陳小燕，杜 琪

（1.山東省臨沂市婦女兒童醫(yī)院，山東 臨沂 276001；2.山東省臨沂市蘭山區(qū)疾病預(yù)防控制中心，山東 臨沂 276001）

1 簡 介

胎兒娩出后，及時進(jìn)行臍帶結(jié)扎并離斷，將殘留在臍帶內(nèi)以及胎盤近胎兒側(cè)血管內(nèi)的血液收集，可作為新生兒最早的血液標(biāo)本，臍帶血在新生兒諸多常見疾病中起到良好的預(yù)測作用，因而近年來被科研工作者廣泛重視。對新生兒來說，順利進(jìn)行靜脈穿刺并采集足夠多的標(biāo)本是一件非常困難的事，對健康狀況較差的患兒或早產(chǎn)兒來說更是如此。采血對新生兒的健康產(chǎn)生影響，發(fā)生血栓栓塞、動脈痙攣甚至局部壞死等[1]。而臍血為剛出生的新生兒的血液檢測提供了可替代的選擇[2]。

臍血全血細(xì)胞計(jì)數(shù)是最為廣泛應(yīng)用于評估新生兒臨床狀況的實(shí)驗(yàn)室檢查之一。可對全身狀況進(jìn)行初步的評估，有利于疾病的診斷和鑒別診斷。可以為新生兒疾病的早期診斷提供及時有效、創(chuàng)傷性小的檢查方式。臍帶血全血細(xì)胞分析的各個檢測指標(biāo)往往會因?yàn)樵袐D和嬰兒的生理狀態(tài)不同而發(fā)生變化。因此建立一個全面而準(zhǔn)確的生物參考區(qū)間是合理利用臍血全血細(xì)胞計(jì)數(shù)對新生兒狀況進(jìn)行評估的前提。因此建立本地區(qū)本實(shí)驗(yàn)室臍血全血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的生物參考區(qū)間具有重要的臨床意義。

2 方法與材料

2.1 臍血采集

2.1.1 研究對象的選擇

選擇在2016年1月～2016年12月在臨沂市婦婦兒童醫(yī)院出生的健康新生兒共2280例，產(chǎn)婦年齡22～45歲。

2.1.2 臍血采集

采用臍靜脈穿刺法，采集前先準(zhǔn)備含EDTA-K2抗凝劑的BD公司生產(chǎn)的抗凝管一支，放在無菌臺，待新生兒娩出后，在距離臍輪約5～8 cm處用止血鉗夾住臍帶的兩端，于兩鉗之間剪斷臍帶，兩分鐘內(nèi)在胎盤的一端選擇臍靜脈，消毒后用采血針向著胎盤最粗臍靜脈的方向穿刺，約采集2 mL的臍帶血，注入含有EDTA-K2抗凝劑的試管中，立即顛倒混勻5～8次，1小時內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。肉眼觀察標(biāo)本是否有凝塊、溶血等標(biāo)本不合格的現(xiàn)象，剔除不合格的標(biāo)本。于2小時內(nèi)完成血細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類。

2.2 臍血血細(xì)胞檢測

2.2.1 檢測儀器與試劑

用Beckman公司生產(chǎn)的DXH800全血動血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血液常規(guī)檢測，試劑為該公司配套產(chǎn)品。利用上述試劑與儀器對臍血進(jìn)行血細(xì)胞自動計(jì)數(shù)，并自動進(jìn)行白細(xì)胞分類，完全按照儀器與試劑生產(chǎn)廠家的操作說明進(jìn)行。

2.2.2 檢測項(xiàng)目

白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分比、單核細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞百分比、嗜酸粒細(xì)胞百分比、嗜堿粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞絕對值、單核細(xì)胞絕對值、中性粒細(xì)胞絕對值、嗜酸粒細(xì)胞絕對值、嗜堿粒細(xì)胞絕對值、紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均體積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量、紅細(xì)胞體積分布寬度、有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板、血小板分布寬度、血小板壓積、大血小板比例共24個指標(biāo)。

2.3 判斷生物區(qū)間的建立是否需要分組

按新生兒性別將標(biāo)本分為男性組和女性組；按分娩方式將標(biāo)本分為剖宮產(chǎn)組和經(jīng)陰分娩組；按出生時新生兒的胎齡，將標(biāo)本分為早產(chǎn)、足月、過期產(chǎn)三組。按產(chǎn)婦年齡將標(biāo)本分為≥35歲和＜35歲組。統(tǒng)計(jì)分析各組之間臍帶血全血細(xì)胞分析24項(xiàng)指標(biāo)是否有顯著差異。有顯著差異的項(xiàng)目分別建立生物參考區(qū)間，無顯著差異的項(xiàng)目則不再進(jìn)行分組，建立一個通用的生物參考區(qū)間。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

檢測數(shù)據(jù)中是否有離群值，對各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。如果服從正態(tài)分布，則各項(xiàng)指標(biāo)的參考值范圍用均值與標(biāo)準(zhǔn)差來進(jìn)行估計(jì)，雙側(cè)采用x±1.96s確定參考區(qū)間，單側(cè)則采用x±1.64s。如果為偏態(tài)分布，則用百分位數(shù)法，雙側(cè)采用P2.5-P97.5。單側(cè)則采用小于P5或大于P95。

3 結(jié) 果

3.1 男性新生兒與女性新生兒臍血血細(xì)胞參數(shù)的比較

根據(jù)新生兒性別，將所有標(biāo)本分為男、女兩組。對臍血全血細(xì)胞分析各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析，其中紅細(xì)胞（P=0.005）、血紅蛋白（P=0.002）、白細(xì)胞（P=0.011）、血小板（P=0.021）、血小板壓積（P=0.032）在男女新生兒之間具有顯著性差異，其他項(xiàng)目之間沒有顯著性差異。

3.2 分娩方式對臍血全血細(xì)胞分析各項(xiàng)參數(shù)的影響

根據(jù)分娩方式的不同，臍血被分為經(jīng)陰分娩組與剖宮產(chǎn)組，將臍血全血細(xì)胞分析各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析，其中紅細(xì)胞（P=0.009）、血紅蛋白（P＜0.001）、紅細(xì)胞壓積（P＜0.001）、有核紅細(xì)胞（P＜0.001）、血小板（P=0.009）在經(jīng)陰分娩組與剖宮產(chǎn)組之間具有顯著性差異，其他項(xiàng)目之間沒有顯著性差異。

3.3 不同胎齡新生兒臍血全血細(xì)胞分析比較表

根據(jù)分娩胎齡的不同，將臍血標(biāo)本分為早產(chǎn)組與足月產(chǎn)組和過期產(chǎn)組，對臍血全血細(xì)胞分析各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析，其中紅細(xì)胞（P=0.020）、血紅蛋白（P=0.030）、紅細(xì)胞壓積（P=0.041）、紅細(xì)胞平均體積（P=0.001）、有核紅細(xì)胞（P=0.032）、網(wǎng)織紅細(xì)胞（P=0.011）、血小板（P=0.031）、血小板壓積（P=0.035）在三組之間具有顯著性差異，其他項(xiàng)目之間沒有顯著性差異。

4 討 論

臍血對于剛出生的新生兒來說，是理想的實(shí)驗(yàn)室檢查的標(biāo)本來源。它不僅能反映胎兒造血系統(tǒng)的狀況，也能反映新生兒在圍生期的狀況，如圍生期窒息，胎糞污染、絨毛膜羊膜炎等[4]。臍血全血細(xì)胞分析與諸多因素有關(guān)，以往的研究表明，新生兒在宮內(nèi)發(fā)生的情況，如宮內(nèi)窒息、感染、新生兒溶血均會影響全血細(xì)胞分析的結(jié)果。有研究表明，胎兒的分娩方式、新生兒體重、胎盤娩出方式均可影響臍血采集質(zhì)和量。宮內(nèi)感染時，新生兒臍血與正常新生兒的白細(xì)胞等參數(shù)有顯著差異[5]。臍血與成人或兒童期的血液標(biāo)本有很大不同，白細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、白蛋白、免疫球蛋白、尿素氮等都存在顯著差異[6]，因此不能用成人的血細(xì)胞檢測的生物參考區(qū)間來評估新生兒的臍血標(biāo)本。臍血與兒童期血液標(biāo)本也存在很大差異[7]。因此，需要單獨(dú)建立臍血的生物參考區(qū)間，才能在臨床上進(jìn)行更好的應(yīng)用。

Yu Hsun Chang等研究發(fā)現(xiàn)，新生兒性別對臍帶血有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、MCHC的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[8]。Lee等[4]進(jìn)行的研究中，性別對臍帶血中嗜堿性粒細(xì)胞百分比和有核紅細(xì)胞比例有明顯影響。我們的研究發(fā)現(xiàn)除紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、血小板壓積與性別有關(guān)外，血紅蛋白濃度也與性別有關(guān)，但MCV、MCH、MCHC與性別無關(guān)。

Lee等進(jìn)行的研究中，分娩方式對單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞有一定的影響[4]。而Yu-Hsun Chang等進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，剖腹產(chǎn)影響臍血中紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、和血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及部分白細(xì)胞分類結(jié)果，但對MCV、MCH、MCHC沒有顯著影響[8]。在我們的研究中，剖腹產(chǎn)的新生兒臍血中紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)都較經(jīng)陰分娩的新生兒低。

毛維玉等研究了孕20-24周的臍靜脈穿刺標(biāo)本的白細(xì)胞、紅細(xì)胞等血細(xì)胞參數(shù)，與成人相比，具有顯著性差異[11]。我們的研究中，早產(chǎn)兒與足月兒及過期產(chǎn)的新生兒相比，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積增高，而MCV，有核紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板、血小板壓積有所下降。

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[2] Lee J C,Ahern T P,Chaves F P,et al.Utility of hematologic and volume,conductivity,and scatter parameters from umbilical cord blood in predicting chorioamnionitis[J].Int J Lab Hematol,2010,32(3):351-359.

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[5] 毛維玉.581例臍帶血細(xì)胞各參數(shù)結(jié)果分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2005(07):75-76.