何周桃 徐燦霞 韓向陽 陳益耀

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院消化內(nèi)科，湖南 長(zhǎng)沙 410013)

益生菌對(duì)非酒精性脂肪性肝病患者細(xì)胞因子表達(dá)及腸道菌群的影響

何周桃1徐燦霞 韓向陽1陳益耀1

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院消化內(nèi)科，湖南 長(zhǎng)沙 410013)

目的探討益生菌對(duì)非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者細(xì)胞因子及腸道菌群的影響及益生菌治療NAFLD的療效。方法選取NAFLD患者70例，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為常規(guī)治療(A)組和聯(lián)合治療(B)組各35例。A組予多烯磷脂酰膽堿膠囊，B組予多烯磷脂酰膽堿膠囊聯(lián)合口服枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊。另納入同期于該院體檢者40例為對(duì)照(NC)組。比較3組間一般指標(biāo)、腸道菌群、雙歧桿菌/大腸桿菌(B/E)值、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、胰島素抵抗(IR)指數(shù)(HOMA-IR)、白細(xì)胞介素(IL)-18、干擾素(IFN)-γ及IL-10水平。結(jié)果治療前A、B組WC、BMI，TC、TG、HOMA-IR、ALT、AST、IL-18及IFN-γ水平均顯著高于NC組，而腸道菌群數(shù)、B/E及IL-10水平明顯低于NC組(P<0.05)；治療后A、B組以上各指標(biāo)水平均有改善，除B/E外，B組以上各指標(biāo)改善均比A組更明顯(P<0.05)。結(jié)論NAFLD患者血脂代謝絮亂、轉(zhuǎn)氨酶及IR異常、腸道菌群及機(jī)體抗炎/促炎因子失調(diào)，益生菌可有效改善以上狀態(tài)。

非酒精性脂肪肝??；腸道菌群；白細(xì)胞介素-18；干擾素-γ

目前肥胖、高脂血癥、胰島素抵抗(IR)等基礎(chǔ)疾病的發(fā)生率呈逐年上升趨勢(shì)，也是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的重要誘因〔1〕。有研究報(bào)道〔2〕，益生菌可以直接補(bǔ)充NAFLD患者機(jī)體腸道益生菌，從而維護(hù)腸道微生物平衡。本研究在多稀磷脂酰膽堿膠囊基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上加用枯草桿菌腸球菌二聯(lián)活菌膠囊對(duì)NAFLD患者進(jìn)行治療，探究其對(duì)患者血清細(xì)胞因子表達(dá)及腸道菌群的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月至2015年12月于海南省人民醫(yī)院門診和住院的NAFLD患者70例，納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2010年修訂的NAFLD診療指南診斷標(biāo)準(zhǔn)〔3〕，無飲酒史或飲酒折合乙醇量<140 g/w(女性<70 g/w)；影像學(xué)表現(xiàn)符合脂肪性肝病影像學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝功能失代償者及自身免疫性肝病患者；合并糖尿病、高血壓、冠心病等慢性病者；妊娠期或哺乳期婦女；合并惡性腫瘤患者；營(yíng)養(yǎng)不良等其他因素所致的脂肪肝者；病毒性肝炎、藥物性肝病、全胃腸外營(yíng)養(yǎng)、肝豆?fàn)詈俗冃?、自身免疫性肝病等可?dǎo)致脂肪肝的特定疾病；近2 w使用過抗生素、治療性微生態(tài)調(diào)節(jié)劑、激素類制劑及其他可能影響腸道菌群的制劑者。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為常規(guī)治療(A組)35例，男20例，女15例；年齡48～74〔平均(63.02±10.73)〕歲；病程3～6〔平均(5.02±2.73)〕年。聯(lián)合治療(B組)35例，男18例，女17例；年齡47～75〔平均(62.11±10.41)〕歲；病程3～7〔平均(4.59±2.19)〕年。另選同期于我院體檢者40例為對(duì)照(NC)組，男27例，女13例，年齡44～72〔平均(61.30±11.02)〕歲。3組年齡、性別比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，A、B組病程亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)，研究對(duì)象均知情同意。

1.2研究方法 A組予多稀磷脂酰膽堿膠囊〔賽諾安萬特(北京)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20059010〕，456 mg/次，口服，3次/d。B組予多稀磷脂酰膽堿膠囊聯(lián)合口服枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊(北京韓美藥品有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20030087)，500 mg/次，口服，2次/d。兩組療程均為1個(gè)月。

1.3觀察指標(biāo) 一般資料：測(cè)量研究對(duì)象身高、腰圍(WC)，計(jì)算體重指數(shù)(BMI)。腸道菌群檢測(cè)：分別于治療前后留取新鮮糞便，應(yīng)用細(xì)菌16SrDNA熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)雙歧桿菌與大腸桿菌數(shù)量，并計(jì)算雙歧桿菌/大腸桿菌(B/E)值。B/E≥1表示腸道定植抗力正常；B/E<1表示腸道定植抗力降低，菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂。血清指標(biāo)：分別于治療前后取晨空腹靜脈血5 ml，待凝固后以3 000 r/min離心10 min，分離血清-20℃保存?zhèn)溆?。釆用全自?dòng)生化分析儀(日立)檢測(cè)總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FIns)。采用穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估IR指數(shù)(HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FIns(mIU/L)/22.5。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清白細(xì)胞介素(IL)-18、干擾素(IFN)-γ及IL-10(試劑盒由上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司提供)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.13組一般資料及生化指標(biāo)比較 A、B組治療前WC、BMI、TC、TG、HOMA-IR、ALT及AST均顯著高于NC組(P<0.05)，治療后，A、B組以上各指標(biāo)均顯著降低，且B組顯著低于A組(均P<0.05)，見表1。

2.23組腸道菌群檢測(cè)結(jié)果比較 A、B組治療前雙歧桿菌數(shù)、大腸桿菌數(shù)及B/E均顯著低于NC組(P<0.05)，治療后A、B組雙歧桿菌、大腸桿菌數(shù)及B/E均顯著高于治療前，且B組雙歧桿菌、大腸桿菌數(shù)明顯高于A組(均P<0.05)。見表2。

2.33組血清IL-18、IFN-γ、IL-10水平比較 A、B組治療前血清IL-18、IFN-γ水平均顯著高于NC組，IL-10顯著低于NC組(P<0.05)；治療后A、B組IL-18、IFN-γ水平均顯著低于治療前，IL-10顯著高于治療前(P<0.05)，且B組改善較A組更明顯(P<0.05)，見表3。

表1 3組一般資料及生化指標(biāo)比較

與NC組比較:1)P<0.05；與同組治療前比較:2)P<0.05;與A組治療后比較:3)P<0.05，下表同

表2 3組腸道菌群檢測(cè)結(jié)果比較(log拷貝數(shù)/克濕糞

表3 3組血清IL-18、IFN-γ、IL-10比較

3 討 論

腸道菌群由500～1 000種不同菌屬組成，主要有桿菌和硬壁菌，而腸道微生物由1 013～1 014個(gè)微生物細(xì)胞組成，是人類整個(gè)基因組的100多倍〔4〕。有文獻(xiàn)報(bào)道，NAFLD患者腸道菌群明顯失衡，腸道黏膜屏障滲透性增加，從而造成內(nèi)毒素血癥、細(xì)菌易位、小腸細(xì)菌過度生長(zhǎng)〔5，6〕。而腸道免疫應(yīng)答可促進(jìn)炎性細(xì)胞因子分泌，從而加重肝臟損傷。輔助性T細(xì)胞(Th)可分為Th1、Th2等亞群，不同亞群的功能亦不相同。Th1主要分泌IL-2、IL-18、IFN-γ、腫瘤壞死因子(TNF)-α等細(xì)胞因子，參與細(xì)胞免疫。Th2主要分泌IL-4、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，參與體液免疫。臨床研究顯示，NAFLD可誘導(dǎo)TNF、IL-1和IL-6等細(xì)胞因子表達(dá)，介導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞的活化，導(dǎo)致促炎因子/抗因子分泌失衡。此外，IFN-γ、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)β、IL-8、IL-10等細(xì)胞因子過表達(dá)，還可反過來促進(jìn)肝臟炎癥和纖維化發(fā)生，從而形成惡性循環(huán)〔7〕。

本研究說明NAFLD患者脂代謝紊亂、轉(zhuǎn)氨酶及IR水平異常，經(jīng)過治療后均有改善，但是加用枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊可以更有效改善血脂代謝，降低轉(zhuǎn)氨酶及IR水平。研究提示NAFLD患者出現(xiàn)腸道菌群失調(diào)。在多稀磷脂酰膽堿膠囊治療基礎(chǔ)上聯(lián)合枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊，可顯著提高NAFLD患者腸道雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)量，提示枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊有益于NAFLD患者腸道菌群失調(diào)的恢復(fù)。

IFN-γ作為多活性細(xì)胞因子，主要激活巨噬細(xì)胞和誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。Zwolak等〔8〕研究顯示，NAFLD可誘發(fā)機(jī)體外周血自然殺傷(NK)T細(xì)胞比例變化，其數(shù)量增加可誘導(dǎo)肝臟中其他單核細(xì)胞向Th1極化，從而促使IFN-γ表達(dá)上調(diào)，與本研究結(jié)果一致。而枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊聯(lián)合多稀磷脂酰膽堿膠囊治療可明顯拮抗NAFLD所致的IFN-γ表達(dá)上調(diào)，其效果優(yōu)于單純多稀磷脂酰膽堿膠囊治療(P<0.05)。IL-18作為炎癥趨化因子，主要由活化的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，而在肝臟主要由枯否氏細(xì)胞產(chǎn)生，具有趨化和激活中性粒細(xì)胞功能，促進(jìn)中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶及活性氧化代謝產(chǎn)物生成，誘發(fā)炎癥因子趨化，從而產(chǎn)生炎性反應(yīng)〔9〕。本研究中，NAFLD患者血漿IL-18水平較正常對(duì)照升高，與歐陽清等〔10〕研究結(jié)果一致；IL-18的水平隨肝細(xì)胞受損程度的加重而增加，同時(shí)與TG水平呈正相關(guān)，與程勇等〔11〕的研究結(jié)果一致。而枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊聯(lián)合多稀磷脂酰膽堿膠囊治療可明顯拮抗NAFLD所致的IL-18表達(dá)上調(diào)，患者獲益效果優(yōu)于單純多稀磷脂酰膽堿膠囊治療(P<0.05)。IL-10是機(jī)體中最強(qiáng)的抗炎因子，可反饋性抑制多種細(xì)胞因子的釋放，從而促使免疫應(yīng)答趨于平穩(wěn)。Nishitani等〔12〕研究表明IL-10具有積極的抗炎癥作用，可阻止NASH的發(fā)生。IL-10還可以抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB的活性，從而減輕肝內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和肝內(nèi)水腫〔13，14〕。故上調(diào)機(jī)體IL-10表達(dá)對(duì)緩解肝臟炎癥反應(yīng)具有積極作用。本研究結(jié)果顯示，枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊聯(lián)合多稀磷脂酰膽堿膠囊治療可明顯上調(diào)NAFLD所致的IL-10表達(dá)下降。

綜上，益生菌能糾正血脂代謝、轉(zhuǎn)氨酶及IR水平，調(diào)整腸道菌群平衡，預(yù)防致病菌在腸黏膜表面的定植，同時(shí)可以調(diào)控機(jī)體抗炎/促炎因子平衡，從而介導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)，進(jìn)而在NAFLD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

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R575.5

A

1005-9202(2017)23-5878-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.060

1 海南省人民醫(yī)院消化內(nèi)科

徐燦霞(1961-)，女，博士，主任醫(yī)師，主要從事幽門螺桿菌相關(guān)疾病研究。

何周桃(1980-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事脂肪肝、炎癥性腸病研究。

〔2017-06-10修回〕

(編輯 王一涵)