多 甜，張 超，趙曉進(jìn)，李 莉，裴 超，呂愛軍

( 河南師范大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453007 )

多 甜，張 超，趙曉進(jìn)，李 莉，裴 超，呂愛軍

( 河南師范大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453007 )

魚諾卡氏菌；諾卡氏菌??；結(jié)節(jié)病

諾卡氏菌(Nocardiasp.)是一種革蘭氏陽性絲狀桿菌，具有抗鹽、堿,耐干旱的特點(diǎn)，廣泛分布于土壤、水體、空氣、腐爛植物和動(dòng)物糞便中[1-2]。該菌為條件致病菌，其中某些種類為人畜共患[1]。目前，已發(fā)現(xiàn)魚諾卡氏菌(N.seriolae)、星狀諾卡氏菌(N.asteroids)、殺鮭諾卡氏菌(N.salmonicida)和粗形諾卡氏菌(N.crassostreae)對(duì)魚類具有致病性[1,3]。魚諾卡氏菌是魚類諾卡氏菌病的主要病原，多數(shù)為腐生，少數(shù)營(yíng)寄生[4]。水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物一旦感染該菌，患病周期長(zhǎng)、治愈率低、累積死亡率高，給我國(guó)的加州鱸(Microperussalmoides)、烏鱧(Channaargus)等特種水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失[1,5]。筆者綜述了魚諾卡氏菌的國(guó)內(nèi)外研究概況，旨在為該病的有效防控提供參考。

1 分類與命名

Shimahara等[9-11]對(duì)魚諾卡氏菌臺(tái)灣分離株和日本分離株進(jìn)行了表型和基因型研究，發(fā)現(xiàn)臺(tái)灣分離株多呈現(xiàn)α-葡糖苷酶陽性，日本分離株多呈陰性，酶切電泳圖譜表現(xiàn)出豐富的基因多樣性。滿其蒙等[12]對(duì)15株魚諾卡氏菌進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析發(fā)現(xiàn)，這些菌株聚成不同的亞群。以上結(jié)果都表明魚諾卡氏菌具有多種表型和基因型，其分型與地域差異與宿主關(guān)系不大。Ismail等[13]研究發(fā)現(xiàn)，α-葡糖苷酶陽性菌株對(duì)鹽酸土霉素有抗性，對(duì)紅霉素敏感，而α-葡糖苷酶陰性菌株對(duì)鹽酸土霉素敏感，絕大部分(97.9%)對(duì)紅霉素有抗性；抗鹽酸土霉素菌株都含有四環(huán)素耐藥基因tet(K) 或tet(L)，抗紅霉素菌株都含有大環(huán)內(nèi)酯類抗性基因mef(A) 和 msr(D)，設(shè)想從α-葡糖苷酶活性和藥敏特性之間的關(guān)系來區(qū)分流行株的表型。

2 生理生化特性

2.1 培養(yǎng)特性

2.2 生理生化特征

菌株過氧化氫酶、硝酸鹽還原和七葉苷水解呈陽性，氧化酶、脲酶生產(chǎn)、明膠液化和淀粉水解呈陰性，酪蛋白、腺嘌呤、彈性蛋白、次黃嘌呤、黃嘌呤和酪氨酸分解試驗(yàn)呈陰性，α-葡糖苷酶測(cè)試呈陽性或呈陰性[5,9]。可以利用檸檬酸作為唯一碳源生長(zhǎng)，阿拉伯糖、山梨醇和鼠李糖不能作為唯一碳源[5,14,18]。4%的NaCl條件下不能生長(zhǎng)，45 ℃或50 ℃存活不超過8 h[5]。

3 臨床癥狀

加州鱸、烏鱧、大黃魚(Pseudocisenacrocea)、五條、鯔魚(Mugilcephalus)、條紋鱸(Moronesaxatilis)、紅鰭笛鯛(Lutjanuserythropterus)、石斑魚(Epinephelussp.)、布氏鯧鲹(Trachinotusblochii)、金錢魚(Scatophagusargus)、海鱸(Lateolabraxjaponicas)、褐牙鲆、卵形鯧鲹(T.ovatus)、花身(Teraponjarbua)等均為易感魚類[9,19-22]。春末秋初，水溫升至約22 ℃時(shí)易發(fā)病，病原主要通過口腔、鰓或創(chuàng)傷感染[5-6,23]。病魚發(fā)病初期僅表現(xiàn)為反應(yīng)遲鈍、食欲下降、靠于池塘邊沿，隨著病情加重，體表變黑、腹部膨大、鰭條充血，心臟、脾臟、腎臟、肝臟等內(nèi)臟器官出現(xiàn)直徑1～5 mm的白色結(jié)節(jié)，有的病魚鰓蓋內(nèi)緣或鰓絲上出現(xiàn)結(jié)節(jié)，腹腔內(nèi)有纖維瘤[6,24]?；剪~諾卡氏菌病的魚易繼發(fā)遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)或氣單胞菌(Aeromonassp.)感染，加速死亡[25]。王國(guó)良等[26]研究發(fā)現(xiàn)網(wǎng)箱大黃魚自然發(fā)病的平均死亡率為15%，注射和浸泡感染有致病性，口服不能致病，說明自然狀態(tài)下該菌通過損傷或鰓部感染的幾率較大，而通過餌料感染的幾率較小。袁思平等[14]研究發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖魚類感染魚諾卡氏菌的自然發(fā)病率為15%～30%，嚴(yán)重的可達(dá)60%，而人工感染的死亡率高達(dá)90%以上[7]。

4 致病機(jī)理

病變器官都是與血液循環(huán)有密切聯(lián)系的器官，說明該菌通過血液循環(huán)到達(dá)各個(gè)器官，這些器官是魚類進(jìn)行物質(zhì)代謝、消化吸收、排泄和免疫等生理活動(dòng)的主要器官，組織器官損傷致使酶活力發(fā)生顯著變化，影響水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物正常的生理代謝，導(dǎo)致機(jī)體貧血，營(yíng)養(yǎng)不良，免疫力下降[28]。孫東雨等[6,29]研究了魚諾卡氏菌對(duì)烏鱧血液指標(biāo)的影響，烏鱧感染諾卡氏菌后，初期血液中的血細(xì)胞數(shù)量激增，而隨著感染的延續(xù)，魚體造血機(jī)能受到抑制，腎臟、脾臟等貯血器官遭到破壞，血液中新生紅細(xì)胞比例減少，血細(xì)胞趨于老化，導(dǎo)致了魚類血細(xì)胞數(shù)量顯著下降、血細(xì)胞脆性上升，非特異性免疫受到抑制。另外，感染烏鱧血清中各種酶活力均發(fā)生了顯著的變化，說明病魚的肝臟、腎臟、心臟、脾臟等主要器官嚴(yán)重?fù)p傷，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝、免疫等方面的正常功能受到了嚴(yán)重?fù)p害[6]。

5 檢測(cè)與防治

5.1 檢測(cè)

利用PCR技術(shù)，以16S rDNA為模板，采用通用引物或特異性引物擴(kuò)增目的片段，進(jìn)行基因測(cè)序，能夠有效檢測(cè)該菌[30]?；?6S～23S rDNA基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)的環(huán)介導(dǎo)恒溫基因擴(kuò)增檢測(cè)法比普通PCR更敏感，該方法更加省時(shí)省力，既能檢測(cè)到有臨床癥狀的魚，又能檢測(cè)到隱性感染的魚，為早治療提供了依據(jù)[5,31-33]。王國(guó)良等[34]建立了魚諾卡氏菌的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，該方法具有特異、敏感等優(yōu)點(diǎn)，亦可用于病原的早期檢測(cè)。

5.2 藥物治療

5.3 預(yù)防

全肽聚糖是一種免疫增強(qiáng)劑，彭程遠(yuǎn)等[29]研究表明,魚諾卡氏菌WPG腹腔注射免疫21 d以上對(duì)烏鱧諾卡氏菌病有明顯的保護(hù)作用。疫苗是預(yù)防傳染病的有效方法，Shimahara等[39]采用魚諾卡氏菌福爾馬林全菌滅活苗免疫加州鱸，檢測(cè)到魚體的抗體滴度有明顯升高，但是免疫保護(hù)率較低(<20%)。采用同屬近緣種N.soli、N.fluminea和N.uniformis作為活疫苗免疫五條，弱毒魚諾卡氏菌株攻毒，表現(xiàn)出一定的免疫保護(hù)作用(相對(duì)免疫保護(hù)率65.4%)[40]。牛分枝桿菌(Mycobacteriumbovis)卡介苗是一種減毒活疫苗，對(duì)哺乳動(dòng)物的多種傳染病(包括諾卡氏菌病)具有免疫保護(hù)作用，Kato等[41]發(fā)現(xiàn)卡介苗能夠誘導(dǎo)褐牙鲆產(chǎn)生非特異性免疫應(yīng)答，魚諾卡氏菌攻毒后，免疫保護(hù)率達(dá)78.6%。

6 基因組學(xué)

7 展 望

[2] Bennur T, Kumar A R, Zinjarde S, et al. Nocardiopsis species: incidence, ecological roles and adaptations[J]. Microbiological Research, 2015(174):33-47.

[3] 陳言峰，范祖游，王子濤，等. 水產(chǎn)動(dòng)物諾卡氏菌病防控技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43(13)：170-172.

[4] 王國(guó)良，袁思平，金珊. 大黃魚結(jié)節(jié)病病原菌—諾卡氏菌的鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)， 2006，13(3)：410-414.

[5] Wang G L, Xu Y J, Jin S, et al. Nocardiosis in snakehead,OphiocephalusargusCantor[J]. Aquaculture, 2007, 271(1):54-60.

[6] 孫東雨，沈理，金珊，等.魚諾卡氏菌對(duì)烏鱧血液指標(biāo)的影響[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2012， 31(3)：289-294.

[7] Kubota S, Karita T, Nakamura Y, et al. Nocardial infection in cultured yellowtails (SeriolaquinqueruiataandS.purpurascens) Ⅰ. Bacteriological study [J]. Fish Pathology, 1968, 3(1):16-23.

[8] Kudo T, Hatai K, Seino A.Nocardiaseriolaesp. nov. causing nocardiosis of cultured fish[J]. International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38(2):173-178.

[9] Shimahara Y, Huang Y F, Tsai M A,et al. Genotypic and phenotypic analysis of fish pathogen,Nocardiaseriolae, isolated in Taiwan[J]. Aquaculture, 2009, 294(3):165-171.

[10] Shimahara Y, Nakamura A, Chen S C, et al.Enzymatic profiles of the bacterial fish pathogen,Nocardiaseriolae, analyzed by the RapID Yeast Plus System[J]. Bulletin of the Faculty of Agriculture, Miyazaki University, 2008(54):39-45.

[11] Shimahara Y, Nakamura A, Nomoto R, et al. Genetic and phenotypic comparison ofNocardiaseriolae, isolated from fish in Japan[J]. Journal of Fish Diseases, 2008, 31(7):481-488.

[12] 滿其蒙，馮娟，區(qū)又君，等. 15株魚源致病性鯽魚諾卡氏菌的聚類分析[J]. 南方水產(chǎn)科學(xué)，2013，9(5)：86-92.

[13] Ismail T F, Takeshita A, Umeda N, et al. Application of α-glucosidase activity and drug susceptibility tests to epidemiological studies on the fish pathogenNocardiaseriolae[J]. Fisheries Science, 2011, 77(1):113-118.

[14] 袁思平，王國(guó)良，金珊. 養(yǎng)殖魚類致病諾卡氏菌研究進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(2)：137-141.

[15] 夏立群，王蓓，夏洪麗，等.魚諾卡氏菌培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基的優(yōu)化[J]. 南方水產(chǎn)科學(xué)，2013，9(3)：51-56.

[16] Shimahara Y, Huang Y F, Li Y L, et al. Growth characteristics and morphological changes of fish pathogenNocardiaseriolaein submerged culture[J]. Aquaculture Science, 2010, 58 (3):429-431.

[17] 彭程遠(yuǎn)，解俊，王錫波，等.魚諾卡氏菌全肽聚糖的提取及鑒定[J]. 寧波大學(xué)學(xué)報(bào)：理工版， 2015，28(1)：21-24.

[18] Wang G L, Yuan S P, Jin S. Nocardiosis in large yellow croaker,Larimichthyscrocea(Richardson)[J]. Journal of Fish Diseases, 2005, 28(6):339-345.

[19] Chen S, Lee J, Lai C, et al. Nocardiosis in sea bass,Lateolabraxjaponicus, in Taiwan[J]. Journal of Fish Diseases, 2001, 23(5):299-307.

[20] Lee D C, Cho M Y, Park S I. A review of nocardial infection in fishes[J]. Journal of Fish Pathology, 2007, 20(1):1-23.

[21] 滿其蒙，徐力文，區(qū)又君，等.魚諾卡氏菌感染卵形鯧鲹的組織病理學(xué)研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39(21)：132-135.

[22] Wang P C, Chen S D, Tsai M A, et al.Nocardiaseriolaeinfection in the three striped tigerfish,Teraponjarbua(Forssk?l)[J]. Journal of Fish Diseases, 2009, 32(4):301-310.

[23] Itano T, Kawakami H, Kono T, et al. Estimation of the time forNocardiaseriolaeinfection of cultured yellowtail[J]. Fish Pathology, 2008, 43(2):86-88.

[24] Labrie L, Ng J, Tan Z, et al. Nocardial infections in fish: an emerging problem in both freshwater and marine aquaculture systems in Asia[G]//Bondad-Reantaso M G, Mohan C V, Crumlish M, et al. Diseases in Asian aquaculture Ⅵ, Manila: Fish Health Section, Asian Fisheries Society, 2008:297-312.

[25] 唐紹林，雷燕，戚瑞榮，等. 海水魚諾卡氏菌病的流行特點(diǎn)和防治[J]. 海洋與漁業(yè)：水產(chǎn)前沿，2015(5)：79-80.

[26] 王國(guó)良，袁思平，金珊. 網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚諾卡氏菌病的初步研究[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2006，30(1)：103-107.

[27] 王玉群，駱豫江，張華，等. 加州鱸爛身、內(nèi)臟白點(diǎn)病(諾卡氏菌病)的治療[J]. 科學(xué)養(yǎng)魚， 2010(10)：79.

[28] 安樹偉，袁思平，王國(guó)良. 患諾卡氏菌病的大黃魚幾種主要組織的酶活力變化分析[J]. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2012，33(2)：43-48.

[29] 彭程遠(yuǎn)，解俊，金珊，等.魚諾卡氏菌全肽聚糖對(duì)烏鱧非特異性免疫力的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2013，25(9)：2150-2159.

[30] Miyoshi Y，Suzuki S. A PCR method to detectNocardiaseriolaein fish samples[J]. Fish Pathology, 2003, 38(3):93-97.

[31] Itano T, Kawakami H, Kono T, et al. Detection of fish nocardiosis by loop-mediated isothermal amplification[J]. Journal of Applied Microbiology, 2006, 100(6):1381-1387.

[33] 王國(guó)良, 劉璐, 徐益軍. 魚類致病魚諾卡氏菌(Nocardiaseriolae)的LAMP檢測(cè)技術(shù)建立與應(yīng)用[J]. 海洋與湖沼, 2011, 42(1):27-31.

[34] 王國(guó)良, 劉璐, 李思源.魚諾卡氏菌SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2012，36(4)：377-378.

[35] 彭開松，佘銳萍，祁克宗，等. 暗紋東方鲀脂肪肝并發(fā)諾卡氏菌病[J]. 水產(chǎn)科學(xué)，2008，27(12)：629-632.

[36] Wang P C, Tsai M A, Liang Y C, et al.Nocardiaseriolae, a causative agent of systematic granuloma in spotted butterfish,Scatophagusargus, Linn[J]. African Journal of Microbiology Research, 2014, 8(38): 3441-3452.

[37] Imajoh M, Sukeda M, Shimizu M, et al. Draft genome sequence of erythromycin- and oxytetracycline-sensitiveNocardiaseriolaestrain U-1(NBRC 110359)[J]. Genome Announcements, 2016, 4(1):e01606-e01615.

[38] Itano T, Kawakami H. Drug susceptibility of recent isolates ofNocardiaseriolaefrom cultured fish[J]. Fish Pathology, 2002, 37(3):152-153.

[39] Shimahara Y, Huang Y F, Tsai M A, et al. Immune response of largemouth bass,Micropterussalmoides, to whole cells of differentNocardiaseriolaestrains[J]. Fisheries Science, 2010, 76(3): 489-494.

[40] Itano T, Kawakami H, Kono T, et al. Live vaccine trials against nocardiosis in yellowtailSeriolaquinqueradiata[J]. Aquaculture, 2006, 261(4):1175-1180.

[41] Kato G, Kondo H, Aoki T, et al.MycobacteriumbovisBCG vaccine induces non-specific immune responses in Japanese flounder againstNocardiaseriolae[J]. Fish & Shellfish Immunology, 2012,33(2):243-250.

AReviewofResearchProgressofNocardiaseriolae

DUO Tian, ZHANG Chao, ZHAO Xiaojin, LI Li, PEI Chao, Lü Aijun

( College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China )

Nocardiaseriolae; nocardiosis; granulomtous lesion

10.16378/j.cnki.1003-1111.2017.03.023

S941.99

C

1003-1111(2017)03-391-04

2016-06-16；

2016-09-12.

河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(142102110146)；河南師范大學(xué)博士科研啟動(dòng)金資助項(xiàng)目(qd13052)；河南師范大學(xué)國(guó)家級(jí)項(xiàng)目培育基金資助項(xiàng)目(2014).

多甜(1993-)，女，碩士研究生；研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖. E-mail：15237355832@163.com.通訊作者：張超(1981-)，男，副教授，博士；研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物病害與防控. E-mail：shandongneau@aliyun.com.