李靈芝　應(yīng)曜宇

[摘要]目的：從行為學(xué)角度，觀察柚皮苷對(duì)轉(zhuǎn)基因果蠅阿爾茨海默?。ˋD）模型的影響。方法：采用Ga14/USA系統(tǒng)建立AB果蠅模型；連續(xù)給藥后進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察柚皮苷對(duì)AD果蠅壽命的影響。對(duì)照組和模型組培養(yǎng)基中加入等容積培養(yǎng)菌（酵母菌）后，給藥組分別給予20mm01/L和50mmol/L柚皮苷，抑制劑組分別給予20mmol/L柚皮苷、20mmol/L L-NAME和50mmol/L柚皮苷、40mmol/L L-NAME。通過爬行實(shí)驗(yàn)觀察柚皮苷對(duì)阿爾茨海默癥果蠅壽命的影響。結(jié)果：與對(duì)照組比較，模型組果蠅壽命明顯減少；與模型組相比，柚皮苷治療組能明顯增加果蠅壽命；與治療組相比，抑制劑組能顯著減少果蠅壽命。結(jié)論：柚皮苷對(duì)AD果蠅模型壽命具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與其激活eNOS表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]柚皮苷；阿爾茨海默??；eNOS；壽命

阿爾茲海默癥（Alzheimer's disease，AD）一種表現(xiàn)為認(rèn)知水平的進(jìn)行性障礙、記憶力的損害、精神行為的異常表現(xiàn)以及情感的障礙為特征的神經(jīng)退行性疾病，大腦皮質(zhì)彌漫性萎縮、神經(jīng)元的空泡缺失是AD的顯著病理特征，AD的主要致病因素是p一淀粉樣蛋白（Ap）在腦神經(jīng)元間過量沉積，不同途徑直接或間接誘導(dǎo)產(chǎn)生了相關(guān)癥狀。

大量的實(shí)驗(yàn)研究表明，黃烷酮類化合物對(duì)AD的治療有效。目前己有報(bào)道表明中藥單體柚皮苷，具有獨(dú)特的改善線粒體的功能障礙和較強(qiáng)的抗生物氧化的特性。

從行為學(xué)角度，研究黃烷酮類藥物柚皮苷對(duì)AD果蠅壽命的改善作用，并在AD中對(duì)柚皮苷抗氧化作用進(jìn)行機(jī)制初探，為治療AD提供更多藥物靶點(diǎn)。

1材料

1.1動(dòng)物

轉(zhuǎn)基因果蠅品系w1118，USA-AB42。

1.2藥物

柚皮苷，L-NAME（sigma公司）。

2方法

2.1AD

正常對(duì)照組使用果蠅品系w1118。致病性果蠅USA-AB42分別作為AD組、給藥組及抑制劑組使用。

2.2培養(yǎng)基制作

普通玉米培養(yǎng)基，加熱攪拌均勻后加0.5ml丙酸倒入高壓蒸汽滅菌后的培養(yǎng)瓶中，每瓶加入0.7g酵母粉。

2.3實(shí)驗(yàn)分組

本實(shí)驗(yàn)共設(shè)6組，包括實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、轉(zhuǎn)基因的AD果蠅模型組、AD+柚皮苷（20mmol/L）、AD+柚皮苷（50mmol/L）、AD+柚皮苷（20mmol/L）+抑制劑L-NAME（20mmol/L）、AD+柚皮苷（50mmol/L）+抑制劑L-NAME（40mmol/L）。

3結(jié)果

（1）與正常對(duì)照組比較，模型組平均壽命均顯著降低（P<0.001），藥物干預(yù)組果蠅平均壽命也降低（P<0.001），抑制劑組果蠅平均壽命也降低（P<0.001）。

（2）與AD果蠅模型組比較，低濃度的柚皮苷組果蠅的壽命提高（P<0.05），高濃度的柚皮苷組果蠅壽命明顯提高（P<0.001）。結(jié)果提示柚皮苷對(duì)AD果蠅的壽命具有一定的保護(hù)作用，且高濃度藥物實(shí)驗(yàn)證明保護(hù)效果越明顯。

（3）與低濃度柚皮苷組相比，低濃度藥物抑制劑L-NAME組果蠅壽命降低（P<0.05）。

（4）與高濃度柚皮苷組相比，高濃度藥物抑制劑L-NAME組果蠅壽命明顯地降低（P<0.001）。結(jié)果提示柚皮苷對(duì)AD果蠅壽命的保護(hù)作用可能是通過激活eNOS蛋白來實(shí)現(xiàn)的，如表1所示。

4討論

果蠅最早是作為遺傳學(xué)研究的工具之一，研究操作的難度要求不高。本研究中，壽命計(jì)數(shù)被采用來檢測果蠅壽命，在果蠅行為學(xué)研究中，該行為范式基礎(chǔ)且應(yīng)用廣泛。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，柚皮苷對(duì)AD果蠅壽命的保護(hù)作用可能是通過激活eNOS蛋白來實(shí)現(xiàn)的。在此之前一部分藥物在有很多相關(guān)報(bào)道被證實(shí)了對(duì)AD模型果蠅具有治療作用，但是柚皮苷相關(guān)AD治療作用以及該藥通過eNOS表達(dá)來發(fā)揮作用的相關(guān)報(bào)道未見。更進(jìn)一步的形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究還需要進(jìn)行以藥物及機(jī)制驗(yàn)證，以對(duì)其藥理作用進(jìn)行說明和分析，以為臨床阿爾茨海默病的治療提供更多的藥物選擇靶點(diǎn)。