許宏俊，周春山，黃楚麗，陳蘭香

（廣東普寧華僑醫(yī)院，廣東 揭陽 515300）

高血壓伴頸動(dòng)脈粥樣硬化患者血清ANGPTL2的表達(dá)及臨床價(jià)值

許宏俊，周春山，黃楚麗，陳蘭香

（廣東普寧華僑醫(yī)院，廣東 揭陽 515300）

目的探索高血壓患者血清血管生成素樣蛋白2（ANGPTL2）水平與頸動(dòng)脈粥樣硬化（CAS）斑塊、頸動(dòng)脈中膜厚度（IMT）之間的關(guān)系。方法 自2014年6月～2015年6月，選擇我院127例高血壓患者和59例健康體檢者作為研究對象。收集各自的血清標(biāo)本并采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測血清中ANGPTL2的水平。頸動(dòng)脈粥樣硬化程度根據(jù)斑塊風(fēng)險(xiǎn)高低及IMT厚度來進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果 根據(jù)斑塊風(fēng)險(xiǎn)高低分為無斑塊組（47例）、低風(fēng)險(xiǎn)斑塊組（38例）及高風(fēng)險(xiǎn)斑塊組（42例）；根據(jù)IMT厚度分T1組（＜0.9 mm，46例）、T2組（0.9～1.1 mm，44例）、T3組（＞1.1 mm，37例）。吸煙史（P=0.042）和總膽固醇（P=0.029）與高風(fēng)險(xiǎn)斑塊顯著相關(guān)；總膽固醇（P＜0.001）、低密度脂蛋白（P=0.018）、甘油三酯（P=0.026）和尿酸（P=0.011）與IMT厚度顯著相關(guān)。高血壓患者血清ANGPTL2水平顯著高于健康對照者（1944.8±195.3比979.7±155.3，P＜0.001）；不同斑塊風(fēng)險(xiǎn)組及IMT厚度組患者與對照組血清ANGPTL2水平有顯著差異（均P＜0.001），且隨斑塊風(fēng)險(xiǎn)升高及IMT變厚，血清ANGPTL2表現(xiàn)逐漸升高趨勢。Spearman相關(guān)性分析顯示血清ANGPTL2水平和總膽固醇（r=0.468，P=0.016）、甘油三酯（r=0.551，P＜0.001）和低密度脂蛋白（r=0.527，P＜0.001）正相關(guān)。結(jié)論 血清中ANGPTL2的表達(dá)水平同高血壓患者血脂指標(biāo)密切相關(guān)，其水平的改變可一定程度反映頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展。

頸動(dòng)脈粥樣硬化；高血壓；血管生成素樣蛋白2；血清

頸動(dòng)脈粥樣硬化（CAS）的形成是一種慢性炎癥過程，貫穿于脂質(zhì)條紋的出現(xiàn)到斑塊的形成的全過程，它已被確定為缺血性腦血管疾病的高危因素[1]。血管生成素樣蛋白（ANGPTL）是近年來發(fā)現(xiàn)的與血管發(fā)生關(guān)系緊密的糖蛋白，目前研究發(fā)現(xiàn)主要由內(nèi)臟脂肪細(xì)胞表達(dá)分泌的血管生成素樣蛋白2（ANGPTL2）在調(diào)節(jié)脂肪組織慢性炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝等過程均發(fā)揮重要作用[2-3]；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)高水平的ANGPTL2可以明顯增加動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積[4]。目前高血壓患者血清ANGPTL2同頸動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)系的研究尚無權(quán)威文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究將基于血清層面對ANGPTL2與CAS斑塊形成及頸動(dòng)脈中膜厚度（IMT）之間的關(guān)系進(jìn)行探索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年6 月～2015年6月間選擇就診于我院的伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化的原發(fā)性高血壓患者127例為研究對象，其中男性72例，女性55例，平均年齡（61±13.8）歲，年齡31～77歲。所選患者均符合我國2010年修訂版的高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)?；颊呷脒x標(biāo)準(zhǔn)需排除繼發(fā)性高血壓、各種慢性炎癥、腫瘤、急性冠脈綜合征及免疫系統(tǒng)疾病等。另選取同期我院健康體檢者59名作為對照組，其中男35例，女24例，年齡30～75歲，平均年齡（57.89±11.3）歲。血糖、血脂及肝腎功能等均無明顯異常。本研究通過我院倫理委員會(huì)審核，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1）樣本收集

收集所有研究對象清晨空腹時(shí)外周靜脈血液標(biāo)本。本院檢驗(yàn)科測定血清血糖、尿酸、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白等指標(biāo)含量。另外每個(gè)研究對象再留取全血約4 mL，4℃促凝管下保存2 h后，3000 r/min×10 min條件下進(jìn)行血清分離，去沉淀，取上層血清轉(zhuǎn)移至信的1.5 mL無酶EP管內(nèi)，保存于-80℃冰箱內(nèi)，待測ANGPTL2含量。

2）頸動(dòng)脈超聲檢查

患者取仰臥位，頭部向后仰并偏于檢測面對側(cè)，以充分暴露檢查區(qū)域。采用PHILIPS IE33彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率7～12 MHz。依次取縱斷和橫斷切面，由下到上依次探查頸總動(dòng)脈、頸動(dòng)脈竇部、頸外及頸內(nèi)動(dòng)脈顱外段。仔細(xì)探查管腔狹窄和斑塊形成情況，尤其要注意斑塊部位、表面特征及回聲特點(diǎn)等。我們界定血管內(nèi)表面光滑，無突起定義為無斑塊；表面平滑規(guī)則、等回聲、高回聲的鈣化的斑塊定義為低風(fēng)險(xiǎn)斑塊；而對于那些表面明顯不規(guī)則低回聲、混合回聲的斑塊定義為高風(fēng)險(xiǎn)斑塊。IMT厚度測量選取頸總動(dòng)脈后壁的內(nèi)-中膜最厚區(qū)域測量內(nèi)膜內(nèi)表面至中層表面間的距離。一般選擇理想測量部位是頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)端距離分叉部1 cm處，注意測量時(shí)候避開有斑塊的部位。根據(jù)測量的IMT值分為三分位數(shù)，分別為T1組（＜0.9 mm）、T2組（0.9～1.1 mm）和T3組（＞1.1 mm）。

3）血清ANGPTL2含量的檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測血清中ANGPTL2的水平。實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析是采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行。計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間比較采取t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)。率的比較采取卡方檢驗(yàn)、等級資料運(yùn)用秩和檢驗(yàn)。運(yùn)用秩相關(guān)的Spearman方法分析ANGPTL2和血糖、血脂等指標(biāo)間的相關(guān)性。P＜0.05為兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同斑塊風(fēng)險(xiǎn)、頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度的CAS患者臨床資料特點(diǎn)

本研究所有對象根據(jù)斑塊風(fēng)險(xiǎn)和IMT將127例患者分別分為三組，結(jié)果顯示吸煙史（P=0.042）、總膽固醇（P=0.029）尿酸（P=0.033）和斑塊風(fēng)險(xiǎn)程度間顯著相關(guān)；而IMT厚度差異同總膽固醇（P＜0.001）、低密度脂蛋白（P=0.018）、甘油三酯（P=0.026）及尿酸（P=0.011）等血清指標(biāo)水平顯著相關(guān)。未發(fā)現(xiàn)年齡、性別、體重指數(shù)及糖尿病史等因素與斑塊風(fēng)險(xiǎn)、IMT厚度之間的相關(guān)性。見表1。

表1 以斑塊風(fēng)險(xiǎn)及IMT為標(biāo)準(zhǔn)分組的臨床資料特點(diǎn)

2.2 不同斑塊風(fēng)險(xiǎn)、IMT厚度和血清ANGPTL2水平的關(guān)系

本研究實(shí)驗(yàn)組高血壓患者血清ANGPTL2的含量顯著高于健康對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1944.8±191.4比979.7±155.3，P＜0.001）。不同的斑塊風(fēng)險(xiǎn)組血清水平比較：無斑塊組、低風(fēng)險(xiǎn)及高風(fēng)險(xiǎn)斑塊組均顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；其中低風(fēng)險(xiǎn)和高風(fēng)險(xiǎn)斑塊組較無斑塊組血清含量要高，高風(fēng)險(xiǎn)組與低風(fēng)險(xiǎn)組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同理，不同IMT厚度血清水平比較：＜0.9 mm組、0.9～1.1 mm及＞1.1 mm組均顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；其中0.9～1.1 mm及＞1.1 mm組較＜0.9 mm組血清含量要高，0.9～1.1 mm與＞1.1 mm組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見表2。

表2 不同斑塊風(fēng)險(xiǎn)、IMT厚度患者血清ANGPTL2結(jié)果比較

2.3 血清ANGPTL2含量與血糖、血脂等指標(biāo)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示：CAS患者血清ANGPTL2水平與總膽固醇正相關(guān)（r=0.468，P=0.016），與甘油三酯正相關(guān)（r=0.551，P＜0.001），與低密度脂蛋白正相關(guān)（r=0.527，P＜0.001）。而同年齡、血糖、尿酸及高密度脂蛋白等指標(biāo)間未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。見表3。

3 討 論

IMT厚度增加及粥樣硬化性斑塊的形成是高血壓靶器官損害的常見原因之一，是心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)重要的預(yù)測指標(biāo)[5-6]。臨床上高血壓伴有CAS的發(fā)病率高，探索該類疾病密切相關(guān)的血清標(biāo)志物對風(fēng)險(xiǎn)評估、預(yù)后判斷意義重大。目前對CAS的病理生理機(jī)制研究的主流觀點(diǎn)認(rèn)為是血管組織內(nèi)持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng)，其過程涉及到細(xì)胞增殖、胞外基質(zhì)降解、微血管病變及內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)等因素[7-8]。ANGPTL2作為心血管系統(tǒng)疾病中研究熱點(diǎn)，目前多項(xiàng)研究證實(shí)它不僅廣泛參與上述環(huán)節(jié)，還可以通過誘導(dǎo)促炎反應(yīng)、調(diào)節(jié)血脂代謝（如升高總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平）等方面促進(jìn)粥樣硬化的病變進(jìn)程[2，7]。因此，本研究以伴有CAS的高血壓患者為研究對象，基于血清層面探索血清中ANGPTL2的臨床價(jià)值。

本研究首先依據(jù)斑塊風(fēng)險(xiǎn)及IMT厚度對其與CAS患者臨床資料間關(guān)系做一分析。我們觀察到斑塊風(fēng)險(xiǎn)形成、IMT厚度均與總膽固醇、尿酸含量密切相關(guān)，而與性別、糖尿病病史等因素?zé)o明顯相關(guān)性；此外，我們還發(fā)現(xiàn)低密度脂蛋白及甘油三酯等指標(biāo)同IMT厚度高度相關(guān)。本研究觀察到的高尿酸和高風(fēng)險(xiǎn)斑塊之間的相關(guān)性和Takayama等[9]研究結(jié)果較一致，目前對其機(jī)制分析是CAS斑塊內(nèi)的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致斑塊去穩(wěn)定性的重要因素，而尿酸剛好也參與血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的促炎反應(yīng)途徑的調(diào)節(jié)過程。

表3 血清ANGPTL2水平與血糖、血脂等指標(biāo)相關(guān)性分析

ANGPTL2是內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)和CAS疾病中斑塊演變的重要調(diào)節(jié)因子，F(xiàn)arhat等[4]從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕弦灿^察到高表達(dá)的ANGPTL2可以大大地增加CAS斑塊的面積，從而顯著地增加發(fā)生心腦血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。本研究從血清層面分析ANGPTL2與上述各亞組患者之間的關(guān)系，結(jié)果顯示CAS患者血清中ANGPTL2不僅顯著高于健康對照組，而且其表達(dá)含量的差異與不同斑塊風(fēng)險(xiǎn)組、不同IMT厚度間存在關(guān)聯(lián)。高風(fēng)險(xiǎn)斑塊組及IMT厚度增加明顯的CAS患者血清ANGPTL2含量均顯著高于其他各亞組。據(jù)我們所知這是首個(gè)報(bào)道高血壓伴有CAS患者血清中ANGPTL2與斑塊風(fēng)險(xiǎn)、IMT厚度之間關(guān)系的研究。C-反應(yīng)蛋白（CRP）是動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)的重要標(biāo)志物，徐索文等[10]研究者發(fā)現(xiàn)ANGPTL2蛋白水平與血清CRP水平呈正相關(guān)。類似地，F(xiàn)arhat等[2，11]研究者在觀察冠狀動(dòng)脈疾?。–AD）中循環(huán)ANGPTL2的變化規(guī)律時(shí)發(fā)現(xiàn)，CAD患者ANGPTL2的含量不僅明顯高于健康受試者，而且其表達(dá)含量升高的幅度和冠脈病變的嚴(yán)重程度成正相關(guān)。綜上結(jié)果我們認(rèn)為血清ANGPTL2或可作為理想的標(biāo)記物去監(jiān)測伴有CAS高血壓患者斑塊形成的進(jìn)展和預(yù)后的判斷。

本研究觀察到影響CAS患者血清ANGPTL2表達(dá)水平的相關(guān)因素有總膽固醇、低密度脂蛋白和甘油三酯等指標(biāo)。近年來研究發(fā)現(xiàn)血管病變與血管外周脂肪組織（PVAT）密切相關(guān)，PVAT分泌的促炎和抗炎因子均可直接影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[12]。實(shí)驗(yàn)證明PVAT的旁分泌ANGPTL2可以參與血管的重建以及血管損傷誘導(dǎo)的內(nèi)膜增生的過程[13]。粥樣斑塊的慢性炎癥反應(yīng)過程中，ANGPTL2參與其中發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)主要依賴整合素受體，從而促進(jìn)細(xì)胞間粘附因子的表達(dá)上調(diào)和介導(dǎo)炎性反應(yīng)。這點(diǎn)和上述報(bào)道的研究者觀察到的結(jié)論類似，他們證實(shí)了ANGPTL2介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可以升高血漿總膽固醇、低密度脂蛋白的水平，從而加重粥樣硬化的進(jìn)程。

綜上所述，伴有CAS的高血壓患者血清中ANGPTL2的表達(dá)水平同血脂指標(biāo)密切相關(guān)，其水平的改變可一定程度反映頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展。ANGPTL2參與粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的深入機(jī)制還有待后續(xù)研究，另外，本研究觀察到血清ANGPTL2的臨床價(jià)值還有待更多前瞻性研究給以證實(shí)和明確。

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ObjectiveTo explore the relationship between serum vascular angiopoietin-like protein 2(ANGPTL2) in hypertension patients with carotid atherosclerosis (CAS) and plaques,carotid intima-media thickness(IMT).Methods From June 2011 to June 2012,serum ANGPTL2 expression was investigated in 127 patients with CAS and 59 healthy nornlal controls by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technique.The assessment of the degree of carotid atherosclerosis was based on the risk of plaques and IMT thickness.Results According to the plaque risk,all patients were divided into three groups: non-plaque group (47 cases),lowrisk plaque group (38 cases) and high-risk plaque group (42 cases).According to IMT thickness,all patients were also divided into three groups: T1 group (＜0.9mm,46 cases),T2 group (0.9-1.1mm,44 cases),T3 group (＞ 1.1mm,37 cases).High-risk plaque was signi fi cantly associated witha history of smoking (P = 0.042),uric acid (P = 0.033) and total cholesterol (P = 0.029); IMT thickness was significantly correlated with total cholesterol (P ＜0.001),LDL (P= 0.018),triglycerides (P = 0.026) and uric acid (P = 0.011).Serum ANGPTL2 levels in hypertension patients were signi fi cantly higher than in healthy controls (1944.8 ± 195.3 vs.979.7 ± 155.3,P ＜0.001); There were significant differences betweenfidderent plaque groups,IMT group and control group according to the serum ANGPTL2 levels (all P ＜0.001).With an increased risk of plaque and IMT thickening,serum ANGPTL2 showed gradually increasing trend.Spearman correlation analysis showed that serum ANGPTL2 levels were positively correlated with total cholesterol (r= 0.468,P = 0.016),triglycerides (r = 0.551,P ＜0.001) and LDL (r = 0.527,P ＜0.001).Conclusion The expression levels of serum lipid levels in hypertension patients with CAS are closely related ANGPTL2,the change of serum ANGPTL2 may reflect the development status of carotid atherosclerotic plaques.

Carotid atherosclerosis;Hypertension;Angiopoietin-like protein 2;Serum

R544.1

B

ISSN.2095-8242.2017.065.12748.04

本文編輯：吳玲麗