張慧，鄒曉月，舒揚(yáng)，向敏，陰晴

近年來各大型醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠有效，最大程度地得到質(zhì)量和能力方面的認(rèn)可，更好的服務(wù)于臨床，已經(jīng)著力推行檢驗(yàn)過程的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化，紛紛將通過ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》，即實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可，納入到實(shí)驗(yàn)室的發(fā)展規(guī)劃中。而在質(zhì)量體系的構(gòu)建中，對定量實(shí)驗(yàn)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求中的重要一環(huán)。我室參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-4]，與一些已經(jīng)通過ISO15189質(zhì)量認(rèn)可的醫(yī)院溝通交流，結(jié)合實(shí)際，以乙肝兩對半的定量檢測為例，就儀器系統(tǒng)精密度、正確度、線性范圍、生物參考區(qū)間及分析的靈敏度等主要性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證[5-9]，探討Anytest2000TRF時間分辨熒光免疫分析儀簡便易行的性能驗(yàn)證方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 上海新波生物技術(shù)有限公司Anytest2000TRF時間分辨熒光分析儀；上海新波生物技術(shù)有限公司提供的配套試劑、質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品。

1.2 樣本來源 選20個符合標(biāo)準(zhǔn)健康個體血清。

1.3 方法

1.3.1 批內(nèi)精密度 取兩個濃度標(biāo)準(zhǔn)品C低值和E高值，連續(xù)重復(fù)測定20次，計算x、CV及s值。

1.3.2 中間精密度 取兩個濃度標(biāo)準(zhǔn)品C低值和E高值，連續(xù)測試5d，每天重復(fù)測4次。測試完成后記錄檢測結(jié)果，計算批間的x、CV及s值。

1.3.3 正確度 使用運(yùn)行新波有證二級標(biāo)準(zhǔn)品C低值和E高值，連續(xù)測試5次取x，看測定x是否在標(biāo)準(zhǔn)品范圍內(nèi)，進(jìn)行正確度驗(yàn)證。

1.3.4 線性范圍評估 因低濃度和高濃度病人樣品較難收集，故運(yùn)行新波有證二級標(biāo)準(zhǔn)品B作為低濃度樣本，F(xiàn)作為高濃度樣本。第一管為低濃度（理想狀態(tài)為接近或位于線性范圍下限）管編號為L；第2管為1份高濃度和3份低濃度標(biāo)本混合而成；濃度為H×25%+L×75%，第3管為2份高濃度和2份低濃度標(biāo)本混合而成；濃度為H×50%+L×50%；第4管為3份高濃度和1份的低濃度標(biāo)本混合而成，H×75%+L×25%；第五管為高濃度接近線性范圍高限，高濃度管編號為H。重復(fù)測定2～3次，計算x。并計算線性回歸方程y=ax+b。重復(fù)測定高值和低值標(biāo)本濃度，取平均值作為樣品的理論值。將x與理論值進(jìn)行比較，驗(yàn)證線性范圍[10]。

1.3.5 生物參考區(qū)間 選擇20個能代表實(shí)驗(yàn)室的健康個體，排除酗酒、獻(xiàn)血者、血壓異常、吸毒、哺乳期、肥胖、妊娠、藥物、禁食、吸煙、近期住院及手術(shù)的人員，體檢各項(xiàng)指標(biāo)均正常的人員。并采用雅培AXFYM儀器上完成測試的五項(xiàng)全陰樣本。 測試此20份血清。按照本實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序采集、處理、分析標(biāo)本進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證[11，12]。

1.3.6 靈敏度 (檢測低限)取陰性血清作為空白血清，每個項(xiàng)目連續(xù)重復(fù)測定20次，計算x及s。檢測低限=x空白+2s空白。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計分析采用 SPSS(Version，l3.0)軟件包，精密度計算 x、CV 及 s值，正確度計算x，線性范圍評估要進(jìn)行相關(guān)分析和回歸分析，靈敏度計算x及s。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)精密度及中間精密度 各組數(shù)據(jù)的變異系數(shù)均小于判斷標(biāo)準(zhǔn)。見表1、表2和表3。

2.2 正確度 運(yùn)行新波有證二級標(biāo)準(zhǔn)品C低值和E高值，連續(xù)測試5次取得均值，實(shí)測均值在標(biāo)準(zhǔn)品均值范圍內(nèi)。驗(yàn)證通過。見表4。

2.3 線線性范圍 比較實(shí)測值 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均值與理論值，相關(guān)性結(jié)果符合廠家的判斷標(biāo)準(zhǔn)：a值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù) r≥0.975。 詳見下圖 1、表 5。

2.4 生物參考區(qū)間 判斷標(biāo)準(zhǔn)是實(shí)驗(yàn)方案如果20個參考個體中不超過2例的觀察值在原始的參考限之外，那么廠商提供的參考區(qū)間可以接受；如果3例以上超出界限，再選擇20個參考個體進(jìn)行驗(yàn)證，若少于或等于2個觀測值超過原始參考限，則可接受，若還有3個超出參考限，需要重新檢查各種條件，決定是否建立自己參考區(qū)間。我室所選20個參考個體均在在原始的參考限內(nèi)，廠商提供的參考區(qū)間可以接受。結(jié)果見表6。

表1 批內(nèi)精密度低值和高值驗(yàn)證結(jié)果

表2 中間精密度低值驗(yàn)證結(jié)果

表3 中間精密度高值驗(yàn)證結(jié)果

表4 標(biāo)準(zhǔn)品范圍及正確度驗(yàn)證結(jié)果

表5 線性范圍評估結(jié)果

圖1 五項(xiàng)相關(guān)性散點(diǎn)圖

3.5 靈敏度 所測檢測低限數(shù)據(jù)小于試劑說明書要求為驗(yàn)證通過，驗(yàn)證結(jié)果見表7。

3 討論

Anytest2000TRF時間分辨熒光分析儀是一臺半自動的免疫檢測儀器。我室主要用來定量檢測乙肝五項(xiàng)[13]。為保證其檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，我們每天進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控、參加衛(wèi)計委和江蘇省臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量控制，均取得好成績。但這遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，ISO15189認(rèn)可中規(guī)定：實(shí)驗(yàn)室對新購置的儀器，遇到重大投訴，重要零件及試劑更換后均需要對儀器的主要性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，從而保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。精密度、正確度、線性范圍和生物參考區(qū)間、靈敏度等性能參數(shù)是Anytest2000TRF主要性能指標(biāo)，目前各臨床實(shí)驗(yàn)室多依賴制造商所提供的線性范圍、參考區(qū)間，分析靈敏度值?；谶@樣的現(xiàn)狀，我室通過對相關(guān)質(zhì)量認(rèn)可文件的學(xué)習(xí)，經(jīng)過周密的實(shí)驗(yàn)設(shè)計，對這五個方面進(jìn)行了性能驗(yàn)證[14-16]。結(jié)果顯示HBsAg、HBsAb中間及批內(nèi)精密度CV值均＜15%；HBeAg、HBeAb、HBcAb中間及批內(nèi)精密度CV均＜20%；運(yùn)行新波有證二級標(biāo)準(zhǔn)品C低值和E高值，連續(xù)測試5次取得均值，實(shí)測均值在標(biāo)準(zhǔn)品均值范圍內(nèi)，正確度符合標(biāo)準(zhǔn)；比較實(shí)測值 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均值與理論值，相關(guān)性結(jié)果符合廠家的判斷標(biāo)準(zhǔn)：a值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975；我室所選20個參考個體均在在原始的參考限內(nèi)，廠商提供的參考區(qū)間可以接受；HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 分 析 的 靈敏度 （檢測低限）值分別小于0.2ng/ml、5mIU/ml、0.5PEIU/ml、0.1PEIU/ml、0.5PEIU/ml， 所測檢測 低限數(shù)據(jù)小于試劑說明書要求；驗(yàn)證結(jié)果顯示Anytest2000TRF測定的乙肝兩對半分析性能滿足廠商規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。儀器各方面性能良好，測定樣本快速準(zhǔn)確，精密可靠?？梢赃m應(yīng)臨床的需要。我室建立的分析儀性能驗(yàn)證方案和方法有助于提高儀器的檢測質(zhì)量。但我們的性能驗(yàn)證方案也存在不足之處，就是對實(shí)驗(yàn)樣品的選擇上，據(jù)文獻(xiàn)及一些質(zhì)量認(rèn)可的文件要求，選擇病人的標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)樣品是最理想的[10]，由于病人標(biāo)本較難獲取，精密度、正確度、線性范圍的性能驗(yàn)證我們選用了標(biāo)準(zhǔn)品代替。所以在以后的工作中我們要注意搜集一些高值、低值、不同年齡及性別的乙肝兩對半樣品來做性能驗(yàn)證，以期能取得更為準(zhǔn)確可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

表6 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

表7 靈敏度驗(yàn)證結(jié)果