林功師

(廈門(mén)市海洋與漁業(yè)研究所， 福建 廈門(mén) 361008)

UHPLC-MS/MS測(cè)定羅非魚(yú)中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的不確定度評(píng)定

林功師

(廈門(mén)市海洋與漁業(yè)研究所， 福建 廈門(mén)361008)

為判斷羅非魚(yú)中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量測(cè)定中不確定度的主要來(lái)源，本研究參照J(rèn)JF1059.1—2012《測(cè)量不確定度的評(píng)定與表示》等相關(guān)理論，采用農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1-2006的前處理方法進(jìn)行樣品處理，并根據(jù)公告中的結(jié)果計(jì)算公式建立相應(yīng)的數(shù)學(xué)模型，對(duì)羅非魚(yú)中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的測(cè)定結(jié)果中產(chǎn)生的各不確定度來(lái)源進(jìn)行分析和計(jì)算。當(dāng)硝基呋喃類(lèi)代謝物的添加水平為1.00μg/kg時(shí)，4種硝基呋喃類(lèi)代謝物結(jié)果可表示為：呋喃西林代謝物CSEM為(0.989±0.168)μg/kg,k=2；呋喃妥因代謝物CAHD為(1.009±0.165)μg/kg,k=2；呋喃它酮代謝物CAMOZ為(0.991±0.169)μg/kg,k=2；呋喃唑酮代謝物CAOZ為(0.986±0.180)μg/kg,k=2。研究表明，在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，本方法的不確定度主要來(lái)自于標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合和加標(biāo)回收率。研究結(jié)果對(duì)實(shí)際操作中減少不確定度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性具有重要意義。[中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2017，7(6):48-57]

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UHPLC-MS/MS)；羅非魚(yú)；硝基呋喃類(lèi)代謝物；不確定度

硝基呋喃類(lèi)藥物是人工合成的含有硝基的一類(lèi)廣譜抗菌性藥物,因其具有價(jià)格低廉、殺菌能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，曾被應(yīng)用于水生動(dòng)物養(yǎng)殖環(huán)境殺菌消毒和家畜、水產(chǎn)等養(yǎng)殖過(guò)程中動(dòng)物疾病的預(yù)防與治療[1-2]。但該類(lèi)藥物在生物體內(nèi)代謝很快，其代謝產(chǎn)物能與機(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)穩(wěn)定的結(jié)合，并誘發(fā)機(jī)體發(fā)生基因突變?cè)斐?，致癌、致畸等危害[3-5]。因此，世界許多國(guó)家對(duì)硝基呋喃類(lèi)藥物的控制變得很?chē)?yán)格。1997年歐盟將硝基呋喃類(lèi)藥物列為A類(lèi)違禁藥物，隨后美國(guó)、日本等國(guó)家也制定了相應(yīng)的法規(guī)[6]。2003年歐盟發(fā)布2003/181/EC條例，要求檢測(cè)硝基呋喃類(lèi)藥物及其代謝物殘留量的各種檢測(cè)方法最低檢測(cè)限需達(dá)到1.0μg/kg[7]。中國(guó)農(nóng)業(yè)部也于2002年12月發(fā)布第235號(hào)公告及2005年10月發(fā)布第560號(hào)公告[8-9]，將硝基呋喃類(lèi)藥物列為禁止使用的獸藥，并要求在動(dòng)物性食品中不得檢出。2010年3月衛(wèi)生部也明確將硝基呋喃類(lèi)藥物(主要成分：呋喃西林、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因)列入食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單中[10]。目前檢測(cè)水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物的方法主要有免疫膠體金法[11]、酶聯(lián)免疫法[12]、高效液相色譜法[13]和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[14-15]。其中，免疫膠體金法主要用于水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物的快速檢測(cè)，它只能做定性判定，無(wú)法做定量檢測(cè)；酶聯(lián)免疫法和高效液相色譜法雖可做定量檢測(cè)，但出現(xiàn)假陽(yáng)性的概率比較大。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是目前國(guó)際上用于硝基呋喃類(lèi)代謝物確證的通用方法。

測(cè)量不確定度是一種表示被測(cè)量值離散程度的重要參數(shù)，是評(píng)價(jià)測(cè)量結(jié)果和測(cè)量水平的參數(shù)指標(biāo)[16]。檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求(GB/T27025—2008)中明確規(guī)定應(yīng)具有評(píng)定測(cè)量不確定度的程序[17]。近年來(lái)，人們對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性要求越來(lái)越高，實(shí)驗(yàn)室計(jì)量認(rèn)證評(píng)審等體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的資質(zhì)認(rèn)證過(guò)程對(duì)數(shù)據(jù)的要求也在提高，因此分析檢測(cè)過(guò)程中數(shù)據(jù)的不確定度成為了檢測(cè)過(guò)程中必須完成的一項(xiàng)工作。根據(jù)《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[18]和《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[19]等技術(shù)規(guī)范，常晨陽(yáng)等[20]和陳國(guó)花[21]對(duì)動(dòng)物源性食品中硝基呋喃類(lèi)代謝物中的一種目標(biāo)物進(jìn)行了不確定度評(píng)定；何太喜等[22]采用GB/T21311—2007的檢測(cè)方法[23]對(duì)鰻魚(yú)肉中硝基呋喃類(lèi)代謝物進(jìn)行不確定度評(píng)定；祝子銅等[15]、邢麗紅等[24]、郭麗娜等[25]根據(jù)農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1-2006[26]采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物的不確定度進(jìn)行評(píng)定；李緒鵬等[14]根據(jù)農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1-2006[24]采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物的不確定度，但未充分考慮溫度因素對(duì)不確定度評(píng)定的影響。為更全面地考察本實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)硝基呋喃類(lèi)代謝物的過(guò)程中存在的可能影響檢測(cè)結(jié)果的不確定因素，本研究采用農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1-2006的檢測(cè)方法，選用近年來(lái)農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測(cè)(風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè))中均要求監(jiān)測(cè)的水產(chǎn)品品種之一——羅非魚(yú)作為研究對(duì)象，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)羅非魚(yú)中4種硝基呋喃代謝物殘留量的過(guò)程中可能影響檢測(cè)結(jié)果的不確定度進(jìn)行評(píng)定，分析不確定度的主要來(lái)源，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，從而提高檢測(cè)數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

1 材料和設(shè)備

1.1 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜(1290 Infinity UHPLC，美國(guó) Agilent 公司)；三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(AB SciexTriple Quad 4500，美國(guó)AB公司，配有電噴霧 ESI 離子源)；DKZ-2往復(fù)式水浴恒溫振蕩器(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；MS3 Digital 漩渦振蕩器(德國(guó)IKA公司)；BS110S電子天平和TE212電子天平(德國(guó)Sartorius公司)；MG-2100氮吹儀(日本東京理化器械株式會(huì)社)；Sorvall Stratos高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司)；Milli-Q Gradient超純水儀(美國(guó)Millipore公司)；Multi 9310臺(tái)式pH分析儀(德國(guó)WTW公司);20、 25、 100、 1 000 μL移液器(法國(guó)Gilson公司)。

1.2 試劑與材料

呋喃西林代謝物鹽酸鹽SEM·HCl純度 99.5%，德國(guó)Dr公司；呋喃妥因代謝物鹽酸鹽AHD·HCl純度 99.7%，德國(guó)Dr Eppendorf公司；呋喃唑酮代謝物AOZ純度 99.7%，Sigma 公司；呋喃它酮代謝物AMOZ 純度 99.4%，Sigma 公司；呋喃西林代謝物同位素標(biāo)準(zhǔn)品SEM-13C-15N2純度98.4%，Sigma 公司；呋喃妥因代謝物同位素標(biāo)準(zhǔn)品AHD-13C3純度 99.3%，Sigma 公司；呋喃唑酮代謝物氘代物AOZ-D4純度 99.0%，Sigma 公司；呋喃它酮代謝物氘代物AMOZ-D5純度 99.5%，Sigma 公司；甲醇、乙酸乙酯、二甲亞砜、 2- 硝基苯甲醛，甲酸為色譜純，購(gòu)自 Fisher Scientific 公司；鹽酸為優(yōu)級(jí)純、磷酸氫二鉀和乙酸銨為分析純，購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

實(shí)驗(yàn)用的水產(chǎn)品樣品為采購(gòu)于水產(chǎn)批發(fā)市場(chǎng)的羅非魚(yú)(Oreochromismossambicus)，采樣規(guī)格為每尾體重約1.0 kg，采樣量為3尾。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取AOZ 9.9 mg、SEM·HCL 15.4 mg、AMOZ 10.2 mg、AHD·HCL 13.1 mg、AOZ-D49.9 mg、SEM-13C-15N29.9 mg、AMOZ-D510.1 mg、AHD-13C310.1 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：用1 000 μL移液器各移取1.0mL 1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，得到100.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。采用同樣的方法依次十倍稀釋，分別制得10.0、 1.0 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和100.0、 10.0 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

混合內(nèi)標(biāo)工作溶液：用1 000 μL移液器各移取1.0 mL 1.0 mg/mL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，得到100 μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。采用同樣的方法依次十倍稀釋，分別制得10.0、 1.0 μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液和100.0 μg/L的混合內(nèi)標(biāo)工作液。

樣品加標(biāo)上機(jī)液：取2.00 g空白樣品至 50 mL離心管，分別加入20 μL 100.0 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和50 μL 100.0 μg/L混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，按1.3.2 步驟操作，制成樣品加標(biāo)上機(jī)液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別準(zhǔn)確吸取 10.0 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液10、 25、 50、 100 μL和準(zhǔn)確吸取 100.0 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液25、 50、 100 μL至7個(gè) 50 mL離心管中，分別加入50 μL 100.0 μg/L混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，除不加樣品外其余步驟按1.3.2樣品前處理方法操作，制成0.10、 0.25、 0.50、 1.0、 2.5、 5.0、 10.0 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，待測(cè)。

1.3.2 樣品前處理方法

稱取樣品2.00 g于50 mL離心管中，加入100.0 μg/L混合內(nèi)標(biāo)工作溶液50 μL，充分混合50 s，再加入0.1 mol/L鹽酸溶液5.0 mL 和0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛溶液150 μL，渦旋振蕩50 s后，置于恒溫水浴振動(dòng)器中37 ℃避光振蕩16 h，進(jìn)行充分的衍生化反應(yīng)。取出離心管加入適量1.0 mol/L磷酸氫二鉀溶液，使離心管中的溶液pH為7.0～7.5。再加入乙酸乙酯4.0 mL，渦旋振蕩50 s，13 000 r/min離心3 min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的15 mL離心管中；再加入乙酸乙酯4.0 mL重復(fù)提取目標(biāo)物一次，合并上清液，40 ℃氮?dú)獯蹈?。?zhǔn)確加入5%甲醇溶液1.00 mL，溶解殘留物，4 500 r/min離心3 min，取清液，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.3.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

色譜柱為Zorbax Eclipse Plus-C18(2.1 mm×100 mm, 1.8 μm)；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為5 mmol/L乙酸銨；柱溫40 ℃；流速0.25 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；液相色譜流速及梯度洗脫程序見(jiàn)表 1。離子源為電噴霧離子源 ESI，毛細(xì)管電壓為5 500V，離子源氣流量為55.0 mL/min，錐孔氣流量35.0 mL/min。采用正離子掃描方式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM) 。質(zhì)譜定性定量離子對(duì)信息見(jiàn)表 2。

表1 液相色譜梯度洗脫條件Tab.1 LC gradient elution conditions

注：A為甲醇，B為5 mmol·L-1乙酸銨。

表2 目標(biāo)化合物液質(zhì)測(cè)定條件Tab.2 Mass spectrometric parameters for target compounds

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度的數(shù)學(xué)模型

根據(jù)農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1-2006的測(cè)定方法及結(jié)果計(jì)算公式，建立檢測(cè)中硝基呋喃類(lèi)代謝物含量測(cè)定的數(shù)學(xué)模型，如式(1)所示。

式(1)

式(1)中：X為檢測(cè)樣品中硝基呋喃代謝物的含量(μg/kg)；Ax為提取的樣品待測(cè)液中的目標(biāo)物與同位素內(nèi)標(biāo)峰面積比值；Cs為標(biāo)準(zhǔn)溶液中硝基呋喃代謝物的質(zhì)量濃度(μg/L)；As為標(biāo)準(zhǔn)溶液中的目標(biāo)物與同位素內(nèi)標(biāo)峰面積比值；V為提取的樣品待測(cè)液最終定容體積(mL)；m為檢測(cè)樣品的質(zhì)量(g)，R為回收率。

合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算的計(jì)算公式見(jiàn)式(2)。

式(2)

式(2)中：urel(c)為合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，urel(c0)為標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，urel(cs)為標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，urel(cis)為同位素內(nèi)標(biāo)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度,urel(m)為樣品稱量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度,urel(V)為提取液濃縮后的最終定容體積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，urel(frep)為重復(fù)測(cè)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，urel(R)為加標(biāo)回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

2.2 不確定度的來(lái)源分析及計(jì)算

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c0)

本實(shí)驗(yàn)對(duì)4種硝基呋喃代謝物，制備了7個(gè)不同濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)濃度點(diǎn)檢測(cè) 1 次，以外標(biāo)峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積的值(Ai)為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(Ci)為橫坐標(biāo)采用最小二乘法擬合，得出目標(biāo)物的回歸方程(y=a+bx)。由表3可以得出，AOZ的線性方程為y=0.327 53x+0.008 23(r=0.999 6)，AMOZ的線性方程為y=0.274 13x+0.001 25(r=0.999 8)，SEM的線性方程為y=0.284 51x+0.004 28(r=0.999 9)，AHD的線性方程為y=0.196 97x+0.001 04(r=0.999 7)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度見(jiàn)式(3)。

式(3)

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c0)見(jiàn)式(4)。u和urec(C0)計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表4。

式(4)

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定中的相關(guān)系數(shù)Tab.3 Correlation coefficients of the linear curve

表4 相對(duì)不確定度Tab.4 Results of relative standard uncertainty

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(cs)

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的數(shù)學(xué)模型見(jiàn)式(5)。

式(5)

2.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u21rel

AOZ標(biāo)準(zhǔn)品純度為 99.7%，最大允差為±0.3%，其引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

AMOZ標(biāo)準(zhǔn)品純度為99.4%，最大允差為±0.3%，其引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

SEM標(biāo)準(zhǔn)品純度為99.5%，最大允差為±1.0%，其引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

AHD標(biāo)準(zhǔn)品純度為99.7%，最大允差為±1.0%，其引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u22rel

2.2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u23rel

2.2.2.4 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u24rel

從1.00 mg/mL逐級(jí)稀釋到10.0 μg/L的過(guò)程中共使用了5次1 000 μL移液器和5次10 mL A 級(jí)單標(biāo)容量瓶，故其引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

。

2.2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液配制中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u25rel

本研究中標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)共有7個(gè)，在配制過(guò)程中所使用的量器為20、25、100 μL移液器，其中20 μL移液器使用1次，25 μL移液器使用2次、100 μL移液器使用4次。

因此，標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液配制中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

=0.063 7

根據(jù)以上計(jì)算的各分量及公式(5)可以計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(cs)：urel(csAOZ)=0.071 3，urel(csAMOZ)=0.071 0，urel(csSEM)=0.067 9，urel(csAHD)=0.068 9。

2.2.3 混合內(nèi)標(biāo)工作溶液配制中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(cis)

混合內(nèi)標(biāo)工作溶液配制中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的數(shù)學(xué)模型見(jiàn)式(6)。

式(6)

同位素內(nèi)標(biāo)(AOZ-D4)純度為(99.0±0.3)%，AMOZ-D5純度為(99.5±0.3)%，SEM-13C-15N2純度為(98.4±0.5)%，AHD-13C3純度為(99.3±0.3)%，純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u31rel。其天平稱量(u32rel)、溶液稀釋(u33rel)和定容(u34rel)等一系列溶液配制過(guò)程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算方法與標(biāo)準(zhǔn)溶液2.2.2.1～2.2.2.4同理，其結(jié)果依次分別是：

u33rel=u23rel=0.001 33。

混合內(nèi)標(biāo)工作溶液從1.00 mg/mL逐級(jí)稀釋到100.0 μg/L的過(guò)程中共使用了4次1 000 μL移液器和4次10 mL A 級(jí)單標(biāo)容量瓶，故其引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

將同位素內(nèi)標(biāo)各項(xiàng)分量代入公式 (6)，計(jì)算結(jié)果如下：urel(cis(AOZ))=0.038 4，urel(cis(AMOZ))=0.037 9，urel(cis(SEM))=0.038 4，urel(cis(AHD))=0.037 9。

2.2.4 樣品稱量過(guò)程中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(m)

2.2.5 提取液濃縮后的最終定容體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(V)

=0.000 148。

提取液定容引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.2.6 重復(fù)測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(frep)

在同一未檢出樣品中添加同一濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3方法進(jìn)行處理和上機(jī)測(cè)定，重復(fù)測(cè)定 6次，用貝塞爾公式(式7)進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表5。

式(7)

式(8)

表5 重復(fù)測(cè)定結(jié)果和重復(fù)測(cè)定引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Tab.5 Results of repeated determination and relative standard uncertainty

2.2.7加標(biāo)回收率引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(R)

式(9)

2.2.8 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c)及不確定度uc(X)

以上各項(xiàng)不確定度分量相互獨(dú)立，不考慮分量間的相關(guān)性，將上述各值代入公式(2)中，則合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c)和不確定度uc(X)最終檢測(cè)結(jié)果取包含因子結(jié)果見(jiàn)表7。

uc(X)=urel(c)·X

式(10)

表6 加標(biāo)回收率結(jié)果和加標(biāo)實(shí)驗(yàn)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Tab.6 Results of the spiked recovery and relative standard uncertainty

表7 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度和不確定度Tab.7 Results of combined standard uncertainty and uncertainty

取包含因子k=2(近似95%置信概率)，擴(kuò)展不確定度U=kuc(X)，則最終檢測(cè)結(jié)果為：呋喃唑酮代謝物CAOZ=0.986 μg/kg,U=0.180 μg/kg,k=2；呋喃它酮代謝物CAMOZ=0.991 μg/kg,U=0.169 μg/kg,k=2；呋喃西林代謝物CSEM=0.989 μg/kg,U=0.168 μg/kg,k=2；呋喃妥因代謝物CAHD=1.009 μg/kg,U=0.165μg/kg,k=2。

3 結(jié)論

根據(jù)測(cè)量不確定度的評(píng)定方法，本研究對(duì)本實(shí)驗(yàn)室采用農(nóng)業(yè)部 783 號(hào)公告-1-2006中液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定羅非魚(yú)中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的不確定度來(lái)源進(jìn)行分析，通過(guò)建立模型，評(píng)定和計(jì)算測(cè)量硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量過(guò)程中的各不確定度分量。結(jié)果表明，水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物殘留量測(cè)定的不確定度主要來(lái)自于樣品前處理過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液的配制及使用、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、加標(biāo)回收率，其次為測(cè)量重復(fù)性和樣品稱量。因此，在日常檢測(cè)水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的過(guò)程中，應(yīng)盡量選用精度較高的玻璃量器和移液器、天平，并適當(dāng)增加標(biāo)準(zhǔn)工作液的測(cè)定次數(shù)和平行樣品的測(cè)定，以降低整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中可能產(chǎn)生的不確定度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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Uncertaintyevaluationindeterminationofnitrofuranmetabolites residuesintilapiabyUHPLC-MS/MS

LINGongshi

(XiamenMarine&FisheriesResearchInstitute，Xiamen361008，China)

In order to determine the main source of uncertainty of nitrofuran metabolites residues in tilapia, according to “Evaluation and expression of uncertainty in measurement (JJF1059.1-2012)” and other related theories, the study constructed a corresponding mathematical model for nitrofuran metabolites residues in tilapia based on the method of sample pretreatment and calculation formula from the announcement of Ministry of Agriculture (No.783-1-2006). When the spiked level was1.00μg/kg, the results of4nitrofuran metabolites were showed thatCSEMwas (0.989±0.168) μg/kg,k=2;CAHDwas (1.009±0.165) μg/kg,k=2;CAMOZwas (0.991±0.169) μg/kg,k=2; andCAOZwas (0.986±0.180) μg/kg,k=2. It suggested that the uncertainty were mainly from the preparation of calibration solution and internal standard solution, linear curve fitting, and the spiked recovery under determined experimental conditions. The study was of great significance on reducing uncertainty for detection of nitrofuran metabolites residues and ensuring accuracy and reliability of test data. [Chinese Fishery Quality and Standards,2017，7(6):48-57]

ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UHPLC-MS/MS); tilapia; nitrofuran metabolites residues; uncertainty

LIN Gongshi, lgsqz@163.com

《中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)》2018年征稿征訂啟事

中國(guó)科技核心期刊 中國(guó)農(nóng)業(yè)核心期刊

《中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)》創(chuàng)辦于1995年，由農(nóng)業(yè)部主管，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院、國(guó)家食物與營(yíng)養(yǎng)咨詢委員會(huì)主辦的食物與營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域相結(jié)合的綜合性月刊，國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)行。2014年影響因子為0.937。

辦刊宗旨：立足于農(nóng)業(yè)、食物、營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域的結(jié)合，報(bào)道國(guó)家在食物與營(yíng)養(yǎng)相關(guān)領(lǐng)域的方針、政策、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等；刊登食物生產(chǎn)、食物消費(fèi)、食品工業(yè)、食物營(yíng)養(yǎng)、公共營(yíng)養(yǎng)、臨床營(yíng)養(yǎng)等方面的發(fā)展動(dòng)態(tài)和科技成果等。

本刊主要欄目有：專題論壇、食物安全、資源與生產(chǎn)、食品工業(yè)、消費(fèi)與流通、新技術(shù)新產(chǎn)品、營(yíng)養(yǎng)與保健、營(yíng)養(yǎng)與疾病、膳食營(yíng)養(yǎng)調(diào)查等。

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廈門(mén)市水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)專項(xiàng)(506007)

林功師(1985-)，男，碩士，工程師，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)與研究，lgsqz@163.com