閔安如 葉曉峰

（武警8690部隊(duì)醫(yī)院普外科 江蘇 宜興 214200）

在我國(guó)，原發(fā)性肝癌與乙肝病毒感染密切相關(guān)，80%的患者伴HBV感染，HBV感染者發(fā)生HCC的危險(xiǎn)性是無(wú)感染者的200余倍。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)HBx基因編碼產(chǎn)物x蛋白是HBV中惟一具有多種調(diào)控功能的病毒蛋白質(zhì)，通過(guò)反式激活癌基因等機(jī)制促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)生。

研究還表明，HBx通過(guò)多種機(jī)制促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，其機(jī)制歸納為四個(gè)方面：一是改變細(xì)胞與ECM間黏附機(jī)制，二是促進(jìn)ECM降解，三是提高肝癌細(xì)胞侵襲運(yùn)動(dòng)能力，四是誘導(dǎo)腫瘤血管生成。通過(guò)對(duì)上述步驟的調(diào)控，大大增強(qiáng)了肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力，直接導(dǎo)致肝癌患者的不良預(yù)后。

1.黏附機(jī)制的改變：

1.1 Liu等1發(fā)現(xiàn)HBx激活DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1的活性使上皮細(xì)胞鈣粘蛋白（E-cadherin）啟動(dòng)子區(qū)甲基化，E-cadherin表達(dá)被抑制導(dǎo)致細(xì)胞間的黏附作用減弱，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的移動(dòng)。進(jìn)一步研究證實(shí)，抑制E-cadherin的核心在HBx激活區(qū)的Lys-130，E-cadherin啟動(dòng)子甲基化后其表達(dá)受抑制，使腫瘤細(xì)胞從原來(lái)位置與周圍細(xì)胞脫離并遷移到外界，促進(jìn)了肝癌的轉(zhuǎn)移。

1.2 Lara-Pezzi E2等實(shí)驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)染HBx的肝癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）黏附力下降，整合素亞基α5的表達(dá)被抑制，激活的整合素亞基β1被重新分配至突出的偽足頂部，從而改變細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附機(jī)制，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的遷移。

2.ECM的降解：

2.1 HBx通過(guò)誘導(dǎo)膜基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MT1-MMP）和環(huán)氧合酶-2（COX-2）的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲。MMPS在細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）降解中起重要作用，而ECM的降解對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移非常重要。

臨床數(shù)據(jù)表明，HBx蛋白與膜-基質(zhì)金屬蛋白酶1（MT1-MMP）和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）的表達(dá)增強(qiáng)密切相關(guān)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明，HBx上調(diào)了MT1-MMP，而這種酶有誘導(dǎo)MMP-2的傾向。HBx通過(guò)上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶，從而破壞細(xì)胞外基質(zhì)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲力。

2.2 Chan CF等研究提示，HBx陽(yáng)性的肝細(xì)胞癌組織中NFкB活性提高，導(dǎo)致其下游靶標(biāo)——尿激酶血漿纖維蛋白溶解酶原激活物（urokinase plasminogen activator，uPA）過(guò)表達(dá)，而uPA可將纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，促進(jìn)了細(xì)胞外基質(zhì)的降解，增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞的侵襲力。

3.細(xì)胞侵襲運(yùn)動(dòng)

3.1 影響癌細(xì)胞的侵襲性有很多因素，其中癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力是關(guān)鍵因素之一，癌細(xì)胞脫離原發(fā)病灶，侵襲周邊正常組織，穿入穿出血管，運(yùn)動(dòng)能力是必不可少的。許多實(shí)驗(yàn)均提示：癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力與侵襲性之間有密切關(guān)系，高侵襲高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞往往具有較強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力。許多已知的生長(zhǎng)因子既能影響細(xì)胞的生長(zhǎng)又能刺激細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，故細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和生長(zhǎng)不是完全獨(dú)立的。歐迪鵬等3采用人肝CCL13（Chang Liver）細(xì)胞系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：同一起源的細(xì)胞株，在轉(zhuǎn)染HBX基因后，其劃痕愈合的運(yùn)動(dòng)能力較未轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞明顯增強(qiáng)，體外的侵襲力也增強(qiáng)，生長(zhǎng)曲線細(xì)胞增殖及集落形成加快，反映了癌細(xì)胞增殖能力與侵襲性之間的關(guān)系。因此，可能通過(guò)測(cè)定癌細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線、集落形成率和運(yùn)動(dòng)性等項(xiàng)指標(biāo)來(lái)間接判斷癌細(xì)胞的侵襲性。

HBx誘導(dǎo)肝細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)表型轉(zhuǎn)化，通過(guò)使細(xì)胞表面黏附分子受體CD44的極化來(lái)促進(jìn)細(xì)胞伸出偽足，使細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白重排來(lái)改變細(xì)胞形態(tài)，從而促進(jìn)細(xì)胞移動(dòng)；應(yīng)用單克隆抗體阻斷CD44能破壞表達(dá)HBx的細(xì)胞對(duì)透明質(zhì)酸與生長(zhǎng)因子的反應(yīng)。

3.2 研究還表明，轉(zhuǎn)染HBX基因的HepG2細(xì)胞上調(diào)了細(xì)胞運(yùn)動(dòng)關(guān)鍵蛋白R(shí)hoC（Ras—related GTPase C）的表達(dá)，RhoC是Rho GTPases的一個(gè)成員，屬于Ras超家族，參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、增殖和肌動(dòng)蛋白骨架的調(diào)節(jié)，與肝癌的轉(zhuǎn)移密切有關(guān)。

3.3 HBx可能通過(guò)鈣蛋白酶小亞基1（Capn4）加強(qiáng)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。通過(guò)在肝細(xì)胞癌株HepG2用螢光素酶報(bào)告基因測(cè)定，HBx增強(qiáng)了Capn4啟動(dòng)子的活性并上調(diào)了Capn4在信使RNA和蛋白水平的表達(dá)，并認(rèn)為NF-kappaB和HBx介導(dǎo)的Capn4激活相聯(lián)系。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)證實(shí)，HBx通過(guò)NF-kappaB/p65復(fù)合體上調(diào)了Capn4的表達(dá)從而增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞的遷移能力。

4.腫瘤血管生成：

4.1 促進(jìn)血管生成因子HIF、VEGF、COX-2的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤血管生成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)，腫瘤維胞分泌VEGF致腫瘤血管形成，為腫瘤的生長(zhǎng)提供血供和營(yíng)養(yǎng)，腫瘤細(xì)胞脫落，進(jìn)入血管，表現(xiàn)出轉(zhuǎn)移特征。

陶小紅等4自行構(gòu)建了表達(dá)HBx的細(xì)胞，并選擇血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作為檢測(cè)指標(biāo)，排除缺氧因素，發(fā)現(xiàn)HBx可明顯激活VEGF，參與了HCC的侵襲和轉(zhuǎn)移。其他實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HBx、VEGF及血管內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原（CD34）表達(dá)，光鏡下記錄微血管計(jì)數(shù)（MVD），證實(shí)HBx和VEGF廣泛表達(dá)于HBV相關(guān)性肝癌組織中，二者呈正相關(guān)，HBx通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)在HBV相關(guān)性肝癌組織血管生成及轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用。

那么HBx是怎樣通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)在HBV相關(guān)性肝癌組織血管生成及轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用?研究發(fā)現(xiàn)HBx有可能通過(guò)缺氧誘導(dǎo)因子-1a（HIF-1a）作用于下游基因VEGF；并發(fā)現(xiàn)HBx有可能通過(guò)穩(wěn)定HIF-1a而誘導(dǎo)腫瘤血管生成；HIF-la能通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移來(lái)誘導(dǎo)腫瘤血管生成；有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，HBx可上調(diào)HIF-1a和Cox-2，而在HBx到VEGF這條通路中HBx、HIF-1a、Cox-2及VEGF或其他因子的作用機(jī)制還沒(méi)有完全明確。

展望：Hbx蛋白作為一種多功能的病毒蛋白.從多個(gè)方面、多種途徑促使HCC的發(fā)生與發(fā)展。隨著對(duì)x蛋白功能和作用機(jī)制研究的斷深入，其在HBV相關(guān)的HCC發(fā)病中的作用將備受重視。一方面我們可以通過(guò)檢測(cè)x蛋白以便對(duì)HCC患者進(jìn)行早期診斷.另一方面x蛋白作為HBV基因治療理想的靶蛋白，可通過(guò)x蛋白特異性干擾RNA來(lái)降低病毒的RNA和蛋白水平.阻止或降低病毒復(fù)制.或通過(guò)阻止、緩解x蛋白對(duì)細(xì)胞的毒性作用，達(dá)到治療目的。