趙 聰，程 晨，尹詩語，李 云，朱 燦，黃曉伶，陳貴堂*

基于亞鐵螯合能力的灰樹花蛋白酶解工藝優(yōu)化及其抗氧化活性

趙 聰，程 晨，尹詩語，李 云，朱 燦，黃曉伶，陳貴堂*

（中國藥科大學工學院，江蘇 南京 211198）

以灰樹花為原料，探究灰樹花蛋白亞鐵螯合肽的最佳制備條件，并對其抗氧化活性進行評價。從6 種蛋白酶中篩選出酶解最佳用酶，在此基礎上，以亞鐵螯合能力為響應值，進行單因素和正交試驗,同時研究了灰樹花蛋白亞鐵螯合肽對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、羥自由基的清除效果。結果表明，堿性蛋白酶酶解物的亞鐵螯合能力最強，在pH 9、加酶量1 800 U/g、酶解溫度55 ℃、底物質量濃度0.5 g/100 mL、酶解時間2.5 h的條件下，灰樹花蛋白亞鐵螯合肽的亞鐵螯合能力最強，可達1.854 mg/g，此時水解度為6.14%?；覙浠ǖ鞍讈嗚F螯合肽對DPPH自由基和羥自由基有較強的清除效果，且與多肽質量濃度呈正相關。結果顯示，灰樹花蛋白亞鐵螯合肽具有良好的亞鐵螯合能力，并具有較好的抗氧化活性，有望發(fā)展為新型的膳食補充劑。

灰樹花；酶解；多肽；亞鐵螯合能力；抗氧化

灰樹花（Grifola frondosa）屬擔子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、多孔菌屬中的一種大型食藥兩用真菌[1]，又名貝葉多孔菌、栗子蘑、重菇等，俗稱舞茸[2]。根據中國預防醫(yī)學科學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所檢測結果，灰樹花干品碳水化合物質量分數(shù)49.69%、蛋白質質量分數(shù)31.5%、粗纖維質量分數(shù)10.7%以及少量其他營養(yǎng)成分[3]。研究表明，灰樹花具有抗腫瘤[4-5]、抗病毒[6]、抗炎[7-8]、調節(jié)免疫[4-5]、調節(jié)血糖[9]等多種生物活性。但是對于灰樹花的研究多停留在多糖提取及其生物學功能方面，而對蛋白質及其衍生物的研究鮮見報道。

鐵是人體和其他動物體必需的微量元素，不僅是合成血紅蛋白、肌紅蛋白的主要原料，而且也是一系列在氧化還原反應過程中發(fā)揮重要作用酶的輔因子。此外它還參與氧的運輸、細胞呼吸、核酸合成等重要的生理活動，因此，鐵在維持機體健康中起著非常重要的作用。但由于食物含鐵量通常不高，植酸鹽等使鐵較難被吸收等原因，導致目前全球大約有29%的非孕期婦女，38%的孕期婦女和43%的6～59個月齡的兒童缺鐵[10]。根據2015年中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報告顯示，目前我國6 歲以上居民貧血率為9.7%，婦女特別是孕婦貧血率更高（孕婦貧血率為17.2%）。因此，改善鐵營養(yǎng)狀況，是迫切需要解決的問題。

大量研究表明[11-13]，小分子肽具有良好的金屬螯合活性，且具有抗氧化、抑菌等生物活性及易吸收、生物利用度高等特點。魚肉[12-13]、大豆[14]、大米[11]等天然蛋白來源的小分子肽亞鐵螯合物的制備及其生物活性也多有報道。實驗證明利用灰樹花子實體蛋白可控酶解制備抗氧化多肽時，發(fā)現(xiàn)灰樹花多肽具有很強的螯合Fe（Ⅱ）作用。本實驗對基于亞鐵螯合能力的灰樹花蛋白酶解工藝進行優(yōu)化，并評價了酶解多肽清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和羥自由基能力以及總還原能力，以期為今后灰樹花多肽的研究開發(fā)提供一定理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

灰樹花子實體由河北省遷西縣尚菌堂生物科技有限公司提供。

堿性蛋白酶（200 U/mg）、中性蛋白酶（14000 U/g）、胃蛋白酶（1∶15000）、復合蛋白酶（120 U/mg）、風味蛋白酶（20 U/mg）、菲啰嗪-鈉鹽 上海源葉生物有限公司；胰蛋白酶（2 500 U/g） 阿拉丁試劑公司；甲醛溶液 西隴科學股份有限公司；DPPH 阿法埃莎（中國）化學有限公司；氯化亞鐵、硫酸銅、硫酸鉀、鄰苯二甲酸氫鉀、30% H2O2溶液、鐵氰化鉀 南京化學試劑有限公司；氫氧化鈉、醋酸鈉、硫酸亞鐵 國藥集團化學試劑有限公司；無水乙醇 無錫市亞盛化工有限公司；無水碳酸鈉、水楊酸 上海凌峰試劑有限公司；試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

ATX224分析天平 日本島津公司；HH-42數(shù)顯恒溫攪拌循環(huán)水箱 常州國華電器有限公司；JJ-1A數(shù)顯測速電動攪拌器 金壇市白塔新寶儀器廠；RE-5205旋轉蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；DZF-6000系列電熱真空干燥箱、GZX-9070 MBE電熱鼓風干燥箱 上海博訊實業(yè)有限公司設備廠；KDN-08D凱氏定氮儀 上海新嘉電子有限公司；TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計北京普析通用儀器有限公司；LXJ-ⅡB型低速大容量多管離心機、TGL-16G型高速離心機 上海安亭科學儀器廠；PHS-3C型pH計 上海雷磁儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 原料處理

將干燥的灰樹花子實體用超微粉碎機粉碎后經300目篩分，制成灰樹花子實體超微粉。

1.3.2 灰樹花子實體蛋白提取

稱取90 g灰樹花子實體粉，按照料液比為1∶50（g/mL）加入蒸餾水，攪拌均勻后用1 mol/L NaOH溶液調節(jié)pH值至9，放入70 ℃恒溫水浴鍋中攪拌提取3 h，期間用1 mol/L NaOH溶液保持體系pH值恒定。結束后，冷卻至室溫，4 000 r/min離心20 min。上清液旋轉蒸發(fā)至原體積的1/2，用2 mol/L HCl溶液調pH值至3.5（灰樹花蛋白等電點），低溫靜置過夜，4 000 r/min離心25 min，傾去上清液，沉淀用95%乙醇溶液洗滌一次，真空干燥。粉碎，過60目篩，即得灰樹花子實體蛋白粉。經凱氏定氮法測定，該灰樹花蛋白粉中蛋白質質量分數(shù)為83.1%。

1.3.3 蛋白酶篩選

選取風味酶、復合蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶6 種蛋白酶進行酶解反應，以亞鐵螯合能力為指標篩選出水解灰樹花蛋白的最佳酶種類。準確稱取一定量灰樹花蛋白粉，按比例加入蒸餾水，調節(jié)各個酶的最適pH值后于最適溫度保溫10 min。按照加酶量為1 800 U/g分別加入6 種蛋白酶，分別酶解0.5、1、2、3、4、5 h，期間保持體系pH值恒定，95 ℃滅酶10 min結束反應。水解液4 000 r/min離心25 min，上清液定容至250 mL，4 ℃保存。每組酶解反應做3 次平行實驗，亞鐵螯合能力和水解度測定實驗平行進行3 次。

1.3.4 酶解條件優(yōu)化試驗

1.3.4.1 酶解條件單因素試驗

對影響酶解反應的pH值、加酶量、酶解溫度、底物質量濃度和酶解時間5 個因素按照1.3.3節(jié)所述方法分別進行探究，確定不同因素下酶解產物亞鐵螯合能力的高低。

1.3.4.2 酶解條件正交試驗

根據單因素試驗結果，對5 個因素按照L16（45）正交表（表1）進行正交試驗，以亞鐵螯合能力為響應值，優(yōu)化酶解工藝。

表1 正交試驗因素與水平Table 1 Levels of independent variables used in orthogonal array design

1.3.5 指標的測定

總氮含量參照凱氏定氮法[15]進行測定，氨基氮含量參照甲醛滴定法[16]進行測定，水解度[17]按公式（1）進行計算。

亞鐵螯合能力測定參照Guo Lingdong[12]和段秀[18]等的方法略加修改。取1 mL酶解液，依次加入5 mL蒸餾水，0.5 mL醋酸-醋酸鈉緩沖液（100 mmol/L，pH 5.5）和0.1 mL FeCl2溶液（2 mmol/L），混合均勻后30℃恒溫靜置30 min。再加入0.2 mL菲啰嗪-鈉鹽溶液（5 mmol/L），混勻，室溫放置10 min后，于562 nm波長處測定吸光度。按公式（2）、（3）計算水解液的亞鐵螯合能力。

式中：A蒸餾水為空白的吸光度；A樣品為樣品的吸光度；c為氯化亞鐵溶液濃度/（mmol/L）；V為氯化亞鐵體積/L；M為鐵原子摩爾質量/（g/mol）；K為稀釋倍數(shù)；m為蛋白質量/g。

1.3.6 抗氧化活性實驗

1.3.6.1 DPPH自由基清除效果測定

參照周瓊飛[19]和?ztürk[20]等的方法略加修改。分別取2 mL 0.0、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0 mg/mL的灰樹花蛋白亞鐵螯合肽溶液于10 mL離心管中，分別依次加入1 mL 0.2 mol/L 磷酸鹽緩沖液（pH 6.6），2 mL 0.1 mmol/L的DPPH溶液，混合搖勻，室溫下避光靜置30 min。4 000 r/min離心10 min，取上清液于517 nm波長處測定吸光度，每個樣品做3 個平行實驗，蒸餾水作為空白對照。同時用0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的VC溶液作陽性對照。DPPH自由基清除率按公式（4）進行計算。

式中：A0為樣品或VC溶液＋蒸餾水的吸光度；A1為樣品或VC溶液＋DPPH溶液的吸光度；A2為蒸餾水＋DPPH溶液的吸光度。

1.3.6.2 羥自由基清除效果測定

參考劉立品[21]方法，分別取2 mL 0.0、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0 mg/mL的灰樹花蛋白亞鐵螯合肽溶液于10 mL離心管中，依次加入3 mL蒸餾水、0.5 mL 6 mmol/L水楊酸溶液、0.5 mL 6 mmol/L FeSO4溶液、1 mL 6 mmol/L的H2O2溶液，混合搖勻，室溫下避光靜置30 min。8 000 r/min離心10 min，取上清液于510 nm波長處測定吸光度，每個樣品做3 個平行實驗，蒸餾水作為空白對照。同時用0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的VC溶液作陽性對照。羥自由基清除率按公式（5）進行計算。

式中：A1為樣品或VC溶液吸光度；A0為樣品或VC溶液＋蒸餾水的吸光度；A2為樣品溶液換成等量蒸餾水的吸光度。

1.3.6.3 總還原力測定

參考王雪芹[22]和張敏等[23]方法，取1 mL 0、2、4、6、8、10 mg/mL的多肽溶液于4mL離心管中，分別加入1 mL1%鐵氰化鉀溶液，1 mL 0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 6.60），50 ℃水浴20 min，快速冷卻，然后加入1 mL 10%三氯乙酸溶液終止反應，3 000 r/min離心10 min。取2 mL上清液，分別加入2 mL蒸餾水，1 mL 0.1%三氯化鐵溶液，混勻，靜置10 min，于700 nm波長處測定其吸光度，每個樣品做3 個平行。同時用0.00、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 mg/mL的VC溶液作對照。以吸光度表示其總還原能力，按公式（6）進行計算。

式中：A0為空白對照測定值；A1為多肽樣品或VC溶液測定值。

1.4 數(shù)據分析

2 結果與分析

2.1 蛋白酶的確定

由圖1可知，6 種蛋白酶中，堿性蛋白酶水解產物亞鐵螯合能力最強，胃蛋白酶亞鐵螯合能力最弱，因此，選用堿性蛋白酶作為水解用酶。堿性蛋白酶為非特異性蛋白酶，切割位點較為廣泛，主要集中在Glu、Leu、Lys、Tyr、Met等氨基酸殘基部位[24]。研究表明，Glu、Lys、Tyr、Cys和Asp等氨基酸具有較高金屬螯合活性，因此，堿性蛋白酶酶切肽段中Glu、Lys、Tyr等氨基酸含量較多，因此具有較高的螯合活性[12,14,24]。由圖2可見，在各個蛋白酶作用下，灰樹花蛋白的水解度隨酶解時間延長而增大。其中，中性蛋白酶和風味酶對灰樹花蛋白水解度的影響明顯大于其他4 種蛋白酶，水解度高達27.13%和15.12%，其他4 種酶對灰樹花蛋白的水解度最大值均在5%～10%內。綜合亞鐵螯合能力和水解度趨勢來看，亞鐵螯合能力并不隨水解度的增加而增加，水解度增大，生成的游離氨基酸增加，從而降低螯合活性。不同蛋白酶由于作用位點不同，產生的肽段分子質量、氨基酸組成、氨基酸序列均不相同，即使相同的水解度螯合能力也不盡相同。

圖1 6 種蛋白酶水解灰樹花蛋白反應中亞鐵螯合能力變化Fig. 1 Change in iron-chelating ability during hydrolysis with six proteases

圖2 6 種蛋白酶水解灰樹花蛋白反應中水解度變化Fig. 2 Change in degree of hydrolysis during hydrolysis with 6 proteases

2.2 單因素試驗結果

2.2.1 pH值對酶解效果的影響

圖3 pH值對亞鐵螯合能力和水解度的影響Fig. 3 Effect of pH value on iron-chelating ability and the degree of hydrolysis

由圖3可見，亞鐵螯合能力和水解度均隨pH值增大而呈現(xiàn)先增加后降低趨勢，最后在較高pH值下基本保持不變，二者具有一定的相關性。螯合能力在pH 8.5處達到最大值而水解度在pH 9時達到最大。較低的pH值會影響底物的解離狀態(tài)，酶解反應受到抑制[25]，水解度不高，不利于小分子活性肽的生成從而表現(xiàn)為較低的螯合活性。另一方面，堿性蛋白酶有其最適的pH值，過酸和過堿均會引起酶構象的改變，酶活力下降[26]，造成水解度的大小變化，影響水解物的螯合活性。因此取pH 8.5作為最佳pH值條件。

2.2.2 加酶量對酶解效果的影響

圖4 加酶量對亞鐵螯合能力和水解度的影響Fig. 4 Effect of enzyme dose on iron-chelating ability and the degree of hydrolysis

由圖4可知，隨著加酶量的增加水解度在不斷增大，而亞鐵螯合能力先增加后降低，在加酶量為1 800 U/g時達到最大。隨著酶量的增加，大分子灰樹花蛋白迅速地分解成小分子多肽，水解度增加。但當加酶量過高時，會有更多的可溶性多肽被水解成游離氨基酸，導致螯合活性降低[18]。另一方面，增加加酶量也會增加生產成本，由此確定最佳加酶量為1 800 U/g。

2.2.3 酶解溫度對酶解效果的影響

圖5 酶解溫度對亞鐵螯合能力和水解度的影響Fig. 5 Effect of temperature on iron-chelating ability and the degree of hydrolysis

由圖5可知，在45～55 ℃溫度范圍內，亞鐵螯合能力和水解度增加緩慢，當溫度高于55 ℃后，螯合能力與水解度均隨溫度升高而降低。這是因為，在較低溫度下隨著溫度升高反應速率加快，加快產物的生成，使得溶液中小分子肽含量增加，水解度和亞鐵螯合能力均有所增加。但當溫度高于堿性蛋白酶的最適溫度后，溫度升高造成酶的變性，使具有活力的酶數(shù)量減少[27]，生成的小分子肽減少，水解度和亞鐵螯合能力下降。因此選擇55 ℃作為酶解的最佳溫度條件。

2.2.4 底物質量濃度對酶解效果的影響

圖6 底物質量濃度對亞鐵螯合能力和水解度的影響Fig. 6 Effect of substrate concentration on iron-chelating ability and the degree of hydrolysis

由圖6可知，當?shù)孜镔|量濃度為0.5～1 g/100 mL時，水解度和亞鐵螯合能力基本保持不變，當?shù)孜镔|量濃度高于1 g/100 mL時，隨著底物質量濃度的增加水解度和亞鐵螯合能力逐漸降低，以此選擇1 g/100 mL作為酶解最佳底物質量濃度。底物質量濃度較低即固液比較大時，底物分散均勻，酶與底物充分接觸，產物生成較快，水解度和亞鐵螯合能力均保持在較高水平。增加底物質量濃度，水解液過于黏稠，不利于酶在水解液中的擴散，導致酶作用于相應位點受阻，造成水解度降低[28]，生成物減少，亞鐵螯合能力降低。

2.2.5 酶解時間對酶解效果的影響

圖7 酶解時間對亞鐵螯合能力和水解度的影響Fig. 7 Effect of hydrolysis time on iron-chelating ability and the degree of hydrolysis

由圖7可知，亞鐵螯合能力在1～1.5 h內隨時間延長而呈線性增加，但超過3 h后，螯合能力下降。隨著時間的延長，酶與底物接觸時間增多，反應不斷進行，水解度不斷增加，使得小分子肽被進一步水解為游離氨基酸，亞鐵螯合活性下降。因此，選擇3 h作為酶解最佳時間。

2.2.6 酶解條件的確定

根據單因素試驗結果，進行了L16（45）正交試驗，正交試驗極差分析見表2，方差分析見表3。由表2和表3可知，5 個因素對酶解效果的影響均顯著。極差R值反應各因素對酶解反應的影響大小。各因素對堿性蛋白酶水解灰樹花蛋白酶解效果的影響主次順序為D＞A＞C＞E＞B，即底物質量濃度＞pH值＞酶解溫度＞酶解時間＞加酶量，最佳酶解條件為A3B2C2D1E2，即堿性蛋白酶水解灰樹花蛋白最佳工藝條件為pH 9、加酶量1 800 U/g、酶解溫度55 ℃、底物質量濃度0.5 g/100 mL、酶解時間2.5 h。驗證實驗結果表明在最佳酶解條件下，亞鐵螯合能力為（1.854±0.025）mg/g，水解度為（6.14±0.05）%。

表2 酶解正交試驗設計及結果Table 2 Orthogonal array design with experimental results

表3 方差分析結果Table 3 Analysis of variance of regression model

2.3 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽抗氧化能力結果

2.3.1 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽對DPPH自由基清除效果

由圖8可知，隨著灰樹花蛋白亞鐵螯合肽質量濃度的增加，DPPH自由基清除率明顯增加，在多肽質量濃度為4 mg/mL時，清除率達92%。VC溶液對DPPH自由基清除率在質量濃度為0.2 mg/mL時即可達到最大值77%，此后清除效果基本不變。當多肽質量濃度高于3.2 mg/mL后，其清除率已高于VC，顯示出更好的清除DPPH自由基能力。

圖8 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽及VC溶液對DPPH自由基清除效果Fig. 8 DPPH radical scavenging capacity of Grifola frondosa peptides and VC

2.3.2 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽對羥自由基清除效果

圖9 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽及VC溶液對羥自由基清除效果Fig. 9 Hydroxyl radical scavenging capacity of Grifola frondosa peptides and VC

由圖9可知，灰樹花多肽對羥自由基的清除率與質量濃度呈正相關，在4 mg/mL時清除率達到99.5%。雖然VC溶液在0.6 mg/mL時羥自由基清除率已達到99%，表現(xiàn)出更強的羥自由基清除效果，但4 mg/mL時灰樹花多肽對羥自由基也具有較強的清除效果。

2.3.3 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽總還原力的測定

圖10 灰樹花蛋白亞鐵螯合肽及VC溶液對Fe3還原能力Fig. 10 Fe3+ reducing capacity of Grifola frondosa peptides and VC

研究表明[29]抗氧化物質一般通過自身的還原能力達到清除自由基的效果，還原能力強則樣品的抗氧化活性也強。還原能力越強，生成的有色物質越多，吸光度越大。由圖10可知，隨著VC溶液或灰樹花蛋白亞鐵螯合肽質量濃度的增加，吸光度升高，還原能力不斷增加。但VC溶液的還原能力較灰樹花多肽強。

3 結 論

本實驗先對6 種蛋白酶水解灰樹花蛋白進行篩選，得到酶解灰樹花蛋白最佳用酶為堿性蛋白酶。再通過單因素試驗，初步確定了5 種因素對堿性蛋白酶水解灰樹花蛋白水解度和亞鐵螯合能力的影響，最后通過正交試驗確定了以亞鐵螯合能力為指標的堿性蛋白酶水解灰樹花蛋白的最佳工藝條件為pH 9、加酶量1 800 U/g、酶解溫度55 ℃、底物質量濃度0.5 g/100 mL、酶解時間2.5 h。在此最佳酶解條件下，亞鐵螯合能力為（1.854±0.025）mg/g，水解度為（6.14±0.05）%，實驗重復性良好。亞鐵螯合能力與水解度呈現(xiàn)一定的相關性，當水解度為5%～10%范圍內時，亞鐵螯合能力普遍較高，水解度過高或過低均不利于與亞鐵的螯合，因此獲得一定分子大小的多肽具有顯著意義。此外，體外抗氧化實驗結果表明，灰樹花多肽具有良好的DPPH自由基和羥自由基清除能力并具有一定的還原能力，有望開發(fā)成為功能性食品配料。但由于酶解反應的復雜性，其產物的具體組成、結構等尚未清楚，仍需對灰樹花蛋白亞鐵螯合肽進行進一步分離純化和結構鑒定。

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Optimization of Enzymatic Preparation of Protein Hydrolysate from Fruiting Bodies of Grifola frondosa for Improved Ferrous Chelating Ability and Its Antioxidant Activity

ZHAO Cong, CHENG Chen, YIN Shiyu, LI Yun, ZHU Can, HUANG Xiaoling, CHEN Guitang*
(School of Engineering, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China)

In this study, we optimized the conditions for the enzymatic preparation of iron-chelating peptides from the fruiting bodies of Grifola frondosa and evaluated their antioxidant capacities. Six commercial proteases were screened for their suitability to hydrolyze Grifola frondosa protein, which was evaluated according to iron-chelating activity. Onefactor-at-a-time and orthogonal array designs were employed to optimize the hydrolysis conditions based on iron-chelating activity. Meanwhile, the antioxidant capacity was studied using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and hydroxyl radical scavenging assays. The results showed that peptides with the highest iron-chelating activity were obtained with alkaline protease. The optimal hydrolysis conditions were determined as follows: pH value, 9; alkaline protease dose, 1 800 U/g;temperature, 55 ℃; substrate concentration, 0.5 g/100 mL; and hydrolysis time, 2.5 h. Under these conditions, the ironchelating activity and the degree of hydrolysis were 1.854 mg/g and 6.14%, respectively. The prepared peptides showed scavenging activity against DPPH and hydroxyl radicals in a concentration-dependent manner. In addition, the peptides possessed good iron-chelating ability and antioxidant activities, and could thus hold promise as a novel dietary supplement.

Grifola frondosa; hydrolisis; peptides; iron-chelating activity; antioxidant activity

10.7506/spkx1002-6630-201802012

TS201.1

A

1002-6630（2018）02-0073-07

趙聰, 程晨, 尹詩語, 等. 基于亞鐵螯合能力的灰樹花蛋白酶解工藝優(yōu)化及其抗氧化活性[J]. 食品科學, 2018, 39(2):73-79.

10.7506/spkx1002-6630-201802012. http://www.spkx.net.cn

ZHAO Cong, CHENG Chen, YIN Shiyu, et al. Optimization of enzymatic preparation of protein hydrolysate from fruiting bodies of Grifola frondosa for improved ferrous chelating ability and its antioxidant activity[J]. Food Science, 2018, 39(2):73-79. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201802012. http://www.spkx.net.cn

2017-03-14

國家自然科學基金青年科學基金項目（31201344）；中國藥科大學中央高校基本科研業(yè)務費重點項目（2016ZZD001）；中國藥科大學藥學基地科研訓練及科研能力提高項目（J1310032）

趙聰（1992—），女，碩士研究生，研究方向為食品藥品分析。E-mail：873576548@qq.com

*通信作者簡介：陳貴堂（1977—），男，副教授，博士，研究方向為營養(yǎng)與功能食品學。E-mail：caucgt@163.com