俞 楨 盧永超

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦科，浙江 杭州 310006)

卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

俞 楨1盧永超

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦科，浙江 杭州 310006)

目的探討埃茲蛋白(Ezrin)、樁蛋白(Paxillin)及CD44在卵巢癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。方法選取卵巢癌組織120例，良性卵巢腫瘤組織100例，正常卵巢組織100例，應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)不同組織中Ezrin、Paxillin及CD44蛋白的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44的相關(guān)性。結(jié)果卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44的陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織(均P<0.05)。Ezrin、Paxillin陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌手術(shù)病理分期及腹水轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與分化程度、病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05)；CD44陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌手術(shù)病理分期、分化程度及腹水轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05)。Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，卵巢癌組織Ezrin的陽(yáng)性表達(dá)率與Paxillin及CD44的陽(yáng)性表達(dá)率呈正相關(guān)(Rs=0.843，0.672；均P<0.05)。結(jié)論臨床上可通過檢測(cè)Ezrin、Paxillin及CD44蛋白表達(dá)明確患者病情惡化情況。

卵巢癌；埃茲蛋白(Ezrin)；樁蛋白(Paxillin)；CD44

有報(bào)道顯示，大約75%的卵巢癌患者確診時(shí)已處于晚期，喪失了治療的最佳時(shí)機(jī)〔1〕。埃茲蛋白(Ezrin)在介導(dǎo)細(xì)胞骨架運(yùn)動(dòng)、黏附和細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮重要作用，與腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系〔2〕。樁蛋白(Paxillin)是一種重要的細(xì)胞黏附分子，在腫瘤細(xì)胞黏附、遷移中發(fā)揮重要作用〔3〕。而CD44是一種重要的跨膜糖蛋白，參與細(xì)胞的黏附和遷移，與腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲關(guān)系密切〔4〕。本研究旨在探討卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2012年2月至2016年2月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院收集的卵巢癌組織120例，良性卵巢腫瘤組織100例，正常卵巢組織100例，均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：先天性卵巢異常者，術(shù)前經(jīng)放、化療及免疫治療者。其中卵巢癌患者年齡34～73〔平均(54.2±10.3)〕歲，國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)-手術(shù)病理分期(2003年版)：Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期88例；分化程度：低分化41例，中分化55例，高分化24例；病理類型：卵巢漿液性癌63例，卵巢黏液性癌20例，卵巢透明細(xì)胞癌19例，混合細(xì)胞癌18例；存在腹水轉(zhuǎn)移71例，無(wú)腹水轉(zhuǎn)移49例。良性卵巢腫瘤患者年齡36～74〔平均(54.4±10.4)〕歲。正常卵巢組織者年齡35～75〔平均(54.6±10.3)〕歲。3組一般資料比較無(wú)顯著差異(P>0.05)，存在可比性。

1.2研究方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)不同組織中Ezrin、Paxillin及CD44蛋白表達(dá)情況。主要試劑包括濃縮型鼠抗人Ezrin單克隆抗體(NewoM2aekers公司生產(chǎn))，鼠抗人Paxillin單克隆抗體(武漢博士德公司生產(chǎn))，即用型CD44單克隆抗體(福州邁新試劑公司生產(chǎn))。具體步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行，包括梯度酒精脫水、磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗、高溫?zé)峥乖迯?fù)、PBS沖洗、加入生物學(xué)一抗過夜、加入生物學(xué)二抗、梯度酒精水化、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、二甲苯封片等過程，完成檢測(cè)后在顯微鏡下觀察。并采用已知的陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照采用PBS液代替。

1.3評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 所有切片在400倍高倍鏡下觀察，參考Mathew的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)〔5〕進(jìn)行判定，(1)Ezrin、Paxillin結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：均在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，且呈棕黃色顆粒。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占比情況進(jìn)行分級(jí)，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞占比<50%為弱陽(yáng)性，≥50%為陽(yáng)性。陽(yáng)性表達(dá)率=(弱陽(yáng)性+陽(yáng)性)/總例數(shù)×100%。(2)CD44結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，且呈棕色顆粒。根據(jù)高倍鏡視野中所見陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞占比進(jìn)行判定：<10%為陰性，≥10%為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1不同卵巢組織中Ezrin、Paxillin及CD44表達(dá)比較 卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織(均P<0.05)。見表1。

表1 不同卵巢組織中Ezrin、Paxillin及CD44表達(dá)比較〔n(%)〕

與正常卵巢組織比較：1)P<0.05；與良性卵巢腫瘤組織比較：2)P<0.05

2.2Ezrin、Paxillin、CD44與卵巢癌的臨床病理學(xué)參數(shù)分析 Ezrin、Paxillin陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌手術(shù)病理分期及腹水轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與分化程度、病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05)。CD44陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌手術(shù)病理分期、分化程度及腹水轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 Ezrin、Paxillin、CD44與卵巢癌的臨床病理學(xué)參數(shù)分析〔n(%)〕

2.3卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44表達(dá)的相關(guān)性 卵巢癌組織Ezrin的陽(yáng)性表達(dá)率與Paxillin及CD44的表達(dá)陽(yáng)性率呈正相關(guān)(Rs=0.843，0.672;均P<0.05)。

3 討 論

卵巢癌是婦科腫瘤中病死率最高的惡性腫瘤，且發(fā)病早期具有較強(qiáng)的隱匿性，臨床上一直缺乏早期有效的診斷，待到相關(guān)癥狀明顯時(shí)，通常已是中晚期〔6〕。

本研究結(jié)果表明，Ezrin、Paxillin及CD44均在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用。Ezrin的臨床表達(dá)具有相對(duì)的組織及細(xì)胞特異性，主要在維持細(xì)胞生存及形態(tài)方面發(fā)揮獨(dú)特作用，同時(shí)可通過和腫瘤細(xì)胞表面黏附分子產(chǎn)生作用，從而對(duì)腫瘤細(xì)胞的分化、侵襲及轉(zhuǎn)移造成影響〔7〕。Paxillin可通過和整合素發(fā)生作用，從而形成細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)黏附部位，同時(shí)與多種信號(hào)蛋白與結(jié)構(gòu)蛋白相互作用，進(jìn)一步參與細(xì)胞形態(tài)變化、運(yùn)動(dòng)、黏附及侵襲的過程，從而對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移產(chǎn)生調(diào)控作用〔8〕。CD44屬于跨膜糖蛋白，主要是在細(xì)胞的黏附及遷移過程中發(fā)揮重要作用，且在多種存在侵襲及轉(zhuǎn)移的腫瘤中顯著表達(dá)〔9〕。此外，本研究結(jié)果表明，在臨床治療卵巢癌過程中可通過抑制Ezrin的表達(dá)或?qū)ζ浠钚赃M(jìn)行有效控制，可能有效控制病情穩(wěn)定，甚至好轉(zhuǎn)。因此，Ezrin可能成為未來抗腫瘤疾病的有效生物靶點(diǎn)之一。另外，卵巢癌患者的Paxillin表達(dá)水平可在一定程度上反映病情嚴(yán)重程度。Paxillin可通過調(diào)控下游的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)表達(dá)，從而刺激ERK信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)一步共同作用促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致病情的惡化〔10〕。因此，對(duì)Paxillin表達(dá)進(jìn)行有效控制，亦可能成為臨床治療卵巢癌的有效途徑之一。本文結(jié)果還提示CD44參與了卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程，其表達(dá)水平可反映患者病情的嚴(yán)重情況。CD44屬于多功能細(xì)胞表面黏附分子，亦是透明質(zhì)酸的受體，可通過對(duì)腫瘤細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)合能力產(chǎn)生影響，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。由此，臨床治療中通過抑制CD44的表達(dá)，可能有效防止卵巢癌的侵襲及轉(zhuǎn)移，為卵巢癌的治療提供了新的思路〔11〕。Ezrin、Paxillin及CD44可能通過不同的方式共同參與了卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移，這對(duì)開展卵巢癌分子靶向治療提供了新的思路。

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R73

A

1005-9202(2017)23-5854-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.048

1 紹興市上虞人民醫(yī)院婦科

盧永超(1979-)，男，博士，副教授，主要從事婦科腫瘤研究。

俞 楨(1982-)，女，在讀碩士，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤研究。

〔2017-05-11修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)