程 實(shí)， 楊 艷， 馬 玲， 周 勇， 向 薇， 姚 華

(1新疆醫(yī)科大學(xué)， 烏魯木齊 830011； 2烏魯木齊市人民醫(yī)院北院(兒童醫(yī)院)， 烏魯木齊 830011；3新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院， 烏魯木齊 830054)

非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)近年來患病率快速增長(zhǎng)，使其已經(jīng)成為發(fā)展中國家最為普遍的慢性肝病之一[1-2]。NAFLD發(fā)生及發(fā)展的病理機(jī)制至今還不完全明確，但氧化應(yīng)激被認(rèn)為可能是NAFLD發(fā)生和發(fā)展的重要因素[3]。氧化應(yīng)激是體內(nèi)抗氧化能力無法平衡體內(nèi)逐漸增高的氧化能力所導(dǎo)致的一種應(yīng)激現(xiàn)象[4]。隨著甘油三酯(triglyceride, TG)在肝細(xì)胞內(nèi)堆積，過氧化氫(H2O2)作為其氧化代謝的副產(chǎn)物也不斷增多，隨著時(shí)間的推移就會(huì)使動(dòng)物或者人類肝細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激[5]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人類研究都揭示了氧化應(yīng)激與NAFLD之間呈正相關(guān)關(guān)系[6-7]。尿酸(uric acid, UA)是血液中強(qiáng)有力的自由基清除劑，大約有60%的自由基由UA負(fù)責(zé)從血液中清除[8]。在人類進(jìn)化進(jìn)程中，尿酸酶的失活、血液中尿酸水平的升高可能是為了適應(yīng)血液中過量的自由基和氧化應(yīng)激從而進(jìn)化出的一種保護(hù)機(jī)制[8]。雖然UA的抗氧化能力預(yù)示著其可能對(duì)于肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激有治療作用，但是最近的研究都顯示尿酸水平與NAFLD呈正相關(guān)關(guān)系[9-10]，并且，根據(jù)現(xiàn)有的研究結(jié)果，UA可能在NAFLD的發(fā)生和發(fā)展中都有促進(jìn)作用，并且其可以通過損傷細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶來促進(jìn)細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激[11]。但是，UA與包括NAFLD在內(nèi)的多種疾病之間在機(jī)制上是怎樣的關(guān)系，具體起著什么樣的作用至今還不完全明了。本研究采用不同濃度UA干預(yù)細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞中活性氧(reactive oxygen, ROS)水平，總超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)活性，還原性谷胱甘肽(glutathione, GSH)，丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量。細(xì)胞凋亡水平、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate transaminase, AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)的活性,反應(yīng)肝細(xì)胞的損傷，旨在研究UA對(duì)脂肪變性肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激作用。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞系L-02細(xì)胞系購自南京凱基生物有限公司，用含10%血清的DMEM高糖培養(yǎng)基于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。

1.2主要儀器及試劑油酸(Sigma-Aldrich公司),MTT粉劑(Invitrogen公司),PEAnnexin V 凋亡試劑盒(BD公司)，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、ROS測(cè)定試劑盒、還原性GSH含量測(cè)定試劑盒、甘油三酯含量測(cè)定試劑盒、總SOD活性測(cè)定試劑盒和MDA含量測(cè)定試劑盒、AST活性測(cè)定試劑盒、ALT活性檢測(cè)試劑盒均購自南京建成生物技術(shù)研究所。酶標(biāo)儀(BIO-RAD，Benchmark Plus),水浴鍋(北京永光明，DZKW-D2),超凈工作臺(tái)(AIRTECH，SW-CJ-2F),高速離心機(jī)(Thermo，BR4),流式細(xì)胞儀(Beekmen Coulter),熒光倒置顯微鏡(Olympus，IX71),超聲破碎儀(SCIENTZ，950E)。

1.3各試劑的配制

1.3.1 OA培養(yǎng)基的配制 稱取40 mg NaOH粉劑溶解于5 mL超純水中，稱取282 mg OA粉劑于NaOH溶液中70℃水浴中反應(yīng)1 h，待溶液透明無沉淀后用超純水定容至10 mL，即配成100 mmol/L OA工作液，按照每10毫升完全培養(yǎng)基中加30 μL OA工作液的比例配成OA培養(yǎng)基，現(xiàn)用現(xiàn)配。未用完的OA工作液于4℃保存。

1.3.2 UA培養(yǎng)基的配制 稱取UA粉劑13.5 mg于10 mL完全培養(yǎng)基中，于電磁混勻器上常溫下混勻3 h，混勻后將其用完全培養(yǎng)基定容至45 mL并用0.22 μm濾器過濾，即配制成了30 mg/dL的UA母液，并按照一定比例用完全培養(yǎng)基分別稀釋成5、10和20 mg/dL濃度的UA培養(yǎng)基各20 mL，待用。

1.4方法

1.4.1 脂肪變性模型的建造 將L-02細(xì)胞系接種在25 cm2培養(yǎng)瓶中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。待細(xì)胞融合度達(dá)到80%,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并按照5×103個(gè)/mL密度接種于96孔板，待貼壁生長(zhǎng)1 d后用不同濃度的油酸培養(yǎng)基干預(yù)24 h后，進(jìn)行MTT細(xì)胞活力檢測(cè)。同樣將正常培養(yǎng)的L-02細(xì)胞按照3×105個(gè)/mL鋪至六孔板，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)1 d后用配制好的不同濃度的油酸培養(yǎng)基干預(yù)24 h后破碎細(xì)胞，測(cè)胞漿TG。

1.4.2 UA的干預(yù) 將正常培養(yǎng)的L-02細(xì)胞按照1×105個(gè)/mL密度接種至6孔板，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)1 d后用篩選出的最佳油酸濃度進(jìn)行造模，造模24 h后分別用0、5、10、20、30 mg/dL的UA對(duì)模型細(xì)胞分別干預(yù)24、48和72 h，并設(shè)置不干預(yù)細(xì)胞為正常對(duì)照組，油酸干預(yù)細(xì)胞為模型組，其中，5 mg/dL是正常人體血尿酸水平組，其余3個(gè)尿酸干預(yù)組均為高尿酸水平組[9]。

1.4.3 胞內(nèi)ROS水平的檢測(cè) 將DCFH-DA試劑與PBS按照1∶10 000進(jìn)行配制，將UA干預(yù)過的細(xì)胞去培養(yǎng)基后直接在六孔板中用稀釋后的DCFH-DA溶液于37℃培養(yǎng)箱中避光孵育30 min，放置于熒光倒置顯微鏡下用藍(lán)色激發(fā)光進(jìn)行熒光激發(fā)，于200倍視野下觀察，曝光時(shí)間50 ms，進(jìn)行拍照。

1.4.4 胞漿SOD、MDA、GSH、ALT及AST的檢測(cè) 將細(xì)胞進(jìn)行尿酸干預(yù)后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行超聲破碎，檢測(cè)細(xì)胞總蛋白質(zhì)含量后按照SOD、MDA、GSH、ALT及AST檢測(cè)試劑盒的說明進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。

1.4.5 流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞凋亡 將UA干預(yù)后的細(xì)胞用胰酶消化，將收集的的細(xì)胞離心后按照試劑盒說明進(jìn)行PE Annexin V和7-AAD2種熒光染料的孵育。孵育后取1×105個(gè)細(xì)胞進(jìn)行流式分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。對(duì)實(shí)驗(yàn)所得計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，方差齊者多組間直接用單因素ANOVA分析組間整體差異，如有差異則用Tukey法進(jìn)行兩兩比較；方差不齊者，用Brown-Forsythe對(duì)單因素ANOVA結(jié)果進(jìn)行校正，如果有差異則用Games-Howell法進(jìn)行兩兩比較。如果數(shù)據(jù)不符合正態(tài)性，則用非參數(shù)的秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)中得到的百分率數(shù)據(jù)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，總體檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05,在兩兩比較時(shí)，因?yàn)橥粫r(shí)間各組間進(jìn)行了9次比較，所以需對(duì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α進(jìn)行分割，最終兩兩比較的檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.006。

2 結(jié)果

2.1L-02細(xì)胞脂肪變性模型的建造在所選的4個(gè)OA濃度中，與其他3個(gè)濃度相比，0.4 mmol/L的濃度的OA明顯降低了細(xì)胞的活性，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，所以本研究中將0.4 mmol/L濃度去除(圖1a)。用0.3 mmo/L的OA干預(yù)細(xì)胞后，胞內(nèi)TG含量明顯高于0.1和0.2 mmol/LOA干預(yù)組(圖1b)，因此本研究選擇0.3 mmol/LOA作為造模最佳濃度條件。

a: 不同濃度OA干預(yù)L-02細(xì)胞后MTT的結(jié)果

b:不同濃度OA干預(yù)L-02細(xì)胞后胞內(nèi)TG含量

圖1不同濃度油酸干預(yù)L-02細(xì)胞MTT和TG結(jié)果

2.2胞漿ROS、MDA、SOD及GSH的檢測(cè)正常細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，ROS熒光強(qiáng)度在72 h內(nèi)增加。模型組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的熒光強(qiáng)度都明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組。在UA的干預(yù)下，5 mg/dL和10 mg/dL組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的熒光強(qiáng)度均低于模型組。當(dāng)UA濃度升高至20 mg/dL時(shí)，干預(yù)24 h相對(duì)于模型組可以看出明顯的熒光強(qiáng)度的差異。30 mg/dL UA干預(yù)時(shí)，已看不出其與模型組的差異，72 h干預(yù)時(shí)其熒光強(qiáng)度略強(qiáng)于模型組(圖2)。

模型組細(xì)胞內(nèi)MDA含量在各干預(yù)時(shí)間都明顯高于正常對(duì)照組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在進(jìn)行不同尿酸干預(yù)后，除10 mg/dL UA組48和72 h與24 h沒有明顯差異外，其余濃度組隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)MDA含量明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且10 mg/dL組各干預(yù)時(shí)間MDA含量均與正常細(xì)胞比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

模型組細(xì)胞內(nèi)SOD活力相比于正常對(duì)照組細(xì)胞明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，5 mg/dL組在各干預(yù)時(shí)間的總SOD活性與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10 mg/dL組48 和72 h與24 h的總SOD活力相比均沒有明顯差異，但其在48 h與同時(shí)間的模型組總SOD活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組間72 h干預(yù)時(shí)間均沒有明顯差異(表1)。

OA干預(yù)后，模型組細(xì)胞GSH含量在各干預(yù)時(shí)間內(nèi)均明顯低于正常對(duì)照組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。24 h時(shí)，所有UA干預(yù)組的GSH含量比模型組均明顯增加，其中5和20 mg/dL組GSH含量明顯高于正常對(duì)照組細(xì)胞(P<0.05)。48 h時(shí)，20和30 mg/dL組細(xì)胞內(nèi)GSH含量明顯低于模型組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。72 h時(shí)，各組細(xì)胞相較正常組GSH均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

24 h 48 h 72 h

圖2 胞內(nèi)ROS熒光強(qiáng)度檢測(cè)(×200)

正常對(duì)照組模型組5mg/dL組10mg/dL組20mg/dL組30mg/dL組PMDA/(nmol/gprot) 24h0.491±0.1000.699±0.123#0.559±0.0730.521±0.0830.468±0.0530.549±0.135 0.001 48h0.504±0.0240.847±0.086*#0.677±0.047*#0.541±0.0680.631±0.055*#0.587±0.114<0.001 72h0.593±0.040*0.834±0.094*#0.708±0.057*#0.570±0.0310.731±0.079*0.870±0.209*#<0.001 P0.0180.015<0.0010.334<0.0010.001SOD/(U/gprot) 24h10.936±0.84014.855±1.544#13.560±1.52712.201±2.68910.356±1.33311.415±1.3190.009 48h9.377±0.193*12.098±1.10513.558±1.279#10.217±1.44911.679±0.096#9.452±0.7030.003 72h10.101±0.34810.421±0.191*10.682±0.40010.383±0.2379.948±0.99410.219±0.4270.461 P0.0120.0050.0190.2640.1020.063GSH/(μmol/gprot) 24h40.555±0.12027.276±0.250*#46.645±0.099#31.009±0.144#52.145±0.292#39.295±0.071#<0.001 48h32.920±0.192*22.225±0.346*#31.833±0.081*#30.256±0.131*#22.016±0.045*#18.358±0.125*#<0.001 72h32.562±0.793*18.477±0.019*#26.714±0.070*#28.905±0.077*20.710±0.099*#15.916±0.094*#<0.001 P0.002<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：與同濃度24 h比較，*P<0.05; 與正常對(duì)照組比較,#P<0.05。

2.3不同濃度UA干預(yù)對(duì)于L-02脂肪變性細(xì)胞損傷的影響各組細(xì)胞AST活性并沒有隨著UA干預(yù)時(shí)間的增加而呈現(xiàn)出明顯的規(guī)律，但在24和48 h的干預(yù)下模型組的AST活性明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而20 mg/dL和30 mg/dL組24和48 h時(shí)與模型組活性沒有差異。10 mg/dL UA組和對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。72 h時(shí)，對(duì)照組、模型組、10 mg/dL及30 mg/dL組AST活性之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3a)。

ALT活性隨著干預(yù)時(shí)間的增長(zhǎng)，呈現(xiàn)出了上升趨勢(shì)，但是，模型組ALT活性只在72 h時(shí)明顯高于正常對(duì)照組，UA干預(yù)組除5 mg/dL組外，各組從48 h開始都明顯高于正常對(duì)照組，30 mg/dL組在各干預(yù)時(shí)間點(diǎn)均明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖3b)。

模型組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各UA干預(yù)組在前24和48 h時(shí)都降低了脂肪變性引起的細(xì)胞凋亡，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而30 mg/dL組在72 h細(xì)胞凋亡率高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

a: AST活性

b: ALT活性

圖3 不同濃度UA干預(yù)后各組胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶活性的檢測(cè)

注: 與正常組比較，*P<0.006; 與模型組比較,△P<0.006。

3 討論

脂肪的累積是NAFLD發(fā)病的基礎(chǔ)條件[12]，過多的脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)代謝引起的氧化應(yīng)激會(huì)造成肝臟的損傷，這將加快NAFLD向更嚴(yán)重階段發(fā)展的速度。氧化應(yīng)激是細(xì)胞內(nèi)ROS或者活性氮的產(chǎn)生超過了細(xì)胞清除他們的能力而造成的一種氧化抗氧化失衡[13]，其特征一般是抗氧化物的減少，氧化物的增加。生命體能通過多種酶或非酶抗氧化分子來保護(hù)自身免受氧化物的損傷，這就包括GSH和SOD。

GSH是氧化還原反應(yīng)中的還原劑，其通過谷胱甘肽過氧化物酶的催化，在機(jī)體內(nèi)被氧化成氧化型谷胱甘肽。谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)是還原性谷胱甘肽合成過程中的限速酶，而GCL由亞基GCLC和GCLM構(gòu)成的二聚體，其中GCLC掌控著全酶的催化活性，而GCLM可以增強(qiáng)GCLC的催化效率[14]。機(jī)體產(chǎn)生的初級(jí)活性氧一般為超氧化物，超氧化物經(jīng)歧化后生成反應(yīng)活性較低的過氧化氫，而催化此過程的關(guān)鍵酶就是SOD。

在本研究中，通過ROS的檢測(cè)，首先發(fā)現(xiàn)了0.3 mmol/L的油酸造成了細(xì)胞活性氧產(chǎn)物的增加，但是隨著不同濃度不同時(shí)間尿酸的干預(yù)，發(fā)現(xiàn)5和10 mg/dL濃度有助于細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)物的減少。類似的結(jié)果也出現(xiàn)在SOD活性和GSH含量的檢測(cè)中。SOD在氧化應(yīng)激過程中活性增高和降低的兩種情況在其他研究中都有出現(xiàn)過[15-16]，對(duì)于SOD隨著氧化應(yīng)激發(fā)生而活性降低的情況，其原因可能是在氧化應(yīng)激環(huán)境下，SOD在表達(dá)或表達(dá)后修飾的某階段被氧化損傷，使其整體活力下降，而類似于本研究隨著活性氧產(chǎn)物的增加其活力上升的情況，其原因可能是0.3 mmol/L油酸濃度下24 h的干預(yù)還不能使L-02細(xì)胞發(fā)生強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激，當(dāng)前SOD活性還可以滿足當(dāng)前細(xì)胞的需求所致，同時(shí)從ROS的結(jié)果中還可以看出，高濃度的UA水平，尤其是30 mg/dL的UA不但沒有減少ROS的產(chǎn)生，還有促進(jìn)其產(chǎn)生的效果，從SOD的活性中也得到相同觀點(diǎn)，30 mg/dL組的活性隨著干預(yù)時(shí)間持續(xù)下降，可能是氧化應(yīng)激增強(qiáng)所造成。其次，模型組GSH含量相對(duì)于正常對(duì)照組減少，是氧化應(yīng)激比較典型的現(xiàn)象，隨著UA的干預(yù)，在5 mg/dL和10 mg/dL組中的GSH逐漸恢復(fù)，這與SOD活性以及ROS含量的結(jié)果保持一致。因此可以推測(cè)GSH可能是比SOD在脂肪變性造成的氧化應(yīng)激中更靈敏的抗氧化指標(biāo)。

本研究在細(xì)胞損傷相關(guān)的研究中，檢測(cè)了ALT、AST活性及細(xì)胞的凋亡率。轉(zhuǎn)氨酶是機(jī)體糖酵解和氨基酸代謝的關(guān)鍵酶。在人類中，ALT和AST活性較高的一般在肝臟組織中，與此同時(shí)，其他器官例如腎臟、心臟、骨骼肌和胰腺也有較高的ALT和AST活性[17]。而這兩者，尤其是ALT早已經(jīng)用于臨床來作為肝臟損傷的標(biāo)志物之一。一般認(rèn)為轉(zhuǎn)氨酶的升高預(yù)示著細(xì)胞損傷的加深，但也有研究顯示單純轉(zhuǎn)氨酶的升高并不能較準(zhǔn)確的用來判斷肝臟損傷情況[18]，所以本研究結(jié)合細(xì)胞凋亡的檢測(cè)一同判定細(xì)胞的損傷。從細(xì)胞的凋亡率來看，雖然模型組與正常對(duì)照組有明顯差異，但油酸引起細(xì)胞凋亡的程度并不嚴(yán)重，凋亡率最高只有不到4%，且各組之間差異最多也只有不到1%。在5和10 mg/dL UA干預(yù)組中起到了降低脂肪變性細(xì)胞凋亡的作用，但是干預(yù)到72 h時(shí)，這兩個(gè)濃度的尿酸已經(jīng)不再有降低細(xì)胞凋亡的效果，30 mg/dL UA還加重了凋亡的發(fā)生，結(jié)合之前關(guān)于氧化應(yīng)激的研究結(jié)果，30 mg/dL UA很有可能通過加重氧化應(yīng)激來促使細(xì)胞凋亡增加。同時(shí)，在ALT的結(jié)果中也存在和凋亡相似的趨勢(shì)，不過AST的結(jié)果并沒有發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的規(guī)律。在其他學(xué)者對(duì)于尿酸的研究中，早在1988年就有學(xué)者提出5 mg/dL的尿酸，即正常范圍內(nèi)的血尿酸濃度在機(jī)體內(nèi)扮演著抗氧化的角色[19]，而高過正常水平的尿酸就有可能造成機(jī)體細(xì)胞的氧化應(yīng)激。但是通過本次研究我們發(fā)現(xiàn)在已發(fā)生氧化應(yīng)激的細(xì)胞內(nèi)，高于正常血尿酸水平的10 mg/dL濃度依然可以起到抗氧化的作用，甚至20 mg/dL和30 mg/dL的UA在48 h內(nèi)都能緩解由于脂肪變性所造成的凋亡，提示了機(jī)體自身產(chǎn)生的UA和作為干預(yù)劑加入細(xì)胞中的UA對(duì)細(xì)胞可能產(chǎn)生不同的效果，而UA本身對(duì)于細(xì)胞的作用可能也要依據(jù)細(xì)胞或者機(jī)體本身所處的條件而判定。UA在人類進(jìn)化的歷程中曾一度作為抵抗機(jī)體氧化應(yīng)激的重要武器而存在，甚至近些年還有很多研究證明低于5 mg/dL的血UA水平范圍內(nèi)，其變化與許多疾病的死亡率呈負(fù)相關(guān)[20-22]，暗示了UA極有可能是機(jī)體用來對(duì)抗多種疾病產(chǎn)生的氧化應(yīng)激的武器，時(shí)至今日，還未能從機(jī)制的角度證明這一點(diǎn)，但如果被證明，那么同時(shí)可以加重氧化應(yīng)激的尿酸則成為了大自然在人類進(jìn)化過程中射向人類的無心之失。結(jié)合本研究結(jié)果，5 mg/dL和10 mg/dL的UA可能在脂肪變性造成的肝細(xì)胞氧化應(yīng)激中起著抗氧化的作用，以此來保護(hù)細(xì)胞，減少細(xì)胞損傷凋亡，而30 mg/dL的UA可能隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而加重細(xì)胞的氧化應(yīng)激。

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