD7c-NTP的多抗，溫育后洗滌，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的酶結(jié)合物，最終形成抗體/抗原/抗體/酶標(biāo)二抗的復(fù)合物，加入顯色劑顯色，15分鐘后終止反應(yīng)，在450nm處測(cè)OD.值，根據(jù)已知濃度的校準(zhǔn)品繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終算出樣本的AD7c-NTP含量，正常參考值≤1.5ng/ml。

2.結(jié)果

2016年4～9月共進(jìn)行尿AD7c-NTP檢測(cè)1689例，男性866例，女性823例，總陽(yáng)性病例共136例，總陽(yáng)性率8%。對(duì)136例陽(yáng)性者，我們對(duì)其作了MMSE量表評(píng)估，MCI 72例，AD輕度29例，AD中重度35例。其余數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析如表1～表6所示。

表1 不同性別陽(yáng)性率分布

表2 年齡分布

表3 科室分布

表4 MMSE年齡分布MCI

表5 MMSE年齡分布AD輕度

表6 MMSE年齡分布AD中重度

3.討論

AD已經(jīng)被大家逐漸認(rèn)識(shí)到，尤其是近幾年，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，老年人群健康保健工作不斷完善，人類平均壽命增加，許多國(guó)家進(jìn)入老齡化社會(huì)，AD問題越來越受到重視。開展AD的早期篩查工作，及早診斷并給予相應(yīng)干預(yù)治療，會(huì)延緩AD的進(jìn)展，從而減輕家庭及國(guó)家的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在我國(guó)，目前各地醫(yī)院相繼開展記憶門診，國(guó)家也通過電視、報(bào)刊、廣播等媒體手段向大眾宣教老年癡呆的相關(guān)知識(shí)，自主認(rèn)識(shí)到此類疾病并且主動(dòng)就醫(yī)的人數(shù)卻不多，早期癥狀出現(xiàn)時(shí)未能引起重視，甚至誤認(rèn)為是自然衰老現(xiàn)象，喪失了早期干預(yù)治療的時(shí)機(jī)，往往到了中晚期才開始干預(yù)，只能完全由家庭照護(hù)了。

從上述5個(gè)月在我院幾個(gè)科室就診或體檢中心隨機(jī)檢測(cè)的人群AD篩查中可以看到，50～70歲間AD7c-NTP陽(yáng)性的，

主要為MCI人群；而隨著年齡增長(zhǎng)，70～80歲主要為AD輕度，AD中重度患者多在80歲以上，而50歲以前也有少數(shù)人檢測(cè)到AD7c-NTP陽(yáng)性。AD7c-NTP陽(yáng)性人群中絕大部分沒有因?yàn)橛洃浵陆祷蛐愿窀淖兊犬惓０Y狀到專科就診過。

AD是一個(gè)進(jìn)展性疾病，而AD7c-NTP是神經(jīng)元損傷標(biāo)志物，反映大腦神經(jīng)元損傷的速度。文獻(xiàn)表明AD7c-NTP的免疫反應(yīng)性在早期神經(jīng)炎性斑塊中可以檢測(cè)到，證明異常AD7c-NTP表達(dá)是AD的早期事件[5],在疾病的早期檢測(cè)濃度可能更高更靈敏。MCI期患者由于大腦神經(jīng)元開始大范圍凋亡分泌出AD7c-NTP蛋白，故根據(jù)不同受檢者的疾病發(fā)展速度可檢測(cè)到不同濃度水平的表達(dá)。國(guó)內(nèi)臨床實(shí)踐表明MCI患者尿液AD7c-NTP水平顯著高于健康組，結(jié)論顯示：尿液AD7c-NTP或是MCI早期診斷的重要生物標(biāo)志物[6]。此外，早期AD7c-NTP濃度高低對(duì)疾病發(fā)展與預(yù)后有很好的提示作用。收集MCI患者尿液檢測(cè)AD7c-NTP濃度，隨后進(jìn)行隨訪研究2年，結(jié)果表明：轉(zhuǎn)化為AD的MCI組尿液AD7c-NTP水平顯著高于穩(wěn)定期MCI組，顯示尿AD7c-NTP對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸與預(yù)后具有一定的預(yù)測(cè)效力[7]。

另外一篇文獻(xiàn)研究中也顯示：AD7c-NTP的免疫反應(yīng)性在早期神經(jīng)炎性斑塊中可以檢測(cè)到，而在成熟斑塊中卻沒有發(fā)現(xiàn)[5]，證明異常AD7c-NTP表達(dá)是AD的早期事件。因?yàn)殡S著疾病發(fā)展到重度時(shí)期，神經(jīng)元發(fā)生變性和凋亡，而AD7c-NTP這樣的神經(jīng)絲蛋白也會(huì)隨著被溶解和吸收。有文獻(xiàn)研究證明：在凋亡的神經(jīng)元中，未發(fā)現(xiàn)AD7c-NTP抗體免疫反應(yīng)[5]。

在科室檢測(cè)陽(yáng)性人群中，我們發(fā)現(xiàn)內(nèi)分泌科陽(yáng)性者合并有2型糖尿病，已經(jīng)有大批研究證據(jù)表明，胰島素是一種信號(hào)肽，參與腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放調(diào)節(jié)，影響認(rèn)知、記憶等高級(jí)大腦功能，而AD的主要臨床表現(xiàn)也是記憶、認(rèn)知功能障礙[8]；目前生物學(xué)研究已經(jīng)揭示胰島素對(duì)分子和細(xì)胞作用失常，也是AD的病理基礎(chǔ)[9]。糖尿病與AD有相關(guān)性，而降糖藥物的應(yīng)用對(duì)AD的防治提供了新思路。

以往，我們是等著患者主動(dòng)來就診才明確AD或MCI診斷，現(xiàn)在可以將簡(jiǎn)單易行的AD7c-NTP檢測(cè)帶到臨床中、中老年人群體檢中，這樣可以發(fā)現(xiàn)許多MCI或AD早期患者，給予早期行為及藥物的干預(yù)治療，延緩病程進(jìn)展，減輕社會(huì)及家庭負(fù)擔(dān)。

1 張勤安，高曉群.阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.醫(yī)學(xué)研究雜志，2012,41(2):7-10.

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