張從文 李紅梅

摘 要：該研究建立了液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定蔬菜中滅蠅胺殘留量的實(shí)驗(yàn)方法。色譜柱采用Agilent SB-C18柱（2.1×50mm），以乙腈和0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相，樣品經(jīng)過(guò)提取凈化柱洗脫濃縮后，采用液相串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定蔬菜中滅蠅胺殘留量，方法線性范圍在10～100ng/mL，最低檢出限為1.0μg/kg，加標(biāo)回收率在75.2%～82.4%。該方法適用于蔬菜中滅蠅胺殘留量的定量分析。

關(guān)鍵詞：滅蠅胺；高效液相色譜；蔬菜；殘留量

中圖分類(lèi)號(hào) TS255.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2018）22-0091-02

滅蠅胺，CAS NO.：66215-27-8，白色或淡黃色固體，熔點(diǎn)220～222℃，為1，3，5，-三嗪類(lèi)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，對(duì)雙翅目幼蟲(chóng)有特殊活性，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)誘使昆蟲(chóng)在形態(tài)上發(fā)生畸變，因而常用于防治蔬菜和花卉上的美洲斑潛蠅[1-3]。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763-2016[4]《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留量》規(guī)定黃瓜中最大限量值為1mg/kg，其他豆類(lèi)蔬菜中最大限量值為0.5mg/kg。本文采用液質(zhì)串聯(lián)4級(jí)桿聯(lián)用檢測(cè)蔬菜中滅蠅胺的殘留量，方法回收率較高，適用于蔬菜中滅蠅胺殘留量的測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器 滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所）；蔬菜（超市購(gòu)買(mǎi)）；甲醇、乙腈（色譜純）（美國(guó)天地）；超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）；Cleanert SCX-SPE固相萃取柱（天津博納艾杰爾科技有限公司）；美國(guó)安捷倫1290-6410B串聯(lián)4級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18柱（2.1×50mm）；流動(dòng)相：乙腈∶0.1%甲酸水溶液=20∶80，進(jìn)樣量1μL；流速0.2mL/min。

1.2.2 質(zhì)譜條件 LC-MS-MS接口為電噴霧接口（ESI）正離子模式，離子檢測(cè)模式為選擇離子掃描模式（SIM），選擇監(jiān)測(cè)滅蠅胺的準(zhǔn)分子離子峰及子離子峰，即m/z 167.0母離子和m/z125.0子離子。電噴霧壓力4500v，噴霧氣和干燥氣為氮?dú)?，干燥氣流速?1L/min，離子源溫度：350℃。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用乙腈溶解后定容至100mL容量瓶中，搖勻，該溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100μg/mL）。稀釋1000倍得到100ng/mL的溶液，同種方法依次用乙腈稀釋定容為10，20，40，80，100ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.3 樣品制備 稱(chēng)取20g搗碎樣品于離心管中，加入40mL乙腈，用高速組織搗碎機(jī)在15000r/min，勻漿提取1min，加入5mg氯化鈉，再勻漿提取1min，在3800r/min離心5min，取上清液20mL，在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1mL，經(jīng)過(guò)SCX-SPE凈化柱凈化，旋轉(zhuǎn)濃縮后，用乙腈+水（3+2）定容至5mL，用0.2μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相選擇 實(shí)驗(yàn)中比較了不同流動(dòng)相對(duì)分離度、峰形等的影響。發(fā)現(xiàn)在水相中加入0.1%的甲酸會(huì)提高離子化效率，滅蠅胺信噪比提高3倍，所以選擇了0.1%的甲酸溶液作為流動(dòng)相。另外，采取乙腈∶0.1%甲酸水=60∶40，乙腈∶0.1%甲酸水=50∶50，乙腈∶0.1%甲酸水=20∶80這3個(gè)梯度，乙腈比例20%時(shí)候峰形最好，所以實(shí)驗(yàn)中采用乙腈∶0.1%甲酸水=20∶80作為此次實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相體系。

2.2 質(zhì)譜條件的選擇 滅蠅胺分子式C6H10N6，相對(duì)分子質(zhì)量166.18，從其分子結(jié)構(gòu)看在ESI源中容易得到1個(gè)氫原子而帶正電荷，因而選擇ESI源正離子模式對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。滅蠅胺質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1，其分子中含有1個(gè)三元碳環(huán)，在雙重4級(jí)桿中容易被轟擊丟失掉，因而對(duì)其準(zhǔn)分子離子峰（m/z167.0）和子離子峰（m/z125.0）進(jìn)行選擇離子掃描，采用外標(biāo)法定量。

2.3 樣品前處理 實(shí)驗(yàn)中比較了NH2-SPE萃取柱、PEP-SPE萃取柱、MCX-SPE萃取柱，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)NH2-SPE萃取柱、PEP-SPE萃取柱處理的滅蠅胺，雜質(zhì)比較多，處理不干凈，回收率比較低。經(jīng)過(guò)MCX-SPE柱子處理后，效果比較好，故本實(shí)驗(yàn)選用MCX-SPE固相萃取柱。

2.4 線性范圍、回歸方程及檢出限 吸取滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)系按照1.2.1條件進(jìn)行檢測(cè)，以峰面積為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程為：y=2313.0586x+22434.98，R2=0.998。阿力甜在10～100ng/mL線性關(guān)系良好。并且以信噪比等于3為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)得阿力甜的檢出限為1μg/kg。

2.5 方法精密度、回收率及檢出限 選擇中高低3個(gè)濃度，每個(gè)濃度測(cè)定6個(gè)樣品，按照1.2.3樣品制備樣品溶液，液質(zhì)聯(lián)用儀外標(biāo)法測(cè)定加標(biāo)量，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，加標(biāo)回收率在75.2%～82.4%，標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.23%～9.95%，方法的回收率和精密度較好，能夠達(dá)到分析檢測(cè)要求。

2.6 樣品測(cè)定 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)建立的方法對(duì)蔬菜進(jìn)行檢測(cè)分析，滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖和樣品中滅蠅胺圖譜見(jiàn)圖3、圖4，滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間在1min左右。從圖3、圖4可以看出，樣品中滅蠅胺能夠很好地被分離，基本無(wú)干擾峰，且分析時(shí)間很短，只需5min就能完成1個(gè)樣品的檢測(cè)，說(shuō)明方法有較好的分離度。

3 結(jié)論

本研究建立了蔬菜中滅蠅胺殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)分析方法。樣品經(jīng)過(guò)提取和MCX-SPE柱子凈化后，HPLC-MS/MS檢測(cè)，滅蠅胺在蔬菜中平均加標(biāo)回收率在75.2%～82.4%，RSD在3.23%～9.95%，最低檢出限位1μg/kg。該方法可以滿(mǎn)足蔬菜中滅蠅胺殘留量的檢測(cè)分析要求。

參考文獻(xiàn)

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[2]董嬌，曹寧陽(yáng)，耿鑫.全自動(dòng)固相萃取-高效液相色譜測(cè)定蔬菜中滅蠅胺殘留[J].現(xiàn)代食品，2018，（4）：94-98.

[3] 宋衛(wèi)國(guó)，饒欽雄，陳珊珊，等.同位素內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)滅蠅胺及其代謝物三聚氰胺在雙孢蘑菇子實(shí)體和覆土中的殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2018，20（3）：363-369.

[4]中國(guó)人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 2763-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量[S].

（責(zé)編：張宏民）