王 靜

（江蘇省邳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 徐州 221300）

·臨床交流·

感染性標(biāo)本涂片鏡檢與分離培養(yǎng)相關(guān)性研究

王 靜

（江蘇省邳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 徐州 221300）

目的探討感染性標(biāo)本的涂片鏡檢和分離培養(yǎng)的相關(guān)性。方法 應(yīng)用接種環(huán)無(wú)菌操作選取各個(gè)菌種不同稀釋度的菌液一環(huán)進(jìn)行涂片，顯微鏡油鏡下對(duì)每張涂片進(jìn)行觀察，對(duì)檢出情況進(jìn)行記錄，計(jì)算陽(yáng)性的檢出率。通過無(wú)菌吸管選取0.1毫升各菌種不同稀釋度菌液，進(jìn)行分別劃線，接種在沙保羅瓊脂平板或者是營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，24小時(shí)后計(jì)算菌落數(shù)。結(jié)果 經(jīng)過涂片染色的鏡檢可以獲取陽(yáng)性的結(jié)果，金黃色葡萄球菌檢出率相對(duì)較高。經(jīng)過分離培養(yǎng)可以獲取陽(yáng)性的結(jié)果。結(jié)論 在較低濃度念珠菌或細(xì)菌感染標(biāo)本分離培養(yǎng)中，需要按照患者臨床的癥狀或其他檢查的情況考慮實(shí)施多次病原體的分離培養(yǎng)，防止發(fā)生漏診的情況，為臨床診治提供參考。

感染性標(biāo)本；涂片鏡檢；分離培養(yǎng)；相關(guān)性

標(biāo)本直接涂片的染色鏡檢與接種培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)在臨床上有著重要作用，屬于真菌感染或是細(xì)菌感染疾病病原學(xué)的診斷方式。因?yàn)橹苯油科溺R檢主要優(yōu)勢(shì)是早期檢驗(yàn)快速與簡(jiǎn)便等，所以在結(jié)核的分枝桿菌中有著廣泛應(yīng)用，然而，直接涂片的鏡檢對(duì)于非抗酸性真菌感染或是細(xì)菌感染標(biāo)本診斷價(jià)值與接種培養(yǎng)基的培育是否有相關(guān)性，報(bào)道比較少[1]。對(duì)此，本文深入研究了感染性標(biāo)本的涂片鏡檢和分離培養(yǎng)的相關(guān)性，現(xiàn)作以下陳述。

1 資料與方法

1.1 菌種

大腸埃希菌（E.coii，ATCC25922）與金黃色葡萄球菌（S.aureus，ATCC261125）均通過中國(guó)藥品生物制品檢定提供，白色念珠菌（C. aibicans）是本室保存的菌種。應(yīng)用比濁方法把各菌種配制為3×109/mL濃度菌液，然后添加無(wú)菌的生理鹽水使其變成10-9/mL、10-1/mL、10-8/mL、10-2/mL、10-7/mL、10-3/mL、10-6/mL、5×10-3/mL、5×10-5/mL、110-4/mL、0-5/mL與5×10-4/mL稀釋度。

1.2 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂，經(jīng)衛(wèi)生部上海生物制品研究所提供，根據(jù)說明書來(lái)配置與傾注平板。而按沙保羅瓊脂培養(yǎng)基需要根據(jù)相關(guān)要求進(jìn)行配制以及傾注平板，整個(gè)培養(yǎng)過程需要嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 關(guān)于涂片染色的鏡檢

應(yīng)用接種環(huán)無(wú)菌操作選取各個(gè)菌種不同稀釋度的菌液一環(huán)進(jìn)行涂片，不同稀釋程度涂片為10張，在革蘭染色以后，于顯微鏡油鏡下對(duì)每張涂片進(jìn)行觀察，一個(gè)涂片10個(gè)視野，對(duì)檢出情況進(jìn)行記錄，同時(shí)對(duì)陽(yáng)性的檢出率進(jìn)行計(jì)算。

1.4 分離的培養(yǎng)

通過無(wú)菌吸管選取0.1毫升各菌種不同稀釋度菌液，進(jìn)行分別劃線，接種在沙保羅瓊脂平板或者是營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板。每一個(gè)稀釋液程度接種三個(gè)平板，在溫箱中37攝氏度條件下培養(yǎng)，24小時(shí)以后對(duì)菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié) 果

2.1 分析涂片染色檢出率

白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過23200/mL時(shí)，經(jīng)過涂片染色的鏡檢可以獲取陽(yáng)性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在23200/mL以內(nèi)，就無(wú)法檢出細(xì)菌；當(dāng)菌液稀釋度為5×l0-3時(shí)，還可以檢出部分大腸埃希菌與金黃色葡萄球菌，但是缺乏檢出白色念珠菌，其中金黃色葡萄球菌檢出率相對(duì)較高，見表1。

2.2 分離培養(yǎng)檢出率

白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過l90/mL 時(shí)，經(jīng)過分離培養(yǎng)都可以獲取陽(yáng)性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在l90/mL以內(nèi)，經(jīng)過分離培養(yǎng)無(wú)法得出大腸埃希菌生長(zhǎng)情況；當(dāng)菌液稀釋度為l0-7、l0-8、l0-9時(shí)，可以檢出部分金黃色葡萄球菌與白色念珠菌，但是無(wú)法檢出大腸埃希菌，見表2。

表2 分離培養(yǎng)檢出率（n，%）

3 討 論

在淋病與結(jié)核病等感染性疾病診斷中，直接涂片的染色鏡檢為早期快速病原學(xué)的診斷常用方式[2]。相關(guān)文獻(xiàn)中報(bào)道，在肺結(jié)核的患者痰液標(biāo)本之中，抗酸性細(xì)菌含量在超過5×l04/mL之時(shí)，才能夠經(jīng)過涂片染色的鏡檢檢出，但是在真菌感染的標(biāo)本或是非抗酸性細(xì)菌診斷中則比較少用[3]。一般情況下，在尿液或是痰液標(biāo)本之中，細(xì)菌含量在l05/mL以內(nèi)時(shí)，即便應(yīng)用分離培養(yǎng)方式，也容易出現(xiàn)陰性情況，或是因?yàn)槲廴緦?dǎo)致細(xì)菌感染檢查受到影響[4]。本次研究顯示，白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過23200/mL時(shí)，經(jīng)過涂片染色的鏡檢可以獲取陽(yáng)性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在23200/mL以內(nèi)，就無(wú)法檢出細(xì)菌；當(dāng)菌液稀釋度為5×l0-3時(shí)，還可以檢出部分大腸埃希菌與金黃色葡萄球菌，但是缺乏檢出白色念珠菌，其中金黃色葡萄球菌檢出率相對(duì)較高；白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過l90/mL時(shí)，經(jīng)過分離培養(yǎng)都可以獲取陽(yáng)性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在l90/mL以內(nèi)，經(jīng)過分離培養(yǎng)無(wú)法得出大腸埃希菌生長(zhǎng)情況；當(dāng)菌液稀釋度為l0-7、l0-8、l0-9時(shí)，可以檢出部分金黃色葡萄球菌與白色念珠菌，但是無(wú)法檢出大腸埃希菌。

本文研究結(jié)果顯示涂片染色的鏡檢在細(xì)菌或者是念珠菌菌落數(shù)超過23200/mL的標(biāo)本中比較適用，分離培養(yǎng)在念珠菌或是細(xì)菌菌落數(shù)超過l90/mL的標(biāo)本檢驗(yàn)中比較適用。分離培養(yǎng)和涂片染色鏡檢對(duì)標(biāo)本之中念珠菌、細(xì)菌檢出情況有著不一致性，其可能和所接觸標(biāo)本量、觀察方法有著相關(guān)性。即便分離培養(yǎng)的方法可以將標(biāo)本之中病原體檢出，但是如果標(biāo)本之中念珠菌或是細(xì)菌數(shù)量比較少時(shí)，會(huì)發(fā)生漏診情況。所以在經(jīng)過治療以后或是慢性感染癥患者年菌株量比較少標(biāo)本之中，需要選擇至少0.1毫升標(biāo)本接種的培養(yǎng)基，方便分離培養(yǎng)的方法對(duì)病原體進(jìn)行檢查，整個(gè)檢查過程需要與患者治療情況、病史相結(jié)合，確保檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本次研究表明，當(dāng)不同菌種處于同一培養(yǎng)基上時(shí)，所檢出或是生長(zhǎng)情況存在差異，這種差異容易引起分離培養(yǎng)的漏診。就算在同一種菌種與同一種濃度下，在經(jīng)過多次分離的培養(yǎng)以后，所檢出細(xì)菌數(shù)量同樣存在著巨大差異。因此，在較低濃度念珠菌或者是細(xì)菌感染標(biāo)本分離培養(yǎng)中，需要按照患者臨床的癥狀或是其他檢查的情況考慮實(shí)施多次病原體的分離培養(yǎng)，防止發(fā)生漏診的情況，為臨床診治提供參考。

[1]張 肖,朱同華,沈國(guó)榮.痰標(biāo)本分析前涂片鏡檢的臨床價(jià)值分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,38(11):1559-1561.

[2]劉 瑜,趙亞玲,滑 鑫.標(biāo)本涂片鏡檢與培養(yǎng)結(jié)果的關(guān)系分析[J].中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育,2015,7(16):18-19.

[3]汪林嬌,易 薇,趙曙剛.痰標(biāo)本涂片鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果符合性的分[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2016,6(19):139-141.

[4]鄧 沖.分離培養(yǎng)法與涂片鏡檢法在診斷女性淋球菌感染的臨床應(yīng)用比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,35(14):1853-1854.

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ISSN.2095-8242.2017.065.12686.02

本文編輯：王雨辰