沈瑩 朱晨

（正大青春寶藥業(yè)有限公司研究院 浙江 杭州 310023）

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在藥學(xué)分析中采用高效液相色譜法對藥物進(jìn)行分析與質(zhì)量控制是常用的重要技術(shù)。高效液相色譜法是在氣相色譜法的理論基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化的，其基本原理是相同的，主要通過高壓電流將流動(dòng)相進(jìn)行輸送，流動(dòng)相在通過采用微小顆粒作為填充物的固定相是速度更快，故而比氣相色譜更加高效。本文章對采用高效液相色譜法技術(shù)聯(lián)合其他檢測儀器對藥物進(jìn)行分析與質(zhì)量控制進(jìn)行介紹。

1.與質(zhì)譜儀檢測結(jié)合使用

質(zhì)譜儀檢測器（MSD），其擁有良好的選擇性、特異性以及極其的靈敏度，因其有超高的靈敏度，可以對藥物進(jìn)行0.01%至1%含量分析（即微量、痕量分析）。將高效液相色譜儀的高效化、高自動(dòng)化以及便于操作的特點(diǎn)MSD能夠?qū)⑽镔|(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)定性分析的特點(diǎn)進(jìn)行結(jié)合使用，可以對藥物進(jìn)行高效率、快速地進(jìn)行譜指紋圖譜分析，兩種儀器的結(jié)合使用可以大幅節(jié)省時(shí)間，在糖尿病以及口腔衛(wèi)生等疾病方面有著重要運(yùn)用地位。將MSD與高效液相色譜儀進(jìn)行結(jié)合使用，極大減輕了操作人員的操作難度，方法簡單，容易上手，對操作人員的要求較低且得出的穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，在相關(guān)的監(jiān)管部門、科研機(jī)構(gòu)以及高校實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行相關(guān)藥物的測定提供了較好的設(shè)備[1]。

2.與電化學(xué)檢測儀結(jié)合使用

對具有電活性的物質(zhì)如二茂鐵、蒽醌、吡啶釕等進(jìn)行測定時(shí)通常采用電化學(xué)檢測器（ECD）進(jìn)行測定。ECD有庫倫檢測器、電導(dǎo)檢測器等，其中 極譜檢測器、庫侖檢測器、安培檢測器這三種被稱為伏安檢測器。ECD對所有具有可以發(fā)生氧化還原反應(yīng)的物質(zhì)都可以進(jìn)行測定，其原理是被檢測物質(zhì)在經(jīng)過電極板時(shí)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，即電極反應(yīng)，發(fā)生電子遷移，根據(jù)法拉第定律可以算出被測物質(zhì)濃度。ECD對物質(zhì)的檢查具有超高的靈敏度，非常適合對物質(zhì)進(jìn)行高精確度的測量，但是也是由于其靈敏度高，在檢測時(shí)較易于被各種物質(zhì)干擾，特異性較差，且兩端電極板損耗較快，對流動(dòng)相的溫度和流速的穩(wěn)定具有較高要求。將ECD與高效液相色譜儀進(jìn)行結(jié)合使用，對具有氧化還原反應(yīng)的藥物如硫酸阿奇霉素等進(jìn)行痕量分析，獲得很高的精確結(jié)果，對大多數(shù)具有氧化還原的藥物都可以進(jìn)行監(jiān)測，運(yùn)用非常廣泛。

3.與蒸發(fā)光散射檢測器結(jié)合使用

對于沒有發(fā)色團(tuán)物質(zhì)如聚合物、脂類等進(jìn)行檢測時(shí)，通常采用蒸發(fā)光散射檢測器ELSD進(jìn)行測定。由于有些藥物不能將紫外線進(jìn)行吸收，不能用紫外或者熒光檢測器進(jìn)行監(jiān)測，而HPLC可以對這些藥物進(jìn)行監(jiān)測，其原理是將檢測物質(zhì)氣化成霧溶膠，然后進(jìn)行檢測而為被蒸發(fā)的物質(zhì)在光散射池中也被檢測。該檢測方法可以對未知物質(zhì)或者樣品純度進(jìn)行檢測，但是其靈敏度不高且操作較為復(fù)雜，對操作人員的操作要求較高，這也只HPLC在上個(gè)世紀(jì)八十年代問世以來普及使用度不高的原因之一[2]?；谠搩x器的工作原理，HPLC可以對很多物質(zhì)如碳水化合物、氨基、脂肪這三大營養(yǎng)物質(zhì)以及其他大多數(shù)衍生物的有機(jī)物進(jìn)行測定。已有研究人員采用HPLC對三七皂苷進(jìn)行R1的測定，結(jié)果令人驚喜。將ELSD與高效液相色譜法進(jìn)行結(jié)合使用，可以對檢測無進(jìn)行較好的分離檢測，并且結(jié)果準(zhǔn)確且干擾因素極少，在檢測過程中使用該方法可以較好地縮短檢測時(shí)間，有效提高了檢測人員以及科研人員的檢查效率。

4.與示差折光檢測器結(jié)合使用

示差檢測器（RID）可以對形成透明介質(zhì)的物質(zhì)進(jìn)行測定。其原理是利用光在不同折射率的穿過時(shí)會(huì)發(fā)生折射來進(jìn)行設(shè)置的。在對藥物樣品進(jìn)行檢測時(shí)，當(dāng)流動(dòng)相與藥物樣品被光經(jīng)過時(shí)發(fā)生折射因而產(chǎn)生不同的折射率，從而可以被儀器檢測出來[3]。由于不同的折射率可以表示出不同的樣品濃度，從而可以將樣品中被檢測物質(zhì)濃度測試出來，這種檢測儀器不可以進(jìn)行梯度脫洗，但通常無法進(jìn)行痕量分析，對洗脫時(shí)環(huán)境溫度以及流動(dòng)相流動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的波動(dòng)敏感度較大。但是其可以對糖類進(jìn)行快速簡便且準(zhǔn)確性較高的檢測出來，并且可以在檢測時(shí)對藥物檢測成分進(jìn)行實(shí)時(shí)的檢測，在某些檢測過程中是極其重要且必要的。

5.與熒光檢測器結(jié)合使用

對能夠產(chǎn)生熒光的化合藥物進(jìn)行檢測時(shí)，通常使用熒光檢測器（FLD）進(jìn)行檢測。當(dāng)藥物被紫外光照射后會(huì)產(chǎn)生熒光，而熒光檢測器可將其檢測出來，利用該原理對藥物展開檢測。FLD具有高特異性、高靈敏度的特點(diǎn)[4]。FLD可以對大多數(shù)的有機(jī)物特別是芳香烴及其衍生物進(jìn)行痕量分析，該儀器也可以對發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后能有熒光的反應(yīng)藥物進(jìn)行測定。這種儀器與高效液相色譜結(jié)合使用時(shí)可以對熒光物質(zhì)快速、準(zhǔn)確的進(jìn)行檢測。

6.結(jié)束語

高效液相色譜法與不同的檢測儀聯(lián)合使用時(shí)會(huì)有不同的檢測效果，根據(jù)不同的檢測精度要求、檢測人員操作素養(yǎng)、檢測經(jīng)費(fèi)、檢測藥物成分的差異等實(shí)際情況而采取不同的檢測儀器和高效液相色譜使用。對于某些藥物可以使用多種不同的檢測儀器時(shí)，需根據(jù)實(shí)際情況而采取操作簡便、精度高且花費(fèi)最少的儀器進(jìn)行檢測。隨著社會(huì)的發(fā)展，針對不同的藥物有著許多不同的檢測方法，不同的研究機(jī)構(gòu)或監(jiān)測部門有不同的檢測標(biāo)準(zhǔn)和要求，結(jié)合高效液相色譜法的精度且易于操作的優(yōu)勢與各種儀器相使用，利用兩者的優(yōu)勢進(jìn)行互補(bǔ)，以此獲得符合相關(guān)檢測的標(biāo)準(zhǔn)要求，所得結(jié)果更符合實(shí)際情況。