陳灼娟

摘 要：酚類(lèi)物質(zhì)是茶油的主要功能性成分之一，具有顯著的抗氧化作用。該研究用固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定了不同產(chǎn)地、不同加工程度的6種茶油中的4種酚類(lèi)物質(zhì)含量。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地茶油中的酚類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)和含量差別較大，加工程度較小的毛油中酚類(lèi)物質(zhì)含量略高于精煉油。6個(gè)樣品中沒(méi)食子酸和槲皮素普遍存在，而3，4-二羥基苯乙酸和表兒茶素則因樣品的不同，含量差異懸殊。

關(guān)鍵詞：茶油；酚類(lèi)物質(zhì)；高效液相色譜；沒(méi)食子酸

中圖分類(lèi)號(hào) TS229 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2018）20-0030-3

Determination of Phenols in Six Kinds of Camellia Oil

Chen Zhuojuan

（Zhicheng College，F(xiàn)uzhou University，F(xiàn)uzhou 350002，China）

Astract：Polyphenols are one of the main functional components of camellia oil which have significant antioxidant effects. The Polyphenols in camellia oil differ from each other in type and content. In this study，the content of phenols in six types of camellia oil in different places and with different processing degrees was determined by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography. The results showed that the phenols in camellia oil in different places had a large difference in type and content，and the phenols in crude oil was slightly better than that in refined oil. Gallic acid and quercetin were common in the six samples，while 3，4-dihydroxyphenylacetic acid and epicatechin were significantly different in content in the samples.

Key words：Polyphenols；Camellia oil；HPLC；Gallic Acid

茶油中的多酚是一種天然的抗氧化劑[1]，具有抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、抗病毒、神經(jīng)保護(hù)、防治心血管疾病等諸多藥理功能。茶多酚含量的測(cè)定對(duì)茶油品質(zhì)的評(píng)價(jià)具有重要的參考價(jià)值。茶油中酚類(lèi)物質(zhì)的測(cè)定方法主要有總酚含量測(cè)定和各酚類(lèi)組分含量測(cè)定。工業(yè)化生產(chǎn)的茶油，往往添加脂溶性酚類(lèi)抗氧化劑叔丁基羥基茴香醚（BHA）、3，5-二（七-丁基）-4-羥基甲苯（BHT）、特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）等[2]，以達(dá)到延長(zhǎng)保質(zhì)期的作用。這些酚類(lèi)物質(zhì)的存在將在很大程度上影響油中總酚含量的測(cè)定結(jié)果。各酚類(lèi)組分含量測(cè)定，往往需要以每種純組分作為對(duì)照品來(lái)測(cè)定各組分的含量，目前經(jīng)分離鑒定的茶多酚化合物高達(dá)400多種，測(cè)定每種茶多酚組分的含量工作量大而不切實(shí)際。以茶油中常見(jiàn)的天然酚類(lèi)物質(zhì)作為參考，進(jìn)行茶油酚類(lèi)物質(zhì)含量分析評(píng)價(jià)具有可行性。相關(guān)研究表明[3-5]，茶油中常見(jiàn)的多酚物質(zhì)有3，4-二羥基苯乙酸、沒(méi)食子酸、表兒茶素、槲皮素等，將上述酚類(lèi)物質(zhì)作為測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，具有實(shí)踐意義。國(guó)外對(duì)橄欖油中酚類(lèi)物質(zhì)含量測(cè)定方法包括液相色譜法、電泳法、氣相色譜法等，其中液相色譜法最為常見(jiàn)。國(guó)內(nèi)對(duì)茶油中酚類(lèi)物質(zhì)測(cè)定也主要通過(guò)液相色譜法[3-5]。本文建立了茶油中沒(méi)食子酸、表兒茶素、3，4-二羥基苯乙酸、槲皮素的液相色譜檢測(cè)方法，為茶油中酚類(lèi)物質(zhì)含量的檢測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 本實(shí)驗(yàn)中的6個(gè)樣品生產(chǎn)日期均為實(shí)驗(yàn)近3個(gè)月，精煉油購(gòu)于超市，毛油購(gòu)于各產(chǎn)地農(nóng)家作坊。樣品具體信息見(jiàn)表1。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 沒(méi)食子酸、3，4-二羥基苯乙酸、表兒茶素、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于源葉生物科技有限公司；甲醇、正已烷、乙酸乙酯、冰乙酸等購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 WATTERS 2695-2998高效液相色譜系統(tǒng)；資生堂CAPCELL PAK C18mgⅡ（4.6mm×250mm 5μm）色譜柱；METTLER AE250 電子分析天平；WATTERS 二醇基固相萃取小柱（Diol-SPE）（500mg，6mL）；島津SEP 5010型萃取真空裝置；METTLER Toledo FE20型pH計(jì)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置 準(zhǔn)確稱(chēng)取沒(méi)食子酸10.8mg、3，4-二羥基苯乙酸13.1mg、表兒茶素10.3mg、槲皮素 14.4mg，分別用甲醇定容至10mL，得到各標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取1.0mL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，用流動(dòng)相2%乙酸-甲醇（85∶15）定容至20mL得多酚混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。使用時(shí)用流動(dòng)相稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.4.2 茶多酚的提取 茶油中的多酚類(lèi)物質(zhì)含量較低，本研究用二醇基（Diol）固相萃取柱進(jìn)行樣品預(yù)處理。準(zhǔn)確稱(chēng)取茶油2.5g，溶于5mL正己烷中，分別用甲醇和正己烷各6mL活化固相萃取柱，將油溶液過(guò)柱，待樣品全部吸收后，分別用6mL正己烷和3mL正己烷一乙酸乙酯清洗柱子，最后用6mL甲醇洗柱，洗脫液室溫蒸干，殘留液用甲醇和水（1∶1）定容至2mL，0.45μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)[5]。

1.4.3 色譜條件 流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。流動(dòng)相：A：甲醇，B：0.2%的醋酸水溶液。梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 采用紫外二極管矩陣檢測(cè)器200～400nm全波段掃描，得到4種酚類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收?qǐng)D譜。如圖1所示，沒(méi)食子酸、3，4-二羥基苯乙酸、表兒茶素和槲皮素在280nm處均有較大吸收，因此選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。在該色譜條件下，4種酚類(lèi)物質(zhì)得到了很好的分離，各峰峰型尖銳，各酚類(lèi)物質(zhì)的出峰時(shí)間如圖2所示，出峰時(shí)間在6～33min，在較短時(shí)間內(nèi)能達(dá)到有效分離。

2.2 線性范圍與檢出限 分別移取標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.4.3色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以茶多酚的含量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制各酚類(lèi)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，這4種酚類(lèi)物質(zhì)在測(cè)定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。高效液相色譜儀最低響應(yīng)值S=3N（N為儀器噪音水平），以S/N=3所對(duì)應(yīng)的含量為檢出限，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 樣品回收率 取5號(hào)樣品3份，分別加入一定濃度的相應(yīng)酚類(lèi)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率和平均標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。由表4可知，4種酚類(lèi)物質(zhì)的回收率在80.5%～90.2%，RSD在5%左右（n=3），說(shuō)明樣品預(yù)處理過(guò)程損失較大，處理方法有待改進(jìn)。

2.4 樣品分析及結(jié)果 由表5可知，6個(gè)茶油樣品中酚類(lèi)物質(zhì)的種類(lèi)和含量差異較大，其中樣品4、5及6中酚類(lèi)物質(zhì)含量及種類(lèi)較多。這可能與茶油的加工方式有關(guān)，毛油加工步驟簡(jiǎn)單，對(duì)酚類(lèi)物質(zhì)的破壞較少。而精煉油經(jīng)過(guò)脫酸、脫色、除臭、去除水分以及除雜等一系列工藝后，其中的酚類(lèi)物質(zhì)氧化損失較大。4種酚類(lèi)中，沒(méi)食子酸最為常見(jiàn)，幾乎存在于所有樣品中，在食用油保藏過(guò)程中，沒(méi)食子酸通常作為一種抗氧化劑使用，在精煉油中的沒(méi)食子酸也有可能來(lái)自于生產(chǎn)過(guò)程添加。另外，槲皮素在6個(gè)樣品中也比較常見(jiàn)，該物質(zhì)具有袪痰、止咳、降低血壓等功效，是茶油中重要的活性物質(zhì)。3，4-二羥基苯乙酸只在2個(gè)樣品中出現(xiàn)，這可能與茶油籽產(chǎn)地品種及加工的方式有關(guān)。

3 討論

茶油中的多酚影響茶油的品質(zhì)、顏色、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，不同產(chǎn)地的茶油由于品種、土壤、氣候等原因造成茶多酚的組成和含量差別很大，而不同加工方式也會(huì)影響酚類(lèi)物質(zhì)的含量。通過(guò)比較，我們發(fā)現(xiàn)相比于精煉油，毛油中的酚類(lèi)物質(zhì)含量及種類(lèi)更為豐富些，這可能是由于精煉油在加工過(guò)程中酚類(lèi)物質(zhì)的氧化造成的。毛油雖然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量較為豐富，但也存在著農(nóng)藥殘留、重金屬污染等問(wèn)題，不適合大規(guī)模生產(chǎn)。從活性成分的保留方面來(lái)看，目前食用油的精煉方法以及保存方法值得進(jìn)一步的改進(jìn)和優(yōu)化。

參考文獻(xiàn)

[1]Yokozawa T，Nalc T，Kitanl K. Antioxidative Activity Of Green Tea Polyphenol in Chdestemlfed Ra[J].Agric Food Chem.2002，50（12）：3549-3552.

[2]凌關(guān)庭.食品添加劑手冊(cè)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1989：303.

[3]王進(jìn)英，鐘海雁.RP-HPLC內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定茶油中的7種酚類(lèi)物質(zhì)[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2014，29（09）：107-111.

[4]廖義秀. 茶油多酚分析及其抗氧化穩(wěn)定性研究[D].長(zhǎng)沙：中南林業(yè)科技大學(xué)，2013.

[5]羅凡，費(fèi)學(xué)謙，方學(xué)智，等.固相萃取/高效液相色譜法測(cè)定茶油中的多種天然酚類(lèi)物質(zhì)[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2011，30（06）：696-700.

（責(zé)編：張宏民）