文亦磊 黃克強(qiáng) 黃羽

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 廣西 南寧 530023）

消瘤湯是由黨參、半枝蓮、白英等中藥配伍組成的有效抗腫瘤復(fù)方制劑，通過(guò)其固本培元、解毒利濕、健脾益氣等功效發(fā)揮多層次、多方位的調(diào)整作用，對(duì)腫瘤有較好的治療及輔助治療效果[1]。張莉、逄艷等人的研究顯示[2-3]，消瘤湯能夠通過(guò)天然抗腫瘤成分或免疫調(diào)節(jié)作用直接或間接抑制乳腺癌及肺癌細(xì)胞的增殖。本研究使用MTT法觀察消瘤湯促進(jìn)胃癌細(xì)胞株SGC7901凋亡的情況，為后續(xù)深入研究其抗腫瘤分子機(jī)制和信號(hào)通路打下基礎(chǔ)。

1.材料與方法

1.1 藥物

按照1995年國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)采用黨參、半枝蓮、白花蛇舌草、白英、龍葵等制備消瘤湯（濃度3.5g/ml），實(shí)驗(yàn)前再根據(jù)需要將其稀釋調(diào)整為10μg/ml（低劑量）、50μg/ml（中劑量）、100μg/ml（高劑量），5℃環(huán)境下保存。

1.2 細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)

SGC7901胃癌細(xì)胞株購(gòu)自上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)（1640培養(yǎng)基+37℃+5% CO2），實(shí)驗(yàn)細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

1.3 主要試劑及設(shè)備

MTT（北京華越洋）；胰蛋白酶（北京華越洋）；無(wú)錫華衛(wèi)酶標(biāo)儀；湘智低溫離心機(jī)；無(wú)錫一凈超凈工作臺(tái)；上海躍進(jìn)恒溫培養(yǎng)箱。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

取出處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的SGC7901細(xì)胞，使用胰蛋白酶收集細(xì)胞。將收集到的細(xì)胞進(jìn)行濃度調(diào)整，調(diào)整為1×105個(gè)/ml，在3塊96孔板上進(jìn)行細(xì)胞接種，每塊96孔板上都分4組（低劑量組、中劑量組、高劑量組、對(duì)照組），每組接種8個(gè)孔，每孔接種細(xì)胞約1×104個(gè)。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，棄去上清液，其中3個(gè)組加入不同濃度的含培養(yǎng)基的消瘤湯：10μg/ml（低劑量組）、50μg/ml（中劑量組）、100μg/ml（高劑量組），第4組對(duì)照組只加入培養(yǎng)基。3塊96孔板在相同環(huán)境下分別培養(yǎng)24、48、72 h，然后加入20μl MTT溶液(5mg/ml)，再孵育4h，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，通過(guò)二甲基亞砜和振蕩器的處理，最后在酶標(biāo)儀上進(jìn)行測(cè)試570nm的吸光值。胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=（對(duì)照組平均吸光值-不同濃度組平均吸光值）/對(duì)照組平均吸光值×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次研究中，針對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

實(shí)驗(yàn)中可以發(fā)現(xiàn)消瘤湯的確具備抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡的作用，這主要是在3個(gè)不同濃度的消瘤湯藥物組中，在3個(gè)不同的時(shí)間段內(nèi)，消瘤湯都對(duì)胃癌細(xì)胞產(chǎn)生了一定的抑制作用。其中，消瘤湯在高劑量（100μg/ml）條件下作用72h，對(duì)胃癌細(xì)胞抑制效果最明顯，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳細(xì)內(nèi)容如下分析：

研究中消瘤湯高劑量組、消瘤湯中劑量組、消瘤湯低劑量組以及對(duì)照組的培養(yǎng)時(shí)間分別為24h，48h，72h，且都是8例數(shù)據(jù)，通過(guò)研究可知：

首先，培養(yǎng)24小時(shí)后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.491±0.176，抑制率為5.75%，t值△為0.899，P值△＞0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.513±0.234，抑制率為4.36%，t值△為0.600，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.518±0.196，抑制率為4.04%，t值△為0.605，P值△＞0.05；

對(duì)照組吸光度為1.582±0.226；

其次，培養(yǎng)48小時(shí)后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.452±0.189，抑制率為9.31%，t值△為1.544，P值△＞0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.471±0.221，抑制率為8.12%，t值△為1.242，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.499±0.236，抑制率為6.34%，t值△為0.939，P值△＞0.05；

對(duì)照組吸光度為1.601±0.197；

第三，培養(yǎng)72小時(shí)后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.423±0.196，抑制率為11.72%，t值△為2.040，P值△＜0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.459±0.187，抑制率為9.49%，t值△為1.694，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.482±0.213 ，抑制率為8.06%，t值△為1.337，P值△＞0.05；

對(duì)照組吸光度為1.612±0.174。

△與對(duì)照組比較，72h中的消瘤湯高劑量組的吸光度存在差異性，具備研究意義。

3.討論

消瘤湯由黨參、半枝蓮、白花蛇舌草、白英、龍葵等藥物配伍而成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、去毒利濕等功效，之前的一些研究顯示，消瘤湯在乳腺癌、肺癌等腫瘤中能發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡的作用。本研究提示消瘤湯亦能通過(guò)其復(fù)方藥物中的天然抗腫瘤成分對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞發(fā)揮抑制作用。其中消瘤湯高劑量組在作用72h后，對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制效果最明顯，但消瘤湯是通過(guò)何種信號(hào)通路和哪些關(guān)鍵基因蛋白發(fā)揮其促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡的作用，尚待進(jìn)一步研究。

[1]丁艷蕊，張喆，劉建國(guó)，孫勇，朱銳.消瘤湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝癌大鼠肝臟血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合研究，2009，1(3):133-136.

[2]張莉，張仲海，徐勤，楊趕梅，張子理，甘潔文.扶正消瘤湯對(duì)乳腺癌患者生存質(zhì)量及免疫功能影響臨床研究[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2008，24(8)：482-483.

[3]逄艷，趙美蓉，李學(xué)軍.消瘤湯降低中晚期非小細(xì)胞肺癌化療不良反應(yīng)的臨床觀察[J].山東中醫(yī)雜志，2011，30(6)：383-384.