李亞萍，鄒余糧，張 琳，黃 新，秦 勇

(1.陜西省西安市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科 710003；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，西安 710061； 3.陜西省西安市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 710003；4.陜西省西安市中心醫(yī)院普通外科 710003)

子癇前期是人類妊娠特發(fā)疾病之一，發(fā)病率約為5%，主要表現(xiàn)為高血壓和蛋白尿，可累及肝、腎、心血管系統(tǒng)多個(gè)器官以及胎盤，嚴(yán)重時(shí)會(huì)危及圍生兒及孕婦生命[1-2]。已有大量關(guān)于子癇前期發(fā)病機(jī)制的研究，但尚未取得明確結(jié)論[1,3]。脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)作為細(xì)胞質(zhì)脂肪酸結(jié)合蛋白家族中的一員，與2型糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、代謝綜合征等密切相關(guān)[4-5]。而胰島素抵抗(IR)是糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理基礎(chǔ)，且IR時(shí)機(jī)體代謝發(fā)生紊亂[6]。研究表明，A-FABP及IR可能與子癇前期的發(fā)病相關(guān)[7]，但關(guān)于A-FABP、IR之間相關(guān)性的研究較少。本研究通過對(duì)比分析血清及胎盤組織A-FABP的水平、空腹胰島素(FINS)、IR等指標(biāo)，探討子癇前期患者A-FABP水平與IR之間的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年10月至2015年10月陜西省西安市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的子癇前期患者，共76例，其中輕度子癇前期42例、重度子癇前期34例。子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《妊娠高血壓疾病診治指南》[8]。所有病例均為單胎，無原發(fā)性高血壓、心臟病或肝、腎疾病史，無其他妊娠合并癥，孕期未使用激素類及影響血壓的藥物。隨機(jī)選取同期健康孕婦48例作為對(duì)照組。收集并統(tǒng)計(jì)所有孕婦的一般資料，包括年齡、孕周、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均動(dòng)脈壓(MABP)等，見表1。子癇前期患者的年齡、孕周及BMI與對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性；SBP、DBP、MABP與對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，重度子癇前期患者的SBP及MABP水平高于輕度子癇前期患者(P<0.05)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 抽取所有研究對(duì)象(子癇前期患者未用藥前)空腹6 h以上的肘靜脈血5 mL，取其中3 mL常規(guī)分離血清，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫? mL用于檢測(cè)空腹血糖(FBG)的水平。胎盤娩出后，于母面中央取小塊組織(避開鈣化、出血、梗死區(qū)等)，生理鹽水漂洗后，于10%的中性甲醛中固定24～48 h，常規(guī)石蠟包埋，切片備用。

表1 各組研究對(duì)象一般資料比較

注：與子癇前期組比較，*P<0.05;與重度子癇前期數(shù)期相比，#P<0.05

1.2.2檢測(cè)方法及指標(biāo) 血清A-FABP及FINS的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。采用全日立自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)FBG、24 h尿蛋白的水平。取胎盤標(biāo)本切片蘇木精-伊紅(HE)染色：將組織切片脫蠟入水，加入蘇木精、伊紅染色，沖洗后脫水封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察各組胎盤組織形態(tài)學(xué)變化。胎盤組織中A-FABP的檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)SABC法，一抗為兔抗人A-FABP，陰性對(duì)照組的一抗為PBS。計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型的IR指數(shù)(HOMA-IR)=(FINS×FBG)/22.5。

1.2.3結(jié)果判定方法 胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，無色或與背景顏色一致為陰性。隨機(jī)選取4個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞百分率1%～25%為1分，>25%～49%為2分，>49%為3分。根據(jù)多數(shù)細(xì)胞的著色強(qiáng)度計(jì)算強(qiáng)度得分，無著色為0分，淺棕褐色為1分，棕褐色為2分，深棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分率與強(qiáng)度的得分之和：0～1分為(-)，2分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)。

2 結(jié) 果

2.1各組研究對(duì)象實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 與對(duì)照組相比，子癇前期組患者的血清A-FABP、FBG、FINS及HOMA-IR水平均明顯升高(P<0.01)；對(duì)子癇前期兩個(gè)亞組進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，重度子癇前期患者的24 h尿蛋白、血清A-FABP、FINS及HOMA-IR水平明顯高于輕度子癇前期組(P<0.05)，見表2。

表2 各組研究對(duì)象血清A-FABP、FBG、FINS、HOMA-IR的比較

注：與子癇前期組比較，*P<0.01;與重度子癇前期數(shù)期相比，#P<0.05

2.2免疫組化檢測(cè)結(jié)果

2.2.1A-FABP在胎盤組織中的表達(dá) 觀察各組胎盤組織HE染色的形態(tài)學(xué)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組正常的胎盤組織中絨毛表面滋養(yǎng)層細(xì)胞無分層現(xiàn)象，而子癇前期胎盤組織滋養(yǎng)層細(xì)胞出現(xiàn)彌漫性的增生，見圖1。免疫組化結(jié)果顯示A-FABP主要在合體滋養(yǎng)層細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)，主要分布于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，陽性顆粒為棕黃色顆粒，見圖2。

注：A為對(duì)照組正常的胎盤組織；B為輕度子癇前期患者的胎盤組織；C為重度子癇前期患者的胎盤組織

圖1不同胎盤組織的HE染色(200×)

2.2.2胎盤組織中A-FABP表達(dá)強(qiáng)度的比較 與對(duì)照組相比，子癇前期患者胎盤組織中A-FABP的表達(dá)強(qiáng)度明顯升高(P<0.01)，且胎盤組織中A-FABP的表達(dá)強(qiáng)度在輕度子癇前期和重度子癇前期組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.104，P=0.035)。見表3。

注：A為滋養(yǎng)層細(xì)胞中A-FABP陰性表達(dá)；B為滋養(yǎng)層細(xì)胞中A-FABP弱陽性表達(dá)；C為滋養(yǎng)層細(xì)胞中A-FABP中陽性表達(dá)；D為滋養(yǎng)層細(xì)胞中A-FABP強(qiáng)陽性表達(dá)

圖2 免疫組化滋養(yǎng)層細(xì)胞中A-FABP的表達(dá)(400×)

2.3血清A-FABP、胎盤A-FABP及HOMA-IR之間的相關(guān)性分析 子癇前期胎盤組織A-FABP表達(dá)強(qiáng)度與血清A-FABP水平呈正相關(guān)(P<0.01)；血清A-FABP水平及胎盤A-FABP表達(dá)強(qiáng)度均與HOMA-IR呈正相關(guān)(P<0.01)。見表4。

表4 實(shí)驗(yàn)室各血清指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果

注：-表示無數(shù)據(jù)

3 討 論

子癇前期是危害母嬰健康的妊娠特發(fā)性疾病。目前認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制與脂質(zhì)代謝紊亂、IR及血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常等因素密切相關(guān)，但確切的機(jī)制尚不清楚[9]。有研究表明，子癇前期明顯的高空腹胰島素及IR狀態(tài)從多方面發(fā)揮作用誘導(dǎo)發(fā)病[10]，且脂肪細(xì)胞因子A-FABP的水平與子癇前期的發(fā)病呈正相關(guān)[11-12]。但極少有研究報(bào)道A-FABP與IR之間的關(guān)系。筆者前期研究基礎(chǔ)已證實(shí)A-FABP表達(dá)與子癇前期的發(fā)病及病情嚴(yán)重程度之間存在相關(guān)性[13]，但其具體機(jī)制及與IR的關(guān)系尚未能確定。因此，本研究旨在分析子癇前期患者血清及胎盤組織A-FABP水平與IR之間的相關(guān)性，初步探討A-FABP在子癇前期發(fā)生、發(fā)展中可能的機(jī)制，以指導(dǎo)臨床采取針對(duì)性的治療改善患者癥狀。

已有大量研究證實(shí)血清A-FABP水平及在胎盤組織中的表達(dá)與子癇前期的發(fā)生及嚴(yán)重程度有關(guān)[14-15]。A-FABP是一種參與機(jī)體脂質(zhì)代謝的脂肪因子，其表達(dá)與糖尿病、代謝綜合征密切相關(guān)。IR是指各種原因引起的糖代謝異常狀態(tài)，亦是導(dǎo)致代謝綜合征的原因之一。典型的IR狀態(tài)是正常妊娠期的一種生理適應(yīng)性反應(yīng)，而較高的IR會(huì)引起脂代謝紊亂，進(jìn)而影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，促進(jìn)妊娠高血壓進(jìn)一步發(fā)展，最終誘發(fā)子癇前期[10]。因此，研究A-FABP與IR是否互相影響共同參與子癇前期的發(fā)生和發(fā)展具有重要的臨床意義。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者的血清A-FABP水平、胎盤A-FABP表達(dá)強(qiáng)度、FINS及HOMA-IR均高于對(duì)照組，且重度子癇前期患者A-FABP的水平、胎盤A-FABP表達(dá)強(qiáng)度、FINS及HOMA-IR明顯高于輕度子癇前期患者(P<0.05)，即A-FABP水平及HOMA-IR均與子癇前期的發(fā)生及嚴(yán)重程度相關(guān)，與文獻(xiàn)[16-17]的研究結(jié)果一致。進(jìn)一步對(duì)血清A-FABP水平、胎盤A-FABP表達(dá)及HOMA-IR進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，子癇前期胎盤組織A-FABP表達(dá)強(qiáng)度與血清A-FABP水平呈正相關(guān)，同時(shí)二者均與HOMA-IR呈正相關(guān)。因而推測(cè)A-FABP在調(diào)節(jié)脂代謝的同時(shí)可能影響胰島素靈敏度，導(dǎo)致IR的發(fā)生，共同參與子癇前期的發(fā)生和發(fā)展。因此，A-FABP可以作為妊娠期表征代謝狀態(tài)的臨床指標(biāo)之一，當(dāng)該指標(biāo)異常升高時(shí)，可以提示患者存在IR狀態(tài)、代謝綜合征及子癇前期發(fā)生的可能；同時(shí)，臨床上也可以通過采取一定方法調(diào)控該蛋白的表達(dá)水平，進(jìn)行妊娠代謝綜合征、子癇前期的預(yù)防和治療。

綜上所述，A-FABP水平及高IR與子癇前期的發(fā)生密切相關(guān)，其機(jī)制可能是高水平A-FABP通過異常的脂代謝狀態(tài)引起糖代謝異常，共同誘導(dǎo)子癇前期的發(fā)生。但具體的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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