丁兆猛 欒 雨

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定加替沙星滴眼液中加替沙星和羥苯乙酯的含量

丁兆猛1欒 雨2

目的建立高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定加替沙星滴眼液中加替沙星和羥苯乙酯的含量。方法采用Zorbax XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（60:40）為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)256 nm，柱溫：35 ℃。結(jié)果加替沙星濃度在2.98～29.8 μg/ml范圍內(nèi)與線性關(guān)系良好（r=0.9998），平均加樣回收率為99.03%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.86%（n=6）；羥苯乙酯濃度在3.26～32.6 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均加樣回收率為99.44%，RSD為1.02%（n=6）。結(jié)論HPLC操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可同時(shí)測(cè)定加替沙星和羥苯乙酯的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

加替沙星滴眼液；羥苯乙酯；高效液相色譜法

加替沙星是第四代氟喹諾酮類抗菌藥物，主要通過(guò)抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV發(fā)揮抑菌作用，其眼用制劑已廣泛應(yīng)用于敏感菌所致的急性細(xì)菌性結(jié)膜炎、角膜炎等治療中，臨床療效確切[1]。羥苯乙酯是一種常用的眼用制劑防腐劑，接觸眼睛可引起疼痛、刺激等不適反應(yīng)，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）規(guī)定羥苯乙酯的最大用量為0.05%[2]。因此，測(cè)定滴眼液中羥苯乙酯的含量應(yīng)作為其質(zhì)量控制指標(biāo)之一。本研究利用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定加替沙星滴眼液中加替沙星和羥苯乙酯的含量，具有操作簡(jiǎn)便快捷、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器美國(guó)Waters2695高效液相色譜儀；Waters2487紫外檢測(cè)器；WatersM32色譜工作站；瑞士METTLER AE-240型電子天平；JPCQ1028全數(shù)字超聲發(fā)生器（武漢嘉鵬電子有限公司）。

1.2 藥品與試劑加替沙星對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究所提供，批號(hào)：130518；羥苯乙酯對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究所提供，批號(hào)：100847；加替沙星滴眼液，鎮(zhèn)江威特藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號(hào)：150409、150820、151013，規(guī)格：0.30%:8 ml；乙腈為色譜純；磷酸為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液取適量加替沙星對(duì)照品，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相震蕩至溶解，再稀釋并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2 ml，置于100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含100 μg加替沙星的對(duì)照品溶液。另取羥苯乙酯對(duì)照品適量，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加水適量，在水浴中加熱至溶解，冷卻后加水稀釋并定容至刻度，搖勻，制成每毫升含1 mg羥苯乙酯的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液精密量取加替沙星滴眼液2 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，搖勻即得。

2.2 色譜條件色譜柱：Zorbax XDB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（60:40）；流速：1.0 ml/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20 μl。上述色譜條件下，加替沙星滴眼液樣品中其他成分對(duì)加替沙星和羥苯乙酯的測(cè)定無(wú)明顯干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 混合對(duì)照品溶液HPLC圖譜（1為加替沙星；2為羥苯乙酯）

2.3 線性條件及范圍分別精密量取加替沙星和羥苯乙酯對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml置于100 ml量瓶中，加替沙星對(duì)照品溶液加流動(dòng)相稀釋至刻度，羥苯乙酯對(duì)照品溶液加水稀釋至刻度，制備成加替沙星濃度分別為2.98、5.96、8.94、11.92、17.88、23.84、29.8 μg/ml和羥苯乙酯濃度分別為3.26、6.52、9.78、13.04、19.56、26.08、32.6 μg/L的系列對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液20 μl，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得加替沙星的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=26 091C+35，r=0.9998；羥苯乙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=10 052C+201，r=0.9999。結(jié)果表明，加替沙星和羥苯乙酯分別在2.98～29.8 μg/ml和3.26～32.6 μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)分別取2.1.1項(xiàng)下加替沙星和羥苯乙酯對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果顯示加替沙星和羥苯乙酯峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.07%和0.04%，表明選定色譜條件的精密度較好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)分別取制備好的同一加替沙星和羥苯乙酯樣品溶液，室溫放置，于0、2、4、6、12、18、24 h分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果顯示加替沙星和羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.13%和0.08%，表明加替沙星和羥苯乙酯溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的加替沙星和羥苯乙酯樣品溶液各6份，分別加入一定數(shù)量的對(duì)照品，按照選定色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，根據(jù)各自的線性方程計(jì)算相應(yīng)回收率，結(jié)果見(jiàn)表1-2。

表1 加替沙星加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 羥苯乙酯加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品測(cè)定精密量取不同批號(hào)的加替沙星滴眼液各3份，依法制備供試品溶液，按選定色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，按照內(nèi)標(biāo)法分別計(jì)算樣品中加替沙星的百分標(biāo)示量和羥苯乙酯含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

本研究采用HPLC同時(shí)測(cè)定加替沙星滴眼液中加替沙星和羥苯乙酯的含量，參照有關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，本試驗(yàn)曾比較過(guò)甲醇-0.008 mol/L磷酸鹽緩沖液-0.5 mol/L四丁基溴化銨溶液（45:55:0.6）、甲醇-乙腈-甲酸（15:15:70）以及乙腈-0.1%磷酸溶液（60:40）3種流動(dòng)相，3種流動(dòng)相中加替沙星與羥苯乙酯分離度均能達(dá)到要求，但前兩種流動(dòng)相中加替沙星有拖尾現(xiàn)象，第3種分離度更好，且保留時(shí)間比較適宜，故選擇第3種為流動(dòng)相。

樣品測(cè)定結(jié)果表明，鎮(zhèn)江威特藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的加替沙星滴眼液中羥苯乙酯的含量并未超出美國(guó)FDA規(guī)定的限量要求。該方法操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

[1]付晶晶.加替沙星的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2010,4(5):136-137.

[2]FDA.Inactive Ingredient Search for Approved Drug Products[EB/OL].[2013-08-13].http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/iig/index.cfm.

[3]陳一凡,趙謝她.高效液相色譜法測(cè)定加替沙星分散片中加替沙星的含量[J].廣州化工,2013,41(22):116-117.

[4]繆玉山,倪沖,倪桃,等.反相高效液相色譜法測(cè)定加替沙星膠囊中加替沙星及有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2003,20(6):503-505.

[5]陳曉紅,李小平,姚潯平.高效液相色譜法測(cè)定全血中加替沙星[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)),2009,45(1):4-6,10.

Simultaneous determination of gatifloxacin and ethylparaben in gatifloxacin eye drops by HPLC

Ding Zhaomeng Luan Yu

ObjectiveTo develop a HPLC method for the simultaneous determination of gatifloxacin and ethylparaben in gatifloxacin eye drops.MethodsThe PHLC was performed on Zorbax XDB-C18column(4.6 mm×150 mm,5μm).The mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid(60:40).The flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was 256 nm.ResultsThe linear range of gatifloxacin was 2.98～29.8 μg/ml(r=0.9998),the average recovery was 99.03%(n=6);The linear range of ethylparaben was 3.26～32.6 μg/L(r=0.9999),the average recovery was 99.44%(n=6).ConclusionHPLC is simple,accurate and repeatable.It can be applied to controlling the quality of gatifloxacin eye drops.

Gatifloxacin eye drops;Ethylparaben;HPLC

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.12.007

1江蘇省泰州市第四人民醫(yī)院，江蘇泰州 225300

2江蘇省鎮(zhèn)江市藥品檢驗(yàn)所，江蘇鎮(zhèn)江 212000