戴 軍，閔奇萍，朱傳武，胥 萍

(江蘇省蘇州市第五人民醫(yī)院 215000)

作為一種以肺部彌漫性纖維化為主的全身性疾病，長時間吸入游離二氧化硅粉塵是矽肺發(fā)生的主要原因，易引發(fā)肺結(jié)核等多種并發(fā)癥，加重患者病情發(fā)展，影響患者預(yù)后[1]。矽肺發(fā)病早期，機(jī)體對二氧化硅的刺激具有較高的敏感性，易引發(fā)較為強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，持續(xù)、過度激活單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，增加致纖維化因子及細(xì)胞因子分泌量，引發(fā)肺組織損傷及纖維化，進(jìn)而影響患者肺功能[2]。因此，及時采取有效措施診斷并實施有效的治療方式可有效改善患者預(yù)后。自體免疫細(xì)胞(CIK)治療是目前治療矽肺的方法，可有效改善患者病情，故尋找有效的診斷方法是目前研究的重點問題[3]。本研究探討白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在矽肺患者體內(nèi)的表達(dá)及其在CIK治療后的水平變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月至2016年12月在本院確診的職業(yè)性矽肺1期患者49例為觀察組，均符合《塵肺病診斷標(biāo)準(zhǔn)》[4]中矽肺的高千伏胸片診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除惡性腫瘤、風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)、1型/2型糖尿病、原發(fā)性高血壓及冠狀動脈性心臟病者。并選擇同期49例體檢健康者為對照組。對照組：男45例，女4例；年齡50～71歲，平均(59.23±4.91)歲。觀察組：男48例，女1例；年齡50～73歲，平均(59.27±4.94)歲。兩組研究對象年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已通過本院倫理委員會審核。

1.2方法 (1)CIK治療：從患者外周血中采集單個核細(xì)胞，在體外經(jīng)抗CD3單抗(CD3mAb)、干擾素(IFN)-γ及IL-1α、IL-2等多種細(xì)胞因子刺激、增殖、培養(yǎng)，達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)后，再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)[5]。在本次研究中，由于CIK治療的部分項目為完全自費，且金額較大，故在取得患者知情同意后，實際只成功開展了3例。(2)細(xì)胞因子檢測：在含有乙二胺四乙酸的干燥試管中放置兩組研究對象5 mL空腹外周靜脈血，混勻。離心(2 500 r/min)10 min，取上清液存儲于-80 ℃環(huán)境下。使用美國R&D公司提供的試劑盒及美國Biotek公司生產(chǎn)的酶標(biāo)儀及洗板機(jī)通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測量IL-6、IL-8水平，所有操作均嚴(yán)格根據(jù)操作說明進(jìn)行；使用德國西門子公司immulite 1000 化學(xué)發(fā)光儀及試劑盒，通過免疫熒光法檢測TNF-α水平[6]。(3)采用意大利科時邁公司肺功能儀，型號Pony FX，測量兩組研究對象用力肺活量(FVC)、1秒用力呼氣量(FEV1)，并計算FEV1/FVC[7]。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，非正態(tài)分布的計量資料以M(P25～P75)表示，組間比較采用秩和檢驗；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組研究對象IL-6、IL-8、TNF-α水平及肺功能比較 與對照組比較，觀察組IL-6、IL-8、TNF-α水平均較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；觀察組FVC、FEV1、FEV1/FVC指標(biāo)均較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2CIK治療前后患者IL-6、IL-8、TNF-α水平及肺功能變化 3例矽肺1期患者經(jīng)CIK治療后IL-6、IL-8、TNF-α水平有明顯改善，肺功能較前明顯好轉(zhuǎn)。由于本次試驗樣本量少，現(xiàn)作個案報告。見表2。

表1 兩組研究對象IL-6、IL-8、TNF-α水平及肺功能對比[M(P25～P75)]

表2 接受CIK治療的3例患者在治療前后IL-6、IL-8、TNF-α和肺功能對比

3 討 論

矽肺是一種較為嚴(yán)重的塵肺類型，具有較高的發(fā)病率，以肺間質(zhì)改變?yōu)橹饕卣?，二氧化硅含量較為豐富的粉塵為其發(fā)生的主要原因[8]。雖然很早之前矽肺就被發(fā)現(xiàn)，但因其形成機(jī)制較為復(fù)雜，目前仍存在較大的爭議。脂質(zhì)過氧化學(xué)說、炎癥刺激學(xué)說、細(xì)胞基質(zhì)學(xué)說、細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)學(xué)說等是目前公認(rèn)的矽肺發(fā)生機(jī)制，但均難以完整闡述矽肺的機(jī)制，故多認(rèn)為是多種因素共同作用的結(jié)果[9-10]。在矽結(jié)節(jié)和纖維化的形成過程中，將激活肺泡巨噬細(xì)胞，之后在多種炎癥介質(zhì)的作用下，將促進(jìn)致纖維化因子及細(xì)胞因子釋放，造成重構(gòu)肺組織結(jié)構(gòu)，最終形成肺間質(zhì)纖維化[11]。而在此過程中炎癥介質(zhì)起到了較為重要的作用，故在矽肺患者診斷中檢測炎癥介質(zhì)有助于判斷患者病情。

本研究結(jié)果顯示，觀察組IL-6、IL-8、TNF-α水平均明顯高于對照組，表明IL-6、IL-8、TNF-α水平升高可反映矽肺發(fā)生情況，對診斷矽肺的發(fā)生有較為重要的意義。IL-6主要由單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞、肺巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等分泌，具有較為廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，在炎癥趨化及免疫過程中有較為重要的作用，亦是肺纖維化中較為重要的一種炎癥因子，與肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系較為密切[12]。梁宇等[13]研究表明，IL-6主要通過延緩纖維母細(xì)胞凋亡實現(xiàn)肺纖維化發(fā)展的目的。IL-8是一種前炎癥細(xì)胞因子，單核細(xì)胞、組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為其主要來源，中性粒細(xì)胞趨化因子較強(qiáng)，在肺組織局部損傷的炎性反應(yīng)中有較為重要的作用，可促使肺部結(jié)構(gòu)及纖維細(xì)胞增殖[14-15]。IL-8可通過趨化中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等，造成過度的炎性反應(yīng)，進(jìn)而有促進(jìn)中性粒細(xì)胞黏附、滲出作用。而當(dāng)IL-8介導(dǎo)的炎性反應(yīng)過強(qiáng)時，肺泡中性粒細(xì)胞大量、持續(xù)地聚集在肺部，造成廣泛肺損傷，引起肺纖維化[16]。TNF-α是一種由激活的單核巨噬細(xì)胞和活化的T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，具有介導(dǎo)多向性炎性反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)的作用，生物學(xué)活性較為廣泛。同時TNF-α可誘導(dǎo)IL-1、IL-6及IL-8表達(dá)，進(jìn)而增加肺纖維化發(fā)生的風(fēng)險性。此外，TNF-α還可通過激發(fā)其他促纖維化因子的活性而發(fā)揮致纖維化的作用，如：轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的促纖維化細(xì)胞因子[17-18]，不僅可以刺激成纖維細(xì)胞內(nèi)膠原表達(dá)增加，促進(jìn)膠原合成，還可以促使成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積，而形成IPF。TNF-α雖然不能直接激活TGF-β1，但可通過激活ERK特異的MARK信號轉(zhuǎn)錄通路，導(dǎo)致TGF-β1穩(wěn)定表達(dá)，促進(jìn)纖維細(xì)胞的增殖和膠原形成，最終促進(jìn)肺纖維化的發(fā)展[19]。CIK治療時將單核細(xì)胞中的多種因子在體外刺激、增殖及培養(yǎng)，滿足標(biāo)準(zhǔn)后輸入患者體內(nèi)，進(jìn)而可有效調(diào)節(jié)患者體內(nèi)IL-6等各項因子水平[2]，控制病情發(fā)展，改善患者預(yù)后。

本研究中，觀察組FVC、FEV1、FEV1/FVC指標(biāo)均明顯低于對照組，提示存在阻塞性通氣功能障礙，這結(jié)果雖然與矽肺機(jī)制所致的限制性通氣功能障礙不一致，是因為患者普遍年齡偏大，且既往肺部各種矽肺并發(fā)癥多，肺部病情反復(fù)，導(dǎo)致目前矽肺1期的病情在相對穩(wěn)定時，結(jié)果呼氣延長所致，而實際上在臨床觀察中矽肺的肺功能障礙是以混合性通氣功能障礙居多，這也進(jìn)一步提示了矽肺的發(fā)生將嚴(yán)重影響患者肺功能，增加多種并發(fā)癥發(fā)生率，且肺纖維化傾向越高其肺功能越差，矽肺病患者IL-6、IL-8、TNF-α水平普遍更高，具有較高診斷價值。3例矽肺患者經(jīng)CIK治療后，IL-6、IL-8、TNF-α水平有明顯改善，肺功能較前明顯好轉(zhuǎn)。但因部分CIK項目需患者完全自費等原因，故實際CIK治療的研究例數(shù)較少，且針對CIK治療后IL-6、IL-8、TNF-α水平變化的具體情況，以及這3個細(xì)胞因子相互之間的關(guān)系等，還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，IL-6、IL-8、TNF-α水平升高可有效預(yù)測矽肺的發(fā)生及發(fā)展，同時還可對肺功能損傷進(jìn)行判斷。3例矽肺1期患者經(jīng)CIK治療后IL-6、IL-8、TNF-α水平有顯著改善，肺功能較前明顯好轉(zhuǎn)，值得進(jìn)一步深入研究，也為職業(yè)性矽肺的治療提供了新的思路。

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