張靖宇，朱明珍，孫志超，吳艷，徐海燕（.連云港市第二人民醫(yī)院腫瘤化療科，江蘇連云港03；.連云港市第二人民醫(yī)院病理科，江蘇連云港 03）

IGF-1R和VEGFR2蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義Δ

張靖宇1＊，朱明珍1，孫志超2，吳艷1，徐海燕1（1.連云港市第二人民醫(yī)院腫瘤化療科，江蘇連云港222023；2.連云港市第二人民醫(yī)院病理科，江蘇連云港 222023）

目的：觀察胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體（IGF-1R）和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR2）蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)，并探討其臨床意義。方法：選擇2011年1月－2012年12月在我院行手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者98例，收集其腫瘤組織和癌旁組織，采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接法檢測(cè)其IGF-1R和VEGFR2蛋白的表達(dá)水平，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)兩者mRNA的表達(dá)水平；考察IGF-1R和VEGFR2蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的相關(guān)性，以及其對(duì)術(shù)后輔助化療患者4年無(wú)疾病生存率的影響。結(jié)果：結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中IGF-1R和VEGFR2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為66.3%和60.2%，而癌旁組織中均未見其表達(dá)，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腫瘤組織中IGF-1R mRNA和VEGFR2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于癌旁組織，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且兩者mRNA在腫瘤組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r＝0.729，P＜0.05）。IGR-1R蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、有無(wú)脈管癌栓形成無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）；VEGFR2蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓形成有關(guān)（P＜0.05）。98例結(jié)直腸癌患者中，14例患者術(shù)后未行化療；其余84例患者4年無(wú)疾病生存率為76.2%（64/84），其中IGF-1R蛋白陰性表達(dá)、VEGFR2蛋白陰性表達(dá)患者的4年無(wú)疾病生存率（82.8%、78.8%）均顯著高于其陽(yáng)性表達(dá)者（72.7%、74.5%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。采用多因素Logistic回歸分析對(duì)性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤部位、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓形成等因素進(jìn)行校正后，IGF-1R和VEGFR2蛋白的表達(dá)仍與患者4年無(wú)疾病生存率相關(guān)[校正比值比（OR）分別為2.31、2.15，95%置信區(qū)間分別為（0.57，4.15）、（0.45，4.03），P＜0.05]。結(jié)論：結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中IGF-1R和VEGFR2蛋白及mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且蛋白的表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素以及術(shù)后輔助化療患者的預(yù)后有關(guān)。兩者的聯(lián)合檢測(cè)可為結(jié)直腸癌患者的靶向治療提供參考。

結(jié)直腸癌；胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2；蛋白；mRNA；表達(dá)水平

我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率位列所有癌癥的第4位，且隨著居民飲食習(xí)慣的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病人數(shù)逐年增多[1]。胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體（Insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）是一種位于細(xì)胞膜上的酪氨酸激酶受體，由其配體[包括胰島素樣生長(zhǎng)因子（Insulin-like growth factor，IGF）1和2]激活，然后通過(guò)磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B（Phosphatidylinositol-3-kinase/Protein kinase B，PI3K/PKB）途徑和絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖和凋亡[2]。近期研究顯示，IGF相關(guān)信號(hào)通路異常與結(jié)直腸癌、胃癌和胰腺癌的發(fā)生關(guān)系密切[3]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（Vascular endothelial growth factor 2，VEGFR2）是VEGF通路的主要靶點(diǎn)，主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面，在腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用，且在結(jié)直腸癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，與患者腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)相關(guān)[4]。兩個(gè)靶點(diǎn)的下游信號(hào)通路（PI3K/PKB通路和MAPK通路）相似，具有發(fā)揮潛在聯(lián)合抗腫瘤作用的可能[5]。本研究收集了2011年1月－2012年12月我院98例結(jié)直腸癌患者的組織標(biāo)本，通過(guò)檢測(cè)其IGF-1R和VEGFR2的表達(dá)水平，分析蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征及其預(yù)后的相關(guān)性，以期為靶向治療尋找合適人群提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2011年1月－2012年12月在我院行手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者98例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)直腸腺癌；（2）手術(shù)前未行放化療；（3）經(jīng)輔助檢查證實(shí)無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）手術(shù)前合并有糖尿病、腸梗阻、貧血等疾病者；（2）合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；（3）合并血液系統(tǒng)疾病者；（4）肝腎功能嚴(yán)重?fù)p傷者；（5）合并心血管疾病者；（6）卡氏功能狀態(tài)評(píng)分＜70分者。98例患者中，男性57例，女性41例；年齡46～72歲，中位年齡57歲；右半結(jié)腸癌24例，左半結(jié)腸癌38例，直腸癌36例。腫瘤分期參照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)/國(guó)際抗癌聯(lián)盟（American Joint Committee on Cancer/Union for International Cancer Control，AJCC/UICC）分期系統(tǒng)第7版標(biāo)準(zhǔn)[6]。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，所有患者均自愿參加并簽署知情同意書。

1.2 材料

CX31P-OC-1型中性樹膠封片固定光鏡（日本奧林巴斯公司）；7900型實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)儀（美國(guó)ABI公司）；兔抗人IGF-1R多克隆抗體一抗（批號(hào)：BA0352）、兔抗人VEGFR2單克隆抗體一抗（批號(hào)：A00809）、生物素標(biāo)記二抗（批號(hào)：BS0213）均購(gòu)自武漢博士德生物有限公司；磷酸鹽緩沖液（Phosphate buffer saline，PBS，pH＝7.4，批號(hào)：c0221A）、0.1%焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbonare，DEPC）水（批號(hào)：R0021）、3，3′-二氨基聯(lián)苯胺（3，3′-diaminobenzidine，DAB）辣根過(guò)氧化物酶顯色試劑盒（批號(hào)：P0202）、檸檬酸鹽抗原修復(fù)液（批號(hào)：P0081）和蘇木素染色液（批號(hào)：C0107）均購(gòu)自江蘇海門碧云天生物技術(shù)公司；Trizol試劑盒（美國(guó)Invitrogen公司，批號(hào)：15596-026）；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體（美國(guó)Abnova公司，批號(hào)：H00002597-M01A）；TakaRa RNA PCR Kit Ver.3.0試劑盒（大連寶生物有限公司，批號(hào)：RR019A）；SuperReal Probe（美國(guó)Kalang公司，批號(hào)：KL087）；ROX熒光染料（美國(guó)Gene Tex公司，批號(hào)：GTX88327-PEP）；其余試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 IGF-1R和VEGFR2蛋白表達(dá)水平的檢測(cè) 收集98例患者的腫瘤組織，按照隨機(jī)數(shù)字表法選取40例患者的癌旁組織（距離腫瘤組織至少5 cm，經(jīng)鏡檢病理證實(shí)為未被腫瘤細(xì)胞侵襲的正常結(jié)直腸黏膜組織），以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶（Streptavidin-perosidase，SP）連接法測(cè)定兩種組織中IGR-1R和VEGFR2蛋白的表達(dá)水平。具體操作過(guò)程如下：用10%中性福爾馬林固定組織標(biāo)本，以石蠟常規(guī)包埋并切片，用二甲苯及乙醇梯度脫水，檸檬酸鹽抗原修復(fù)液修復(fù)抗原；滴加一抗，于4℃下孵育過(guò)夜，標(biāo)本取出后于37℃烤箱中孵育1 h，用PBS沖洗3次；滴加生物素標(biāo)記二抗，于37℃下孵育30 min，以DAB顯色，蘇木素復(fù)染。經(jīng)乙醇梯度脫水后，于中性樹膠封片固定光鏡下觀察染色結(jié)果。同時(shí)，采用ImagePro Plus 6.0病理圖像分析軟件（美國(guó)Media Cybernetics公司）分析并計(jì)算每張切片及每個(gè)視野的光密度值。以腫瘤細(xì)胞呈黃色或棕黃色為IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)，以腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)淺黃至棕黃色顆粒為VEGFR2陽(yáng)性表達(dá)，每張切片按照隨機(jī)數(shù)字法選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，采用半定量-積分法計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)率，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[7]，即以陽(yáng)性細(xì)胞染色深度為判定標(biāo)準(zhǔn)——0分：未見染色，1分：輕度染色，2分：中度染色，3分：深度染色；以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例為判定標(biāo)準(zhǔn)——0分：0～5%，1分：6%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分：＞75%。將上述2項(xiàng)結(jié)果相乘，其中得分0～4為陰性表達(dá)，5～12為陽(yáng)性表達(dá)。陽(yáng)性表達(dá)率＝陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/（陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)+未染色細(xì)胞數(shù)）×100%。

1.3.2 IGF-1R和VEGFR2 mRNA表達(dá)水平的檢測(cè) 使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)儀、采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RTPCR）法定量檢測(cè)腫瘤組織和癌旁組織中IGF-1R和VEGFR2 mRNA的表達(dá)水平。根據(jù)Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）中的基因表達(dá)序列，采用Primer Premier 5.0引物設(shè)計(jì)軟件（美國(guó)PremierBiosoft公司）設(shè)計(jì)引物。IGF-1R上游引物：5′-ACAGAGATGAGGACAACGCC-3′，下游引物：5′-TGTCTCTACTCCTGTTGCGG-3′；VEGFR2上游引物：5′-GGTACTGGTGGAGTATGATAG-3′，下游引物：5′-CCATGACCACCTCATACTACT-3′；GAPDH上游引物：5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′；下游引物：5′-GGGTGGAATCATATTGGAAC-3′。根據(jù)Trizol試劑盒說(shuō)明書提取組織中的總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。IGF-1R和VEGFR2 mRNA的PCR反應(yīng)體系（20 μL）均含2×SuperReal Probe 10 μL，上、下游引物各0.6 μL，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物4 μL，50×ROX熒光染料2 μL，DEPC水2.8 μL。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性15 min；95℃變性10 s，50℃退火30 s，72 ℃延伸30s，共45個(gè)循環(huán)。采用熔解曲線評(píng)估PCR結(jié)果（熔解曲線峰形單一則表明特異性良好）。以GAPDH為內(nèi)參，以正常結(jié)腸組織作為對(duì)照樣本，按2－ΔΔCt法計(jì)算目標(biāo)mRNA的相對(duì)表達(dá)量，ΔΔCt＝ΔCt待測(cè)樣本－ΔCt對(duì)照樣本（其中，ΔCt＝Ct目標(biāo)基因－Ct內(nèi)參基因；Ct值表示每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)）[8]。

1.3.3 隨訪 所有患者每3個(gè)月定期復(fù)查1次，2年后每半年復(fù)查1次，復(fù)查內(nèi)容包括體格、腫瘤標(biāo)志物和腸鏡檢查等，必要時(shí)行CT檢查。末次隨訪時(shí)間為2016年12月。通過(guò)我院病案書寫系統(tǒng)檢索患者的復(fù)發(fā)時(shí)間（若無(wú)法通過(guò)系統(tǒng)檢索，則電話聯(lián)系患者或其家屬），計(jì)算術(shù)后行輔助化療者的4年無(wú)疾病生存率（無(wú)疾病生存率＝未復(fù)發(fā)人數(shù)/術(shù)后行輔助化療者的總數(shù)×100%）。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，兩兩比較采用SNK法。采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)；采用多因素Logistic回歸分析控制IGF-1R、VEGFR2蛋白表達(dá)與患者4年無(wú)疾病生存率相關(guān)性的混雜因素（性別、年齡等）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤組織與癌旁組織中IGF-1R和VEGFR2蛋白表達(dá)水平比較

腫瘤組織中IGF-1R蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為66.3%，主要定位于腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中（見圖1A）；而癌旁組織中未見IGF-1R蛋白的表達(dá)；兩者IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腫瘤組織中VEGFR2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為60.2%，主要定位于腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，少數(shù)可見于基質(zhì)血管內(nèi)皮（見圖1B）；而癌旁組織中未見VEGFR2蛋白的表達(dá)；兩者VEFGR2陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 腫瘤組織和癌旁組織中IGF-1R和VEGFR2 mRNA表達(dá)水平比較

腫瘤組織和癌旁組織中IGF-1R mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.93±0.04和0.14±0.03，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝1.902，P＜0.05）；VEGFR2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為1.02±0.02和0.78±0.08，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝2.001，P＜0.05）。Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示，腫瘤組織中IGF-1R mRNA與VEGFR2 mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r＝0.729，P＝0.009）。

圖1 結(jié)直腸癌組織中IGF-1R和VEGFR2蛋白的表達(dá)（×200）Fig 1 Expression of IGF-1R and VEGFR2 protein in colorectal cancer tissue（×200）

2.3 IGF-1R和VEGFR2蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的相關(guān)性

IGF-1R蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、有無(wú)脈管癌栓形成無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與其腫瘤組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。VEGFR2蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與其腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓形成有關(guān)（P＜0.05），詳見表1。

表1 IGF-1R和VEGFR2蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的相關(guān)性[例（%%）]Tab 1 Relationship of protein expression of IGF-1R and VEGFR2 with clinical pathological features of colorectal cancer patients[case（%%）]

2.4 結(jié)直腸癌組織IGF-1R和VEGFR2蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪發(fā)現(xiàn)有14例患者未行輔助化療；其余84例患者均于術(shù)后行含奧沙利鉑、氟尿嘧啶、亞葉酸鈣的方案化療，其4年無(wú)疾病生存率為76.2%（64/84）。84例患者中，IGF-1R蛋白陽(yáng)性表達(dá)55例，陰性表達(dá)29例，IGF-1R蛋白陰性表達(dá)患者的4年無(wú)疾病生存率（82.8%，24/29）顯著高于陽(yáng)性表達(dá)者（72.7%，40/55），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝3.504，P＜0.05）；VEGFR2蛋白陽(yáng)性表達(dá)51例，陰性表達(dá)33例，VEGFR2陰性表達(dá)患者的4年無(wú)疾病生存率（78.8%，26/33）也顯著高于陽(yáng)性表達(dá)者（74.5%，38/51），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝4.982，P＜0.05）。采用多因素Logistic回歸分析對(duì)性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤部位、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓形成等因素進(jìn)行校正后，IGF-1R和VEGFR2蛋白的表達(dá)仍與患者的4年無(wú)疾病生存率相關(guān)[IGF-1R：校正比值比（OR）＝2.31，95%置信區(qū)間（CI）（0.57，4.15），P＝0.02；VEGFR2：校正OR＝2.15，95%CI（0.45，4.03），P＝0.04]。

3 討論

IGF-1R是一個(gè)由2個(gè)α亞基和2個(gè)β亞基組成的四聚體蛋白，α亞基位于胞外區(qū)域，可與IGF特異性結(jié)合；而β亞基具有一個(gè)穿膜結(jié)構(gòu)，其膜內(nèi)區(qū)存在酪氨酸激酶催化亞單位及磷酸化位點(diǎn)。IGF-1R是促癌信號(hào)通路的一個(gè)中心激活點(diǎn)，在與IGF1或IGF2配體結(jié)合后，IGF-1R可啟動(dòng)自身磷酸化，進(jìn)而激活包括MAPK信號(hào)通路在內(nèi)的DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)，導(dǎo)致腫瘤增殖加快[9]；同時(shí)還可與Bcl-2、Bax、Ku70/80等蛋白作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的凋亡[10]。最近一項(xiàng)研究表明，IGF-1R還可通過(guò)激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（Signal transducers and activators of transcription 3，STAT3）調(diào)節(jié)結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞的自我更新和上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化[11]。IGF-1R蛋白陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、調(diào)亡及轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果提示，IGF-1R蛋白及mRNA在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，且IFR-1R蛋白的表達(dá)水平與腫瘤組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及術(shù)后輔助化療患者的預(yù)后有關(guān)，與大部分報(bào)道結(jié)果基本一致[12-14]，筆者認(rèn)為可能與結(jié)直腸癌細(xì)胞中IGF-1R mRNA表達(dá)水平升高，進(jìn)而提高蛋白表達(dá)水平、促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)[15]。而Ding J等[16]的研究并未發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸腺癌中IGF-1R蛋白表達(dá)與腫瘤部位及分期的相關(guān)性，可能與受試患者的選擇差異有關(guān)。

血管生成是一個(gè)包括新生血管發(fā)芽、分割和現(xiàn)有血管重構(gòu)的復(fù)雜生理過(guò)程。VEGF/VEGFR信號(hào)通路是最被認(rèn)可的促血管生成途徑之一。VEGFR2廣泛分布于糖尿病、高血壓及腫瘤等多種疾病組織中，是VEGF的主要功能受體，兩者結(jié)合后可形成二聚體，誘導(dǎo)酪氨酸發(fā)生自身磷酸化，激活信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，通過(guò)增加鈣離子流、產(chǎn)生凝血酶等反應(yīng)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的功能，促進(jìn)新生血管形成并保持其完整性；同時(shí)，該通路的激活還與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等有關(guān)，其機(jī)制可能與激活蛋白激酶C，隨后激活Raf-1，進(jìn)而活化MAPK信號(hào)通路有關(guān)[4，17-18]。本研究結(jié)果提示，VEGFR2蛋白及mRNA在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，且VEGFR2蛋白的表達(dá)水平與腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓形成以及術(shù)后輔助化療患者的預(yù)后有關(guān)，與文獻(xiàn)[4]的結(jié)果基本一致。而劉躍暉等[17]報(bào)道VEGFR2的高表達(dá)與結(jié)直腸癌中浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，而與腫瘤部位無(wú)關(guān)，筆者認(rèn)為結(jié)論上的差異可能與本研究腫瘤部位分類更細(xì)化有關(guān)。

相關(guān)研究表明，IGF-1R可調(diào)節(jié)腫瘤血管及淋巴管的形成，阻斷IGF-1R的表達(dá)，可降低VEGF水平，并減少腫瘤細(xì)胞內(nèi)血管的生成，提高抗VEGF治療的效果；此外，在缺氧導(dǎo)致抗VEGF治療失敗的情況下，IGF-1R的表達(dá)水平亦有所升高，提示兩者的表達(dá)可能相關(guān)[19-20]。本研究也證實(shí)了IGF-1R mRNA和VEGFR2 mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，兩者的聯(lián)合檢測(cè)可為結(jié)直腸癌患者的靶向治療提供參考。如Zhang W等[21]的研究指出結(jié)直腸癌組織標(biāo)本中VEGFR2的表達(dá)可能與貝伐珠單抗的臨床獲益有關(guān)；Sclafani F等[22]報(bào)道IGF-1R mRNA可能作為IGF-1R單克隆抗體療效的預(yù)測(cè)因子；Sanderson MP等[23]的研究證明IGF-1R抑制劑（BI885578）除可選擇性抑制IGF2過(guò)表達(dá)結(jié)直腸癌腫瘤的生長(zhǎng)外，還可增強(qiáng)抗VEGF治療的抗癌效果。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中IGF-1R和VEGFR2的蛋白及mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌的組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)，同時(shí)還與術(shù)后行含奧沙利鉑、氟尿嘧啶、亞葉酸鈣的方案化療患者的預(yù)后相關(guān)。兩者的聯(lián)合檢測(cè)可為晚期結(jié)直腸癌患者的靶向治療提供參考。但本研究樣本量偏小，且未考察術(shù)后未行輔助化療者的預(yù)后情況，可能導(dǎo)致研究結(jié)果產(chǎn)生一定的偏倚，有待后續(xù)研究的進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1]Ciombor KK，Wu C，Goldberg RM.Recent therapeutic advances in the treatment of colorectlal cancer[J].Annu Rev Med，2014，66：83-95.

[2]King H，Aleksic T，Haluska P，et al.Can we unlock the potential of IGF-1R inhibition in cancer therapy？[J].Cancer Treat Rev，2014，40（9）：1096-1105.

[3]Jin M，Long ZM，Yang J，et al.Correlations of IGF-1R and COX-2 expressions with Ras and BRAF genetic mutations，clinicopathologicalfeaturesand prognosisof colorectal cancer patients[J].Pathol Oncol Res，2017，24（3）：1-13.

[4]Abajo A，Bitarte N，Zarate R，et al.Identification of colorectal cancer metastasis markers by an angiogenesis-related cytokine-antibody array[J].World J Gastroenterol，2012，18（7）：637-645.

[5]Shen Y，Zeng L，Novosyadlyy R，et al.A bi-functional antibody-receptor domain fusion protein simultaneously targeting IGF-IR and VEGF for degradation[J].MAbs，2015，7（5）：931-945.

[6]Chen VW，Hsieh MC，Charlton ME，et al.Analysis of stage and clinical/prognostic factors of colon and rectal cancer from SEER registries：AJCC and collaborative stage data collection system[J].Cancer，2014，doi：10.1002/cncr.29056.

[7]Liu JJ，Druta M，Shibata D，et al.Metabolic syndrome and colorectal cancer：is hyperinsulinemia/insulin reecptormediated angiogenesis a critcal process？[J].J Geriatr Oncol，2014，5（1）：40-48.

[8]Livak KJ，Schmittgen TD.Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2[-delta deltaC（T）]method[J].Methods，2001，25（4）：402-408.

[9]Peruzzi F，Prisco M，Morrione A，et al.Anti-apopotic signaling of the insulin-like growth factor-1 receptor through mitochondrial translocation of c-Raf and Nedd4[J].J Biol Chem，2001，276（28）：25990-25996.

[10]Priola L，Zerzaihi O，Vidal H，et al.Protein acetylation mechanisms in the regulation of insulin and insulin-like growth factor 1 signalling[J].Mol Cell Endocrinol，2012，362（1/2）：1-10.

[11]Yao C，Su L，Shan J，et al.IGF/STAT3/NANOG/slug signaling axis simultaneously controls epithelial-mesenchymal transition and stemness maintenance in colorectal cancer[J].Stem Cells，2016，34（4）：820-831.

[12]唐軍朋，郭淑芹，張?jiān)屏?，?結(jié)直腸癌組織中IGF-1R、IGFBP-3的表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014，30（2）：149-152.

[13]陳吉添，陳瑜，吳薇紫，等.結(jié)腸癌組織中IGF-ⅠR和COX-2的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2016，32（6）：620-625.

[14]Wu XY，Wu ZF，Cao QH，et al.Insulin-like growth factor receptor-1 overexpression is associated with poor response of rectal cancers to radiotherapy[J].World J Gastroenterol，2014，20（43）：16268-16274.

[15]Liu R，Hu LL，Sun A，et al.mRNA expression of IGF-1 and IGF-1R in patients with colorectal adenocarcinoma and type 2 diabetes[J].Arch Med Res，2014，45（4）：318-324.

[16]Ding J，Li C，Tang J，et al.Higher expression of proteins in IGF/IR axes in colorectal cancer is associated with type 2 diabetes mellitus[J].Pathol Oncol Res，2016，22（4）：773-779.

[17]劉躍暉，賓捷，李介秋，等.VEGF和VEGFR2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2016，30（2）：448-450.

[18]楊軍，陳明清，董堅(jiān).VEGF/VEGFR2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在抗腫瘤血管生成中的作用[J].世界華人消化雜志，2007，15（34）：3611-3616.

[19]Li H，Adachi Y，Yamamoto H，et al.Insulin-like growth factor-Ⅰreceptor blockade reduces tumor angiogenesis and enhances the effects of bevacizumab for a human gastric cancer cell line，MKN45[J].Cancer，2011，117（14）：3135-3147.

[20]Li ZJ，Ying XJ，Chen HL，et al.Insulin-like growth fac-tor-1 induces lymphangiogenesis and facilitates lymphatic metastasis in colorectal cancer[J].World J Gastroenterol，2013，19（43）：7788-7794.

[21]Zhang W，Azuma M，Lurje G，et al.Molecular predictors of combination targeted therapies（cetuximab，bevacizumab）in irinotecan-refractory colorectal cancer（BOND-2 study）[J].Anticancer Res，2010，30（10）：4209-4217.

[22]Sclafani F，Kim TY，Cunningham D，et al.A randomized phaseⅡ/Ⅲ study of dalotuzumab in combination with cetuximab and irinotecan in chemorefractory，KRAS wild-type，metastatic colorectal cancer[J].J Natl Cancer Inst，2015，doi：10.1093/jnci/djv258.

[23]Sanderson MP，Hofmann MH，Garin-Chesa P，et al.The IGF1R/INSR inhibitor BI 885578 selectively inhibits growth of IGF2-overexpressing colorectal cancer tumors and potentiates the efficacy of anti-VEGF therapy[J].Mol Cancer Ther，2017，doi：10.1158/1535-7163.

Expression and Clinical Significance of IGF-1R and VEGFR2 Protein in Colorectal Cancer Tissue

ZHANG Jingyu1，ZHU Mingzhen1，SUN Zhichao2，WU Yan1，XU Haiyan1（1.Dept.of Tumor Chemotherapy，Lianyungang Second People’s Hospital，Jiangsu Lianyungang 222023，China；2.Dept.of Pathology，Lianyungang Second People’s Hospital，Jiangsu Lianyungang 222023，China）

江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)臨床科技發(fā)展基金項(xiàng)目（No.JLY20140133）

＊主治醫(yī)師，博士。研究方向：胃腸道腫瘤的個(gè)體化治療。電話：0518-85775172。E-mail：zjy201510@163.com

OBJECTIVE：To observe the expression of IGF-1R and VEGFR2 in colorectal cancer tissue，and to explore its clinical significance.METHODS：Totally 98 colorectal cancer patients underwent surgery were selected from our hospital during Jan.2011-Dec.2012.The tumor tissue and paracancerous tissue were collected.The expression of IGF-1R and VEGFR2 protein were detected by immunohistochemical SP method.The mRNA expression of both were detected by RT-PCR.The correlation of the expression of IGF-1R and VEGFR2 protein with clinical pathological characteristics of colorectal cancer patients were investigated，and its effects on 4-year disease-free survival rate of postoperative assisted chemotherapy patients were also investigated.RESULTS：The positive rates of IGF-1R and VEGFR2 protein expression in colorectal cancer tissue were 66.3%and 60.2%respectively，but their expression was not found in paracancerous tissue，with statistical significance（P＜0.05）.Relative expression of IGF-1R mRNA and VEGFR2 mRNA in tumor tissue were significantly higher than paracancerous tissue，with statistical significance（P＜0.05）.There was positive correlation between their mRNA expression in tumor tissue（r＝0.729，P＜0.05）.The expression of IGR-1R protein was independent from patient’s gender and age，tumor location and formation of vascular tumor thrombus（P＞0.05）；but it was associated with the histological grading，depth of invasion and lymph node metastasis（P＜0.05）.The expression of VEGFR2 protein had nothing to do with patient’s gender and age（P＞0.05），but it was associated with tumor location，histological grading，depth of invasion，lymph node metastasis，and formation of vascular tumor thrombus（P＜0.05）.Among 98 colorectal cancer patients，14 patients didn’t underwent chemotherapy after surgery；and 4-year disease-free survival rate of other 84 patients was 76.2%（64/84）.Four-year disease-free survival rates of TGF-1R protein negative expression and VEGFR2 protein negative expression patients（82.8%，78.8%）were significantly higher than those of positive expression patients（72.7%，74.5%），with statistical significance（P＜0.05）.The multiple factor Logistic regression analysis was used to correct gender，age，histological grading，tumor location，depth of invasion，lymph node metastasis，and formation of vascular tumor thrombus；the expression of IGR-1R and VEGFR2 protein were still associated with 4-year disease-free survival rate[adjusted OR were 2.31，2.15；95%CI were（0.57，4.15），（0.45，4.03）；P＜0.05].CONCLUSIONS：The expression of IGF-1R，VEGFR2 protein and mRNAs increase significantly in colorectal cancer tissue；the protein expression is associated with histological grading，depth of invasion，lymph node metastasis and the prognosis of postoperative assisted chemotherapy patients.Their examination can provide reference for target therapy for colorectal cancer patients.

Colorectal cancer；IGF-1R；VEGFR2；Protein；mRNA；Expression

R735.3+5；R735.3+7

A

1001-0408（2017）35-4901-06

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.35.02

2017-01-24

2017-09-05）

（編輯：張?jiān)拢?/p>