姜方毅

[摘要] 目的 探討中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）活性在各血液病診斷中的價(jià)值和意義。方法 方便選取130例該院于2015年1月—2017年1月所收治的血液病患者及37名健康人靜脈血制備血涂片，利用Kaplow偶氮偶聯(lián)法行NAP細(xì)胞化學(xué)染色，并利用顯微鏡油鏡對(duì)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞進(jìn)行觀察，記錄觀察結(jié)果。結(jié)果 對(duì)照組不同性別的NAP陽性率（34.78%vs28.57%）及NAP積分[（46.89±23.82）分vs（48.03±22.34）分]比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.241，P>0.05；t=0.236，P>0.05）；研究組患者當(dāng)中，ALL、LR、AA、CLL、MM及PV疾病患者的NAP積分較對(duì)照組明顯更高（t=9.712，P<0.05；t=15.614，P<0.05；t=10.683，P<0.05；t=9.231，P<0.05；t=7.032，P<0.05；t=5.672，P<0.05）；CML、MDS-RAEBT及PNH疾病患者的NAP積分較對(duì)照組明顯更低（t=5.981，P<0.05；t=4.143，P<0.05；t=4.143，P<0.05）；AML疾病患者的NAP積分較對(duì)照組略低[（19.1±1.2）分vs（21.3±0.2）分]，但兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.321，P>0.05）。結(jié)論 NAP活性可有效輔助診斷各血液疾病，并對(duì)不同疾病進(jìn)行鑒別，具較高臨床應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 中性粒細(xì)胞；堿性磷酸酶活性；血液病

[中圖分類號(hào)] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）11（a）-0185-03

[Abstract] Objective To investigate the value and significance of neutrophil alkaline phosphatase （NAP） activity in the diagnosis of various hematological diseases. Methods A total of 130 patients with blood diseases admitted to the hospital from January 2015 to January 2017 and 37 healthy individuals were convenient enrolled in venous blood to prepare blood smears. NAP cytochemical staining was performed using Kaplow azo coupling method. 100 mature neutrophils were observed with a microscope oil mirror and the observations were recorded. Results There was no significant difference in NAP positive rate （34.78% vs 28.57%） and NAP score [（46.89±23.82）points vs （48.03±22.34）points] in the control group （χ2=0.241， P>0.05； t=0.236， P>0.05）； among the study group， the NAP scores of ALL， LR， AA， CLL， MM and PV patients were significantly higher than those of the control group （t=9.712， P<0.05； t=15.614， P<0.05； t=10.683， P<0.05； t=9.231， P<0.05； t=7.032， P<0.05； t=5.672， P<0.05）； NAP scores of patients with CML， MDS-RAEBT and PNH diseases compared with the control group significantly lower （t=5.981， P<0.05； t=4.143， P<0.05； t=4.143， P<0.05）； NAP scores of patients with AML disease were slightly lower than those of the control group [（19.1±1.2）points vs （21.3±0.2）points， but there was no significant difference between the two （t=1.321， P>0.05）. Conclusion NAP activity can effectively assist in the diagnosis of various blood diseases， and identify different diseases， which has high clinical application value.

[Key words] Neutrophils； Alkaline phosphatase activity； Blood diseases

堿性磷酸酶多見于成熟的中性粒細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞及吞噬細(xì)胞當(dāng)中，其他細(xì)胞中的堿性磷酸酶含量較少，即使進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果也多為陰性[1]。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）的活性受細(xì)胞成熟度、功能、病菌種類及感染程度的影響，觀察NAP活性可幫助臨床對(duì)血液病進(jìn)行診斷和鑒別。該案方便選取了該院于2015年1月—2017年1月所收治的130例各血液疾病患者及同期于該院行健康體驗(yàn) 的37名健康患者為對(duì)象進(jìn)行研究，探討了NAP在各血液疾病診斷中的價(jià)值與意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院所收治的血液病患者130例作為研究組，所有患者均依骨髓穿刺涂片細(xì)胞學(xué)檢查、骨髓活檢病理檢查及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查，并結(jié)合臨床參照文獻(xiàn)得以確診，其中男62例，女68例；年齡5～82歲，平均（35.7±12.1）歲；急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）25例，再生障礙性貧血（AA）20例，急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）18例，慢性髓細(xì)胞白血?。–ML）18例，類白血病反應(yīng)（LR）6例，骨髓增生異常綜合征（MDS-RAEBT）12例，真性紅細(xì)胞增多癥（PV）4例，陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）2例，多發(fā)性骨髓瘤（MM）14例，慢性淋巴細(xì)胞性白血?。–LL）11例 。另選同期于該院行正常體檢的健康人37名作為對(duì)照組，其中男23名，女14名；年齡5～79歲，平均（35.2±12.2）歲。兩組患者在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。該研究經(jīng)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知曉該案研究?jī)?nèi)容，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 ①NAP固定液；②NAPⅠ液；③NAPⅡ液；④蘇木素復(fù)染液；⑤儀器：顯微鏡、37℃恒溫水浴箱、電子計(jì)數(shù)器。

1.2.2 方法 利用真空采血法于清晨采集所有研究對(duì)象的空腹靜脈血10 mL，并制備血涂片。采取Kaplow偶氮偶聯(lián)法行NAP細(xì)胞化學(xué)染色，即先于新鮮涂片上滴加固定液，30 s后行水洗并等待風(fēng)干；將NAPⅠ液與NAPⅡ液混合，形成基質(zhì)液，風(fēng)干后的涂片置于基質(zhì)液中，并存放于37℃環(huán)境下0.5 h；連缸取出以流水沖洗數(shù)分鐘后待風(fēng)干；利用蘇木素將風(fēng)干后的涂片再次染色，時(shí)間1～2 min，再以水沖洗待風(fēng)干，之后即可進(jìn)行鏡檢。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

以五級(jí)積分值記錄兩組患者100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞的觀察結(jié)果，依每個(gè)細(xì)胞漿內(nèi)所含顆粒的多少分為5級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：陰性反應(yīng)為0分；胞漿未超過1/2區(qū)域現(xiàn)灰黑色至棕黑色沉淀記為1分；胞漿1/2～3/4區(qū)域現(xiàn)灰黑色至棕黑色沉淀記為2分；胞漿所有區(qū)域均現(xiàn)灰黑色或棕黑色沉淀，但密度較低，記為3分；胞漿所有區(qū)域均現(xiàn)深黑色團(tuán)塊沉淀，且密度較高，甚至覆蓋胞核，記為4分。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

利用 SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示計(jì)量資料，行t檢驗(yàn)，以百分比（%）表示計(jì)數(shù)資料，并利用χ2進(jìn)行檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組不同性別NAP指標(biāo)比較

對(duì)照組37名健康人當(dāng)中，8例男性NAP呈陽性，陽性檢出率為34.78%，4例女性NAP呈陽性，陽性檢出率為28.57%，男性平均NAP積分為（46.89±23.82）分，女性平均NAP積分為（48.03±22.34）分，不同性別NAP陽性率及NAP積分比較均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.236， P>0.05；t=0.041，P>0.05）。男女NAP陽性率及NAP積分比較均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 各血液病患者的NAP積分及其與對(duì)照組的比較

研究組中ALL、LR、AA、CLL、MM及PV疾病患者的NAP積分較對(duì)照組明顯更高（P<0.05）；而CML、MDS-RAEBT及PNH疾病患者的NAP積分較對(duì)照組明顯更低（P<0.05），且MH、CML的NAP積分最低；AML患者的NAP積分較對(duì)照組雖略低，但兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.3 各血液疾病患者LSD和S-N-K多重比較結(jié)果

AA的NAP積分與PNH差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.871；P<0.05）；LR與CML、ALL與AML、MH與MM、CLL與CML的NAP積分比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=16.712，P<0.05；t=15.123；P<0.05；t=4.332；P<0.05；t=57.874；P<0.05）。

3 討論

很多血液疾病在病情早期時(shí)因無典型性臨床癥狀，但行血液指標(biāo)檢測(cè)時(shí)其各項(xiàng)指標(biāo)的水平又存在明顯差異，加大了臨床診斷的困難度，致臨床易出現(xiàn)誤診和漏診現(xiàn)象[2]。NAP是一種存在于中性粒細(xì)胞中的標(biāo)志性的酶，其多見于成熟的中性粒細(xì)胞當(dāng)中，是由胞質(zhì)所含特殊顆粒所釋放的一種堿性條件，可催化各類醇及酚的單磷酸脂水解[3]。NAP活性在很大程度上可反映粒細(xì)胞的成熟度及功能，同時(shí)，其也受感染程度、病菌種類的影響[4]。若中性粒細(xì)胞被活化，NAP陽性率及積分會(huì)明顯升高[5]。如遇嚴(yán)重細(xì)菌感染，LR、AA、ALL、CML的NAP活性會(huì)發(fā)生急性變化[6]，PV、MM疾病發(fā)生后， NAP活性會(huì)明顯增強(qiáng)，而CML、MH、MDS-RAEBT及DNH等疾病中的NAP活性會(huì)有所下降。

該案觀察并對(duì)比了130例各血液病患者及37例健康人的NAP活性檢測(cè)結(jié)果，研究結(jié)果顯示，健康人不同性別的NAP陽性率（34.78%vs28.57%）及NAP積分[（46.89±23.82）分vs（48.03±22.34）分]比較勻差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），此研究結(jié)果與任文平等人[7]的研究結(jié)果（34.80%vs30.15%）、（47.10±23.75）分vs（48.80±20.58）分]基本保持一致，提示正常人NAP陽性率及NAP積分與性別無關(guān)。對(duì)比兩組研究對(duì)象的NAP觀察結(jié)果，研究組中ALL、LR、AA、CLL、MM及PV等疾病患者的NAP積分較對(duì)照組明顯更高（P<0.05），而CML、MH、MDS-RAEBT及PNH疾病患者的NAP積分較對(duì)照組明顯更低（P<0.05）。由此可以看出，NAP活性可有效反應(yīng)患者血液疾病的發(fā)生，有助于提高臨床診斷的正確性[8]。另，對(duì)研究組內(nèi)不同血液疾病患者的NAP檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比顯示，AA與PNH、LR與CML、ALL與AML、MH與MM、CLL與CML的NAP積分比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。此提示，針對(duì)早期無典型臨床癥狀，或是臨床癥狀相似的血液病，可有采取觀察NAP活性來對(duì)疾病進(jìn)行鑒別。如，針對(duì)AA與PNH，在疾病發(fā)生時(shí)，AA的NAP活性會(huì)明顯升高，且患者貧血程度越嚴(yán)重，其NAP積分就越高，即使患者病情有所緩解，其NAP積分也很難再恢復(fù)至正常水平；而PNH患者的NAP積分則會(huì)下降[9-10]。

綜上所述，NAP活性可有效輔助診斷血液病，并鑒別各血液病類型，具較高臨床應(yīng)用價(jià)值。

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（收稿日期：2018-08-09）