汪露，劉芳，李輝

（新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆 烏魯木齊 830063）

臨床研究

布魯氏菌病患者中PD-1和PD-L1的表達(dá)特點(diǎn)分析

汪露，劉芳，李輝＊

（新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆 烏魯木齊 830063）

目的觀察布魯氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表達(dá)特點(diǎn)。方法選取我院2015年6月-2017年3月期間收治的53例布魯氏菌病患者（研究組）和同期來(lái)我院接受健康體檢的50例健康體檢者（對(duì)照組）作為研究對(duì)象，采集兩組對(duì)象血液標(biāo)本，檢測(cè)PD-1、PD-L1表達(dá)水平。再根據(jù)病程的不同將研究組患者分為急性期組和慢性期組，對(duì)比兩個(gè)亞組患者的PD-1、PD-L1表達(dá)水平。結(jié)果研究組的PD-1、PD-L1表達(dá)水平分別為（25.09±4.82）%、（48.52±6.69）%，高于對(duì)照組的（10.98±5.01）%、（20.17±3.50）%（P＜0.05）。急性期組的PD-1、PD-L1表達(dá)水平分別為（33.72±5.13）%、（54.43±6.80）%，高于慢性期組的（17.60±4.88）%、（42.39±6.38）%（P＜0.05）。結(jié)論布魯氏菌病的發(fā)生可導(dǎo)致血清PD-1和PD-L1明顯升高，且PD-1和PD-L1的表達(dá)水平會(huì)隨著病程變化而變化。

布魯氏菌病；PD-1；PD-L1；病程；表達(dá)特點(diǎn)

布魯氏菌病為布魯氏菌入侵生物體后所引起的一種細(xì)菌傳染病，人畜均可患病，具有臨床癥狀變化多樣、病程長(zhǎng)、并發(fā)癥多等特點(diǎn)，發(fā)生后可對(duì)患者身體健康和畜牧業(yè)發(fā)展造成寄到危害[1]。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究[2,3]證實(shí)，布魯氏菌病的發(fā)生與患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降存在明顯相關(guān)性。PD-1為免疫球蛋白超家族的一員，與PD-L1結(jié)合后能夠發(fā)揮免疫抑制作用，兩者表達(dá)變化能夠在一定程度上反映細(xì)胞免疫功能[4]。基于上述研究現(xiàn)狀，本研究對(duì)布魯氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表達(dá)特點(diǎn)進(jìn)行分析，現(xiàn)將研究?jī)?nèi)容進(jìn)行以下匯報(bào)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年6月-2017年3月期間收治的53例布魯氏菌病患者和通氣來(lái)我院接受健康體檢的50例健康體檢者，并分別設(shè)為研究組和對(duì)照組。研究組中，男性28例，女性25例，年齡21歲-70歲，平均年齡（43.94±4.32）歲，急性期患者24例，慢性期患者29例。對(duì)照組中，男性26例，女性24例，年齡19歲-75歲，平均年齡（43.86±4.27）歲。兩組研究對(duì)象的一般資料間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），本研究已獲取倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法 PD-1、PD-L1檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。采集兩組研究對(duì)象空腹外周血10 mL，應(yīng)用密度梯度法分離單個(gè)核細(xì)胞，使用PBS（磷酸緩沖鹽溶液）調(diào)節(jié)細(xì)胞密度，形成細(xì)胞混懸液，使細(xì)胞密度為每毫升1×107個(gè)，應(yīng)用CD3+和CD4+標(biāo)記PD-1、PD-L1。在每個(gè)反應(yīng)管中加入100 μL細(xì)胞混懸液進(jìn)行避光孵育，使用PBS洗滌兩次后將上清液去除，加入300 μL 1%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用流式細(xì)胞儀對(duì)CD3+和CD4+進(jìn)行計(jì)數(shù)，測(cè)定PD-1、PD-L1陽(yáng)性細(xì)胞占CD3+和CD4+細(xì)胞的比例即為PD-1、PD-L1的表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩組研究對(duì)象血清PD-1、PD-L1的表達(dá)水平以及研究組中急性期組和慢性期組兩個(gè)亞組患者的血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組、對(duì)照組血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平比較 研究組患者血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平均較對(duì)照組健康體檢者高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 研究組中兩個(gè)亞組患者的血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平比較 研究組中急性期組患者的血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平均較慢性期組患者高（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

布魯氏菌病的主要傳染源為動(dòng)物，傳播途徑較廣，包括呼吸道、消化道等，流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，伴隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，我國(guó)布魯氏菌病患者的發(fā)病率不斷上升，造成了多方面的負(fù)面影響。近年來(lái)，我國(guó)開(kāi)展了較多關(guān)于布魯氏菌病的病理學(xué)機(jī)制研究，旨在為該疾病的早期診斷和治療提供參考依據(jù)，但在研究方向上很少涉及細(xì)胞免疫學(xué)。

PD-1為程序性細(xì)胞死亡因子，同時(shí)也是一種跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，PD-L1為PD-1的配體。研究證實(shí)兩者在調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能中發(fā)揮著重要作用。本研究對(duì)布魯氏菌病患者血清PD-1、PD-L1的表達(dá)特點(diǎn)進(jìn)行分析，旨在通過(guò)該研究方向了解布魯氏菌病的免疫病理變化。研究發(fā)現(xiàn)免疫細(xì)胞表達(dá)的PD-L1、PD-1在結(jié)合后能夠使細(xì)胞內(nèi)的ITIM和ITSM發(fā)生酪氨酸殘基磷酸化，發(fā)揮抑制免疫細(xì)胞增殖的作用，當(dāng)機(jī)體免疫功能下降時(shí)，兩者在血清中的表達(dá)水平明顯上升。

表1 研究組、對(duì)照組血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平比較（Mean±SD）

表2 研究組中兩個(gè)亞組患者的血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平比較（Mean±SD）

本研究結(jié)果顯示布魯氏菌病患者的血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平明顯高于健康體檢者，布魯氏菌病急性期患者的血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平明顯高于處于疾病慢性期的患者。對(duì)上述研究結(jié)果進(jìn)行分析和總結(jié)，本研究得出布魯氏菌病的發(fā)生可對(duì)細(xì)胞免疫功能產(chǎn)生影響，導(dǎo)致血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平明顯升高，同時(shí)也提示我國(guó)臨床可根據(jù)血清PD-1、PD-L1表達(dá)水平輔助診斷布魯氏菌病和評(píng)估布魯氏菌病患者的治療效果。

[1]王師, 羅龍龍, 呂明, 等. PD-1/PD-L1信號(hào)通路及其在腫瘤中的應(yīng)用[J]. 國(guó)際藥學(xué)研究雜志, 2015, 11(2):143-147.

[2]吳勇, 張?zhí)煊? 宋瀏偉, 等. 抗PD-L1單抗的研制及其對(duì)乙型肝炎病毒的抑制效果初步研究[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志, 2016,32(7): 1004-1008, 1012.

[3]彭金美, 李登云, 郭娟娟, 等. 抗豬PD-L1分子的單克隆抗體制備及免疫學(xué)特性分析[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2013, 35(7):578-581.

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新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新基金項(xiàng)目（No.XYDCX201539）